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1、光谱检验技术紫外可见分光光光谱检验技术紫外可见分光光度法度法第1页，此课件共42页哦学习目标学习目标理解紫外理解紫外-可见分光光度法的基本原理；掌可见分光光度法的基本原理；掌握吸收定律和吸收系数的含义；握吸收定律和吸收系数的含义；掌握紫外掌握紫外-可见分光光度计的基本类型与结可见分光光度计的基本类型与结构；掌握紫外构；掌握紫外-可见分光光度法的主要应用。可见分光光度法的主要应用。第2页，此课件共42页哦能使用紫外分光光度计测定药物的含量第3页，此课件共42页哦什么是非水滴定？有什么优点？举例说明碘量法测定的具体操作及注意事项？复习提问复习提问第4页，此课件共42页哦课程大纲课程大纲本节课内容紫
2、外分光光度法概述及基本原理紫外分光光度计主要部件及分类。应用示例第5页，此课件共42页哦一、概述及基本原理一、概述及基本原理第6页，此课件共42页哦E第7页，此课件共42页哦单色器单色器光源光源检测器检测器吸收池吸收池信号显信号显示系统示系统二、仪器主要部件及分类二、仪器主要部件及分类紫外-可见分光光度计基本结构由光源、单色器、吸收池、检测器、信号显示系统五个部分构成。主要部件第8页，此课件共42页哦第9页，此课件共42页哦 光源光源对光源的基本要求是应在对光源的基本要求是应在仪器操作所需的光谱区域仪器操作所需的光谱区域内能够发射连续辐射，有内能够发射连续辐射，有足够的辐射强度和良好的足够的辐
3、射强度和良好的稳定性，而且辐射能量随稳定性，而且辐射能量随波长的变化应尽可能小。波长的变化应尽可能小。分光光度计中常用的光源有热辐射光源和气体放电热辐射光源和气体放电光源两类。光源两类。热辐射光源用于可见光区，如钨丝灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。第10页，此课件共42页哦在近紫外区测定时常用氢灯和氘灯。它们可在在近紫外区测定时常用氢灯和氘灯。它们可在160 375 nm范围内产生连续光源。范围内产生连续光源。氘灯氘灯的灯管内充有氢的同位素的灯管内充有氢的同位素氘，它是紫外光区应用最广泛的一种光源，其光谱分布与氘，它是紫外光区应用最广泛的一种光源，其光谱分布与氢灯类似，但光
4、强度比相同功率的氢灯要大氢灯类似，但光强度比相同功率的氢灯要大35倍。倍。第11页，此课件共42页哦入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦透镜入射狭缝、准直镜、色散元件、聚焦透镜和出射狭缝组成和出射狭缝组成 (色散元件色散元件:棱镜和光栅棱镜和光栅)2.单色器单色器:第12页，此课件共42页哦1.入射狭缝 2.准直透镜 3.棱镜4.聚焦棱镜 5.出射狭缝第13页，此课件共42页哦3.光栅光栅 光栅分为透射光栅和反射光栅，常用的是反射光栅。反射光栅又可分为平面反射光栅（或称闪耀光栅）和凹面反射光栅。光栅由玻璃片或金属片制成，其上准确地刻有大量宽度和距离都相等的平行线条（刻痕），可近似地将它看成一系列等
5、宽度和等距离的透光狭缝。光栅是光栅是一种多狭缝部一种多狭缝部件，光栅光谱的产件，光栅光谱的产生是多狭缝干涉和生是多狭缝干涉和单狭缝衍射两者联单狭缝衍射两者联合作用的合作用的结果。结果。第14页，此课件共42页哦第15页，此课件共42页哦4.吸收池吸收池 吸收池用于盛放分析试样，一般有吸收池用于盛放分析试样，一般有石石英和玻璃英和玻璃材料两种。石英池适用材料两种。石英池适用于可见光区及紫外光区，玻璃吸于可见光区及紫外光区，玻璃吸收池只能用于可见光区。收池只能用于可见光区。为减少光的损失，为减少光的损失，吸收池吸收池的光学面的光学面 必须完全垂直必须完全垂直于于 光束方向光束方向。在。在 高精度的
6、分析测定中（紫外区尤其重高精度的分析测定中（紫外区尤其重要），吸收池要挑选配对。因为吸收要），吸收池要挑选配对。因为吸收池材料的本身吸光特征以及吸收池的池材料的本身吸光特征以及吸收池的光程长度的精度等对分析结果都有影光程长度的精度等对分析结果都有影响。响。第16页，此课件共42页哦5.检测器检测器功能：检测信号、测量单色光透过溶液后光强度功能：检测信号、测量单色光透过溶液后光强度变化的一种装置。变化的一种装置。常用：常用：光电池、光电管和光电倍增光电池、光电管和光电倍增管管等等 硒光电池硒光电池对光的敏感范围为对光的敏感范围为300800nm，其中又以其中又以500 600nm最为灵敏。这种光
7、最为灵敏。这种光电池的特点是能产生可直接推动微安表电池的特点是能产生可直接推动微安表或检流计的光电流，但由于容易出现疲或检流计的光电流，但由于容易出现疲劳效应而只能用于低档的分光光劳效应而只能用于低档的分光光 度度计中。计中。光电管光电管在紫外在紫外-可见分光光度计上应可见分光光度计上应用较为广泛。用较为广泛。光电倍增管光电倍增管是检测微弱光最是检测微弱光最常用的光电元件，它的灵敏常用的光电元件，它的灵敏度比一般的光电管要高度比一般的光电管要高200倍，倍，因此可使用较窄的单色器狭因此可使用较窄的单色器狭缝，从而对光谱的精细结构缝，从而对光谱的精细结构有较好的分辨能力。有较好的分辨能力。第17
8、页，此课件共42页哦6.信号显示系统信号显示系统第18页，此课件共42页哦第19页，此课件共42页哦第20页，此课件共42页哦第21页，此课件共42页哦第22页，此课件共42页哦紫紫外外-可可见见分分光光光光度度计计的的类类型型 1.单光束分光光度计 2.双光束分光光度计经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。经单色器经单色器分光后经反射分光后经反射镜分解为强度相等镜分解为强度相等的两束光，一束通过参比的两束光，一束通过参比池，一束通过样品池。光度计池，一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的
9、强度，能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函吸光度并作为波长的函数记录下来。数记录下来。第23页，此课件共42页哦双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动消除光源强度变化所引起的误差消除光源强度变化所引起的误差。3.双波长分光光度计由同一光源发出由同一光源发出的光被分成两束，分的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到别经过两个单色器，得到两束不同波长两束不同波
10、长（1和和 2）的单色）的单色光；利用切光器使两束光以一定的光；利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池，然后频率交替照射同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出统，最后由显示器显示出两个波长处的吸光两个波长处的吸光度差值度差值A第24页，此课件共42页哦 对于对于多组分混合物多组分混合物、混浊试样、混浊试样（如生物组织液）分析，以及（如生物组织液）分析，以及存在背景干扰或共存组分吸收存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用干扰的情况下，利用双波长分光双波长分光光度法光度法，往往能提高方法的灵敏，往往能提高方法的灵敏度和选择性。利用
11、双波长分光光度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。度计，能获得导数光谱。通过光学系统转换，使双通过光学系统转换，使双波长分光光度计能很方便地波长分光光度计能很方便地转化为单波长工作方式。如转化为单波长工作方式。如果能在果能在 1和和 2处分别记录处分别记录吸光度随时间变化的曲线，吸光度随时间变化的曲线，还能进行化学反应动力学还能进行化学反应动力学研究。研究。第25页，此课件共42页哦751-GD型紫外分光光度计第26页，此课件共42页哦SF2-752型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计特点：采用全息闪耀光栅单色器，波长精度高，单色性好、杂散光低等优点。采用3.5位LED数字显示
12、，T.A.C直读。第27页，此课件共42页哦紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计754 自动调整“0”和调整“100”具有超群的测量读数重现性和稳定性.第28页，此课件共42页哦紫外紫外760第29页，此课件共42页哦第30页，此课件共42页哦第31页，此课件共42页哦 对比吸收光谱特征数据对比吸收光谱特征数据 对比吸收度（或吸收系数）的比值对比吸收度（或吸收系数）的比值 对比吸收光谱的一致性对比吸收光谱的一致性 1.鉴别鉴别:2.杂质检查杂质检查:限量检查限量检查第32页，此课件共42页哦七、含量测定方法（1）对照品比较法）对照品比较法 按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对
13、照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分规定量的100%10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度，再计算含量。A样品/A对照c样品/c对照 c样品A样品c对照/A对照式中：A为吸收度值；c为测试液浓度（以mg/ml计）。第33页，此课件共42页哦（2）吸收系数法）吸收系数法 按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，吸收系数通常应大于100，并注意仪器的校正和检定。示例示例维生素B12的水溶液在361nm处的E值是207，盛于1cm吸收
14、池中，测得溶液的吸收度为0.414，则溶液浓度是多少？第34页，此课件共42页哦应用示例应用示例第35页，此课件共42页哦第36页，此课件共42页哦第37页，此课件共42页哦第38页，此课件共42页哦1.地塞米松磷酸钠2.尼可刹米注射液3.扑热息痛、扑尔敏、可的松 加水稀释成每1ml中含有20g的溶液，在242 1nm处测定吸收度，按吸收系数为290计算，即 得。加硫酸液适量稀释，在263 1nm处测定吸收度，按吸收系数为292计算，即 得。名称名称测法测法第39页，此课件共42页哦本课小结本课小结基本原理仪器主要部件主要应用吸收定律即溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比光源钨灯或碘钨灯、氢灯或氘灯单色器棱镜或光栅定性鉴别、杂质检查及含量测定紫紫外外 可可见见分分光光光光度度法法吸收池玻璃或石英吸收池检测器光电池、光电管、光电倍增管及二极管阵列检测器信号显示系统第40页，此课件共42页哦什么是吸收光谱？什么是朗伯比尔定律？摩尔吸收系数、百分比吸收系数？紫外可见分光光度计的组成？常用的检测器有哪几种？什么是单、双光束分光光度计？第41页，此课件共42页哦第42页，此课件共42页哦