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1、诊断酶学诊断酶学第1页，共96页，编辑于2022年，星期二 主要内容 六、工具酶及其临床应用六、工具酶及其临床应用一、酶的一般特征一、酶的一般特征 二、酶促反应动力学二、酶促反应动力学三、酶活性浓度测定技术三、酶活性浓度测定技术四、四、酶的免疫化学测定酶的免疫化学测定五、五、同工酶和亚型的测定同工酶和亚型的测定七、血清酶七、血清酶八、临床常用血清酶及其同工酶八、临床常用血清酶及其同工酶第2页，共96页，编辑于2022年，星期二一、基本概念一、基本概念一、基本概念一、基本概念 第一节第一节 酶的一般特征酶的一般特征 三、酶的命名分类及编号三、酶的命名分类及编号 二、酶的结构与催化作用二、酶的结构
2、与催化作用二、酶的结构与催化作用二、酶的结构与催化作用 返回章返回章 第3页，共96页，编辑于2022年，星期二1.1.1.1.酶、核酶。酶、核酶。酶、核酶。酶、核酶。2.2.2.2.酶酶酶酶的的的的催催催催化化化化特特特特性性性性：极极极极高高高高的的的的催催催催化化化化效效效效率率率率、高高高高度度度度的的的的特特特特异异异异性性性性、催催催催化化化化作作作作用用用用的可调节性。的可调节性。的可调节性。的可调节性。3.3.3.3.酶促反应：酶促反应：酶促反应：酶促反应：酶所催化的反应。酶所催化的反应。酶所催化的反应。酶所催化的反应。酶活性：酶活性：酶活性：酶活性：酶催化反应的能力。酶催化反
3、应的能力。酶催化反应的能力。酶催化反应的能力。酶活性单位：酶活性单位：酶活性单位：酶活性单位：在一定条件下使酶促反达到某一速度时所需在一定条件下使酶促反达到某一速度时所需在一定条件下使酶促反达到某一速度时所需在一定条件下使酶促反达到某一速度时所需要的酶量。要的酶量。要的酶量。要的酶量。底物底物底物底物(S)(S)(S)(S)：酶所作用的物质。酶所作用的物质。酶所作用的物质。酶所作用的物质。产物产物产物产物(P)(P)(P)(P)：酶促反应的生成物。酶促反应的生成物。酶促反应的生成物。酶促反应的生成物。酶的激活剂酶的激活剂酶的激活剂酶的激活剂:加速酶促反应的物质。加速酶促反应的物质。加速酶促反应
4、的物质。加速酶促反应的物质。酶的抑制剂酶的抑制剂酶的抑制剂酶的抑制剂:减慢或终止酶促反应的物质。减慢或终止酶促反应的物质。减慢或终止酶促反应的物质。减慢或终止酶促反应的物质。一、基本概念一、基本概念一、基本概念一、基本概念 返回节返回节 第4页，共96页，编辑于2022年，星期二二、酶的结构与催化作用二、酶的结构与催化作用 单纯酶和结合酶单纯酶和结合酶单纯酶和结合酶单纯酶和结合酶 单纯酶：单纯酶：单纯酶：单纯酶：只含多肽链，是单纯蛋白质。只含多肽链，是单纯蛋白质。只含多肽链，是单纯蛋白质。只含多肽链，是单纯蛋白质。结合酶：结合酶：结合酶：结合酶：由酶蛋白和辅因子组成。由酶蛋白和辅因子组成。由酶
5、蛋白和辅因子组成。由酶蛋白和辅因子组成。两者结合后形成的复合物称为全酶。两者结合后形成的复合物称为全酶。两者结合后形成的复合物称为全酶。两者结合后形成的复合物称为全酶。与酶蛋白结合疏松的称为辅酶。与酶蛋白结合疏松的称为辅酶。与酶蛋白结合疏松的称为辅酶。与酶蛋白结合疏松的称为辅酶。与酶蛋白结合牢固的称为辅基。与酶蛋白结合牢固的称为辅基。与酶蛋白结合牢固的称为辅基。与酶蛋白结合牢固的称为辅基。酶的活性中心酶的活性中心酶的活性中心酶的活性中心 酶与底物结合并将底物转变成产物发生在酶表面的一个特定酶与底物结合并将底物转变成产物发生在酶表面的一个特定酶与底物结合并将底物转变成产物发生在酶表面的一个特定酶
6、与底物结合并将底物转变成产物发生在酶表面的一个特定区域。区域。区域。区域。酶的催化作用机制酶的催化作用机制酶的催化作用机制酶的催化作用机制 诱导契合学说。诱导契合学说。诱导契合学说。诱导契合学说。返回节返回节 第5页，共96页，编辑于2022年，星期二临床应用酶临床应用酶临床应用酶临床应用酶ECECECEC编号编号编号编号习惯用名习惯用名习惯用名习惯用名英语缩写英语缩写英语缩写英语缩写ECECECEC编号编号编号编号习惯用名习惯用名习惯用名习惯用名英语缩写英语缩写英语缩写英语缩写1.1.1.271.1.1.271.1.1.271.1.1.27乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶LDLDLD
7、LD、LDHLDHLDHLDH2.7.3.22.7.3.22.7.3.22.7.3.2肌酸激酶肌酸激酶肌酸激酶肌酸激酶CKCKCKCK、CPKCPKCPKCPK1.1.1.371.1.1.371.1.1.371.1.1.37苹果酸脱氢酶苹果酸脱氢酶苹果酸脱氢酶苹果酸脱氢酶MDMDMDMD、MDHMDHMDHMDH3.1.1.33.1.1.33.1.1.33.1.1.3脂肪酶脂肪酶脂肪酶脂肪酶LPSLPSLPSLPS1.1.1.411.1.1.411.1.1.411.1.1.41异柠檬酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶ICDICDICDICD、ICDHICDHICDHICDH3.
8、1.1.83.1.1.83.1.1.83.1.1.8胆碱酯酶胆碱酯酶胆碱酯酶胆碱酯酶CHECHECHECHE1.1.1.491.1.1.491.1.1.491.1.1.496-6-6-6-磷酸葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶G6PDHG6PDHG6PDHG6PDH3.1.3.13.1.3.13.1.3.13.1.3.1碱性磷酸酶碱性磷酸酶碱性磷酸酶碱性磷酸酶ALPALPALPALP、AKPAKPAKPAKP1.4.1.31.4.1.31.4.1.31.4.1.3谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶GLDGLDGLDGLD、GLDHGLDHGLDHGLDH
9、3.1.3.23.1.3.23.1.3.23.1.3.2酸性磷酸酶酸性磷酸酶酸性磷酸酶酸性磷酸酶ACPACPACPACP1.4.3.41.4.3.41.4.3.41.4.3.4单氨氧化酶单氨氧化酶单氨氧化酶单氨氧化酶MODMODMODMOD3.1.3.53.1.3.53.1.3.53.1.3.55-5-5-5-核苷酸酶核苷酸酶核苷酸酶核苷酸酶5-NT5-NT5-NT5-NT2.1.3.32.1.3.32.1.3.32.1.3.3鸟氨酸氨甲酰基转移酶鸟氨酸氨甲酰基转移酶鸟氨酸氨甲酰基转移酶鸟氨酸氨甲酰基转移酶OCTOCTOCTOCT3.2.1.13.2.1.13.2.1.13.2.1.1-淀粉酶
10、淀粉酶淀粉酶淀粉酶AMYAMYAMYAMY、AMSAMSAMSAMS2.3.2.22.3.2.22.3.2.22.3.2.2-谷氨酰基转移酶谷氨酰基转移酶谷氨酰基转移酶谷氨酰基转移酶-GT-GT-GT-GT、GGTGGTGGTGGT3.2.1.303.2.1.303.2.1.303.2.1.30-N-N-N-N-乙酰乙酰乙酰乙酰(基基基基)-)-)-)-D D D D氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶NAGNAGNAGNAG2.4.1.12.4.1.12.4.1.12.4.1.1糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶GPGPGPGP3.2.1.513.2.1.5
11、13.2.1.513.2.1.51-L-L-L-L-岩藻糖苷酶岩藻糖苷酶岩藻糖苷酶岩藻糖苷酶-FU-FU-FU-FU、AFUAFUAFUAFU2.5.1.182.5.1.182.5.1.182.5.1.18谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶GSTGSTGSTGST3.4.23.13.4.23.13.4.23.13.4.23.1亮氨酸氨基肽酶亮氨酸氨基肽酶亮氨酸氨基肽酶亮氨酸氨基肽酶LAPLAPLAPLAP2.6.1.12.6.1.12.6.1.12.6.1.1门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶ASTASTASTAST、GOTGOTGO
12、TGOT4.1.2.134.1.2.134.1.2.134.1.2.13果糖二磷酸醛缩酶果糖二磷酸醛缩酶果糖二磷酸醛缩酶果糖二磷酸醛缩酶ALDALDALDALD2.6.1.22.6.1.22.6.1.22.6.1.2丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶ALTALTALTALT、GPTGPTGPTGPT三、酶的命名、分类及编号三、酶的命名、分类及编号三、酶的命名、分类及编号三、酶的命名、分类及编号 返回节返回节 第6页，共96页，编辑于2022年，星期二一、米曼氏方程一、米曼氏方程一、米曼氏方程一、米曼氏方程 酶促反应动力学酶促反应动力学 三、酶促反应进程曲线三、酶促
13、反应进程曲线 四、影响酶促反应的因素四、影响酶促反应的因素 二、二、二、二、KmKmKmKm与与与与Vmax Vmax Vmax Vmax 返回章返回章 第7页，共96页，编辑于2022年，星期二n n Michaelis Michaelis Michaelis Michaelis 和和和和MentenMentenMentenMenten提出的酶作用的中间产物学说提出的酶作用的中间产物学说提出的酶作用的中间产物学说提出的酶作用的中间产物学说:一、米曼氏方程一、米曼氏方程一、米曼氏方程一、米曼氏方程 E+SK1K2K3 返回节返回节 n n1913191319131913年提出了著名的酶促反应速
14、度与底物浓度关系的年提出了著名的酶促反应速度与底物浓度关系的年提出了著名的酶促反应速度与底物浓度关系的年提出了著名的酶促反应速度与底物浓度关系的 方程式，即米方程式，即米方程式，即米方程式，即米-曼氏方程曼氏方程曼氏方程曼氏方程(Michaelis-Menten(Michaelis-Menten(Michaelis-Menten(Michaelis-Menten equation):equation):equation):equation):E+PES第8页，共96页，编辑于2022年，星期二二、二、二、KmKm与与Vmax Vmax KmKmKmKm值：值：值：值：等于酶促反应的初速率为最大
15、速率等于酶促反应的初速率为最大速率等于酶促反应的初速率为最大速率等于酶促反应的初速率为最大速率VmaxVmaxVmaxVmax一半一半一半一半 时的底物浓度，即时的底物浓度，即时的底物浓度，即时的底物浓度，即V V V VVmaxVmaxVmaxVmax时，则时，则时，则时，则KmKmKmKmSSSS。KmKmKmKm 在临床上的应用：在临床上的应用：在临床上的应用：在临床上的应用：反映酶与底物的亲合力，且与亲合力成反比。反映酶与底物的亲合力，且与亲合力成反比。反映酶与底物的亲合力，且与亲合力成反比。反映酶与底物的亲合力，且与亲合力成反比。用来计算不同底物浓度时酶促反应速度相当于最用来计算不同
16、底物浓度时酶促反应速度相当于最用来计算不同底物浓度时酶促反应速度相当于最用来计算不同底物浓度时酶促反应速度相当于最 大反应速度的百分率。大反应速度的百分率。大反应速度的百分率。大反应速度的百分率。根据根据根据根据KmKmKmKm值选择酶的最适底物。值选择酶的最适底物。值选择酶的最适底物。值选择酶的最适底物。确定工具酶用量。确定工具酶用量。确定工具酶用量。确定工具酶用量。确定代谢酶系中的限速反应和作为鉴别酶的依确定代谢酶系中的限速反应和作为鉴别酶的依确定代谢酶系中的限速反应和作为鉴别酶的依确定代谢酶系中的限速反应和作为鉴别酶的依 据。据。据。据。VmaxVmaxVmaxVmax：酶完全被底物饱和
17、时的反应速度，代表了在一酶完全被底物饱和时的反应速度，代表了在一酶完全被底物饱和时的反应速度，代表了在一酶完全被底物饱和时的反应速度，代表了在一 定酶量下的最大反应速率定酶量下的最大反应速率定酶量下的最大反应速率定酶量下的最大反应速率。返回节返回节 第9页，共96页，编辑于2022年，星期二酶促反应时间进程曲线酶促反应时间进程曲线酶促反应时间进程曲线酶促反应时间进程曲线(S(S(S(S为底物，为底物，为底物，为底物，P P P P为产物为产物为产物为产物)第10页，共96页，编辑于2022年，星期二 三、酶促反应进程曲线三、酶促反应进程曲线三、酶促反应进程曲线 如如将将酶酶反反应应过过程程中中
18、测测得得的的产产物物PP或或底底物物SS变变化化量量对对时时间间作作图图，可可得得酶酶促促反反应应时时间间进进程程曲线。图中产物曲线。图中产物PP或底物或底物SS变化曲线的斜率就代表酶促反应的速率。变化曲线的斜率就代表酶促反应的速率。延滞期延滞期线性反应期线性反应期底物耗尽期底物耗尽期必须根据线性反应期的反应必须根据线性反应期的反应速率才能准确计算出酶活性浓度。速率才能准确计算出酶活性浓度。返回节返回节 第11页，共96页，编辑于2022年，星期二四、影响酶促反应的因素四、影响酶促反应的因素四、影响酶促反应的因素 底物浓度对酶促反应的影响底物浓度对酶促反应的影响底物浓度对酶促反应的影响底物浓度
19、对酶促反应的影响（1 1 1 1）当）当）当）当SKmSKmSKmSKmSKmSKmSKm时时时时，反应速率与，反应速率与，反应速率与，反应速率与底物浓度底物浓度底物浓度底物浓度SSSS无关，无关，无关，无关，V V V VVmaxVmaxVmaxVmaxK EK EK EK E 称为称为称为称为零级反应零级反应零级反应零级反应，反应速率与酶反应速率与酶反应速率与酶反应速率与酶浓度浓度浓度浓度EEEE成正比成正比成正比成正比。酶学测定时一般。酶学测定时一般。酶学测定时一般。酶学测定时一般底物浓度可选择为底物浓度可选择为底物浓度可选择为底物浓度可选择为KmKmKmKm的的的的1010101020
20、202020倍。倍。倍。倍。返回节返回节 第12页，共96页，编辑于2022年，星期二常见酶温度转化系数常见酶温度转化系数 252530303737CKCK0.640.641.001.001.561.56LDLD0.750.751.001.001.441.44ALTALT0.760.761.001.001.381.38ASTAST0.730.731.001.001.521.52ALPALP0.780.781.001.001.301.30GGTGGT0.730.731.001.001.311.31CHECHE0.810.811.001.001.261.26HBDHHBDH0.850.851.00
21、1.001.101.10第13页，共96页，编辑于2022年，星期二 酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初速度（速度（速度（速度（v v v v）达到最大速度）达到最大速度）达到最大速度）达到最大速度VmaxVmaxVmaxVmax，即在过量底物，即在过量底物，即在过量底物，即在过量底物存在下的零级反应期的速度，此时反应速度存在下的零级反应期的速度，此时反应速度存在下的零级反应期的速度，此时反应速度存在下的零级反应期的速度，此时反应速度与酶浓度与酶浓度与酶浓度与酶浓度EEEE之间存在线性关系。之
22、间存在线性关系。之间存在线性关系。之间存在线性关系。第二节第二节 酶活性浓度测定技术酶活性浓度测定技术 一、酶活性浓度测定方法一、酶活性浓度测定方法一、酶活性浓度测定方法一、酶活性浓度测定方法 二、酶偶联法二、酶偶联法二、酶偶联法二、酶偶联法 三、血清酶活性浓度测定条件的选择三、血清酶活性浓度测定条件的选择三、血清酶活性浓度测定条件的选择三、血清酶活性浓度测定条件的选择 四、酶活性浓度的单位四、酶活性浓度的单位四、酶活性浓度的单位四、酶活性浓度的单位 五、系数五、系数五、系数五、系数K K K K值的计算与应用值的计算与应用值的计算与应用值的计算与应用 六、临床酶学测定的标准化六、临床酶学测定
23、的标准化六、临床酶学测定的标准化六、临床酶学测定的标准化 返回章返回章 第14页，共96页，编辑于2022年，星期二1.1.1.1.按反应时间分类按反应时间分类按反应时间分类按反应时间分类:定时法定时法定时法定时法 连续监测法连续监测法连续监测法连续监测法2.2.2.2.按检测方法分类按检测方法分类按检测方法分类按检测方法分类：量气法、分光光度法、荧光法量气法、分光光度法、荧光法量气法、分光光度法、荧光法量气法、分光光度法、荧光法 其它方法（其它方法（其它方法（其它方法（放射性核素法、离子选择电极法，旋光法、极谱法、放射性核素法、离子选择电极法，旋光法、极谱法、放射性核素法、离子选择电极法，旋
24、光法、极谱法、放射性核素法、离子选择电极法，旋光法、极谱法、HPLCHPLCHPLCHPLC或生物发光法等）。或生物发光法等）。或生物发光法等）。或生物发光法等）。一、酶活性浓度测定方法一、酶活性浓度测定方法一、酶活性浓度测定方法一、酶活性浓度测定方法 返回节返回节 第15页，共96页，编辑于2022年，星期二按检测方法分类按检测方法分类按检测方法分类按检测方法分类底物或产物浓度的检测底物或产物浓度的检测底物或产物浓度的检测底物或产物浓度的检测 测定项目测定项目测定项目测定项目方法原理方法原理方法原理方法原理测定手段测定手段测定手段测定手段胆碱酯酶胆碱酯酶胆碱酯酶胆碱酯酶氯化乙酰胆碱做底物产生
25、乙酸根氯化乙酰胆碱做底物产生乙酸根氯化乙酰胆碱做底物产生乙酸根氯化乙酰胆碱做底物产生乙酸根电位滴定法电位滴定法电位滴定法电位滴定法脂肪酶脂肪酶脂肪酶脂肪酶三三三三油油油油酸酸酸酸甘甘甘甘油油油油酯酯酯酯悬悬悬悬乳乳乳乳液液液液做做做做底底底底物物物物，生生生生成成成成油油油油酸酸酸酸甘甘甘甘油油油油一一一一酯，浊度下降酯，浊度下降酯，浊度下降酯，浊度下降浊度法浊度法浊度法浊度法淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉做底物，一定时间后，剩余的淀粉不足以淀粉做底物，一定时间后，剩余的淀粉不足以淀粉做底物，一定时间后，剩余的淀粉不足以淀粉做底物，一定时间后，剩余的淀粉不足以使碘呈兰色使碘呈兰色使碘呈兰色使碘呈
26、兰色时间滴定法时间滴定法时间滴定法时间滴定法丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶赖氏法赖氏法赖氏法赖氏法比色法比色法比色法比色法丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶IFCCIFCCIFCCIFCC推荐法推荐法推荐法推荐法分光光度法分光光度法分光光度法分光光度法丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶固定化谷氨酸氧化酶膜生成过氧化氢，利用过固定化谷氨酸氧化酶膜生成过氧化氢，利用过固定化谷氨酸氧化酶膜生成过氧化氢，利用过固定化谷氨酸氧化酶膜生成过氧化氢，利用过氧化氢电极氧化氢电极氧化氢电极氧化氢电极生物传感器生物传感器
27、生物传感器生物传感器N-N-N-N-乙酰乙酰乙酰乙酰-氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶4-4-4-4-甲基伞形酮甲基伞形酮甲基伞形酮甲基伞形酮N-N-N-N-乙酰乙酰乙酰乙酰-D-D-D-D-氨基葡萄糖苷做底物氨基葡萄糖苷做底物氨基葡萄糖苷做底物氨基葡萄糖苷做底物荧光荧光荧光荧光葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖6 6 6 6磷酸脱氢酶磷酸脱氢酶磷酸脱氢酶磷酸脱氢酶NADPHNADPHNADPHNADPH在在在在365nm365nm365nm365nm激发下产生荧光激发下产生荧光激发下产生荧光激发下产生荧光荧光荧光荧光荧光 返回节返回节 第16页，共96页，编辑于2022年，星期
28、二定时法（固定时间法）定时法（固定时间法）定时法（固定时间法）定时法（固定时间法）测测测测定定定定酶酶酶酶与与与与底底底底物物物物作作作作用用用用反反反反应应应应一一一一定定定定时时时时间间间间后后后后底底底底物物物物或或或或产产产产物物物物变变变变化化化化的的的的总总总总量量量量，计算酶促反应平均速度。计算酶促反应平均速度。计算酶促反应平均速度。计算酶促反应平均速度。优优优优点点点点：比比比比较较较较简简简简单单单单，最最最最后后后后测测测测定定定定时时时时因因因因酶酶酶酶促促促促反反反反应应应应已已已已被被被被终终终终止止止止，故故故故所所所所用用用用仪仪仪仪器无需恒温装置，显色剂的选择也
29、可不考虑对酶活性的影响。器无需恒温装置，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。器无需恒温装置，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。器无需恒温装置，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都处于线性期。缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都处于线性期。缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都处于线性期。缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都处于线性期。利利利利用用用用该该该该法法法法测测测测定定定定酶酶酶酶活活活活性性性性浓浓浓浓度度度度，必必必必须须须须保保保保证证证证酶酶酶酶和和和和底底底底物物物物在在在在所所所所选选选选定的温度下作用时间要非常精确
30、，否则会引起较大误差。定的温度下作用时间要非常精确，否则会引起较大误差。定的温度下作用时间要非常精确，否则会引起较大误差。定的温度下作用时间要非常精确，否则会引起较大误差。返回节返回节 第17页，共96页，编辑于2022年，星期二 连续监测法连续监测法连续监测法连续监测法 又又又又称称称称速速速速率率率率法法法法或或或或动动动动力力力力学学学学法法法法，指指指指在在在在酶酶酶酶促促促促反反反反应应应应过过过过程程程程中中中中用用用用仪仪仪仪器器器器监监监监测某一反应产物或底物的浓度随时间测某一反应产物或底物的浓度随时间测某一反应产物或底物的浓度随时间测某一反应产物或底物的浓度随时间 的变化量，
31、求出酶反应初速度，间接计算酶活的变化量，求出酶反应初速度，间接计算酶活的变化量，求出酶反应初速度，间接计算酶活的变化量，求出酶反应初速度，间接计算酶活 性浓度的方法。性浓度的方法。性浓度的方法。性浓度的方法。优点：优点：优点：优点：无须终止酶促反应，不需添加其它成色试剂，无须终止酶促反应，不需添加其它成色试剂，无须终止酶促反应，不需添加其它成色试剂，无须终止酶促反应，不需添加其它成色试剂，就反应物变化的多点测定结果连接成线，观察就反应物变化的多点测定结果连接成线，观察就反应物变化的多点测定结果连接成线，观察就反应物变化的多点测定结果连接成线，观察 到整个反应过程，选择线性反应期来计算酶活到整个
32、反应过程，选择线性反应期来计算酶活到整个反应过程，选择线性反应期来计算酶活到整个反应过程，选择线性反应期来计算酶活 性，结果准确可靠。性，结果准确可靠。性，结果准确可靠。性，结果准确可靠。要求检测仪器具有恒温装置及自动检测功能，自动生化分要求检测仪器具有恒温装置及自动检测功能，自动生化分要求检测仪器具有恒温装置及自动检测功能，自动生化分要求检测仪器具有恒温装置及自动检测功能，自动生化分析仪都能达到这些要求。析仪都能达到这些要求。析仪都能达到这些要求。析仪都能达到这些要求。返回节返回节 第18页，共96页，编辑于2022年，星期二连续监测法的种类 直接法直接法直接法直接法 是是是是指指指指待待待
33、待测测测测酶酶酶酶酶酶酶酶促促促促反反反反应应应应的的的的底底底底物物物物或或或或产产产产物物物物有有有有特特特特征征征征性性性性的的的的理理理理化化化化性性性性质质质质，然然然然后后后后通过特殊的仪器直接检测。通过特殊的仪器直接检测。通过特殊的仪器直接检测。通过特殊的仪器直接检测。n n基于基于基于基于NADHNADHNADHNADH或或或或NADPHNADPHNADPHNADPH的反应原理的反应原理的反应原理的反应原理 ：LDLDLDLD、-HBD-HBD-HBD-HBD等等等等n n基于人工合成色素原底物基于人工合成色素原底物基于人工合成色素原底物基于人工合成色素原底物 ：ALP ALP
34、 ALP ALP、GGTGGTGGTGGT、AMSAMSAMSAMS等等等等 n n基于氧的消耗基于氧的消耗基于氧的消耗基于氧的消耗 ：各种氧化酶：各种氧化酶：各种氧化酶：各种氧化酶 间接法间接法间接法间接法 是是是是指指指指酶酶酶酶促促促促反反反反应应应应底底底底物物物物和和和和产产产产物物物物之之之之间间间间没没没没有有有有特特特特征征征征性性性性的的的的理理理理化化化化性性性性质质质质，需需需需通通通通过过过过另另另另一一一一个个个个化化化化学学学学反反反反应应应应或或或或生生生生化化化化反反反反应应应应，将将将将底底底底物物物物或或或或产产产产物物物物转转转转化化化化为为为为有有有有明
35、明明明显显显显特特特特征征征征理理理理化化化化性性性性质质质质的的的的另另另另一一一一个个个个化化化化合合合合物物物物。用用用用直直直直接接接接法法法法来来来来测测测测定定定定的的的的酶酶酶酶类类类类非非非非常常常常有有有有限限限限，很很很很多多多多情情情情况况况况下下下下不不不不得得得得不使用间接法。不使用间接法。不使用间接法。不使用间接法。n n化学法化学法化学法化学法：如如如如ChEChEChEChE的丁酰硫代胆碱测定法。的丁酰硫代胆碱测定法。的丁酰硫代胆碱测定法。的丁酰硫代胆碱测定法。n n酶偶联法酶偶联法酶偶联法酶偶联法 返回节返回节 第19页，共96页，编辑于2022年，星期二 用
36、用用用自自自自动动动动生生生生化化化化分分分分析析析析仪仪仪仪测测测测定定定定同同同同一一一一酶酶酶酶，条条条条件件件件固固固固定定定定时时时时，从从从从理理理理论论论论上上上上来来来来讲讲讲讲V V V V、v v v v和和和和L L L L均均均均为固定值，为固定值，为固定值，为固定值，为常数，则将公式为常数，则将公式为常数，则将公式为常数，则将公式 简化为简化为简化为简化为 如如如如LDLDLDLD活活活活性性性性浓浓浓浓度度度度，已已已已知知知知NADHNADHNADHNADH的的的的 为为为为6.226.226.226.22 101010103 3 3 3cmcmcmcm-1-1-
37、1-1.mol.mol.mol.mol-1-1-1-1，血血血血清清清清量量量量为为为为50505050 l l l l，底物液为，底物液为，底物液为，底物液为1ml1ml1ml1ml，比色杯光径为，比色杯光径为，比色杯光径为，比色杯光径为1cm1cm1cm1cm，则，则，则，则 F=1.05F=1.05F=1.05F=1.05 101010106 6 6 6/6.22/6.22/6.22/6.22 10 10 10 103 3 3 3 0.050.050.050.05 1=33761=33761=33761=3376五、系数五、系数五、系数五、系数K K K K值的计算与应用值的计算与应用值
38、的计算与应用值的计算与应用 返回节返回节 第20页，共96页，编辑于2022年，星期二连续监测法中常数连续监测法中常数连续监测法中常数连续监测法中常数K K K K值的设置值的设置值的设置值的设置 测定酶的判断值或参考范围上限测定酶的判断值或参考范围上限测定酶的判断值或参考范围上限测定酶的判断值或参考范围上限，保证测定的可靠，所，保证测定的可靠，所，保证测定的可靠，所，保证测定的可靠，所 以转氨酶的常数以转氨酶的常数以转氨酶的常数以转氨酶的常数K K K K一般在一般在一般在一般在3000300030003000左右，不少人宁愿在左右，不少人宁愿在左右，不少人宁愿在左右，不少人宁愿在15001
39、50015001500 左右。左右。左右。左右。应考虑到测定时间，应考虑到测定时间，应考虑到测定时间，应考虑到测定时间，测定时间短到测定时间短到测定时间短到测定时间短到0.50.50.50.5分，此时分，此时分，此时分，此时0.0010.0010.0010.001嗓嗓嗓嗓 音对每分钟音对每分钟音对每分钟音对每分钟A A A A误差将是误差将是误差将是误差将是0.0020.0020.0020.002，反之，测定时间延长，反之，测定时间延长，反之，测定时间延长，反之，测定时间延长 到到到到2 2 2 2分钟，误差也小一半。即测定时间长，则分钟，误差也小一半。即测定时间长，则分钟，误差也小一半。即测
40、定时间长，则分钟，误差也小一半。即测定时间长，则K K K K值可以值可以值可以值可以 设置大一些，如测定时间只有设置大一些，如测定时间只有设置大一些，如测定时间只有设置大一些，如测定时间只有0.50.50.50.5分钟，分钟，分钟，分钟，K K K K值一般不超值一般不超值一般不超值一般不超 过过过过4000400040004000。改变改变改变改变K K K K值最方便的途径值最方便的途径值最方便的途径值最方便的途径就是改变标本稀释度，稀释倍数就是改变标本稀释度，稀释倍数就是改变标本稀释度，稀释倍数就是改变标本稀释度，稀释倍数 愈大，愈大，愈大，愈大，K K K K值愈大。值愈大。值愈大。
41、值愈大。返回节返回节 第21页，共96页，编辑于2022年，星期二 第七节第七节 工具酶及其临床应用工具酶及其临床应用 一、工具酶一、工具酶一、工具酶一、工具酶 二、代谢物的酶法测定二、代谢物的酶法测定二、代谢物的酶法测定二、代谢物的酶法测定 返回章返回章 第22页，共96页，编辑于2022年，星期二概念概念概念概念 作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性作为试剂用于测定化合物浓度或酶活性的酶称为工具酶。的酶称为工具酶。的酶称为工具酶。的酶称为工具酶。工具酶参与的指示反应工具酶参与的指示反应工具酶参与的指示反应工具酶参与的指示反应
42、 偶联偶联偶联偶联H H H H2 2 2 2O O O O2 2 2 2工具酶及指示反应：工具酶及指示反应：工具酶及指示反应：工具酶及指示反应：如常用的如常用的如常用的如常用的TrinderTrinderTrinderTrinder反应。反应。反应。反应。NAD(P)+NAD(P)+NAD(P)+NAD(P)+或或或或NAD(P)HNAD(P)HNAD(P)HNAD(P)H偶联的脱氢酶及其指偶联的脱氢酶及其指偶联的脱氢酶及其指偶联的脱氢酶及其指示反应：示反应：示反应：示反应：利用氧化利用氧化利用氧化利用氧化-还原酶反应使其连接到还原酶反应使其连接到还原酶反应使其连接到还原酶反应使其连接到NA
43、D(P)-NAD(P)HNAD(P)-NAD(P)HNAD(P)-NAD(P)HNAD(P)-NAD(P)H的正的正的正的正/逆反应后，直接测定逆反应后，直接测定逆反应后，直接测定逆反应后，直接测定NAD(P)HNAD(P)HNAD(P)HNAD(P)H的变化量。的变化量。的变化量。的变化量。一、工具酶一、工具酶一、工具酶一、工具酶 返回节返回节 第23页，共96页，编辑于2022年，星期二工具酶的其他应用工具酶的其他应用工具酶的其他应用工具酶的其他应用n n酶循环法酶循环法酶循环法酶循环法n n固相酶固相酶固相酶固相酶酶循环法测定胆汁酸酶循环法测定胆汁酸 返回节返回节 第24页，共96页，编
44、辑于2022年，星期二多酶体系中酶促偶联反应分析多酶体系中酶促偶联反应分析多酶体系中酶促偶联反应分析多酶体系中酶促偶联反应分析 第25页，共96页，编辑于2022年，星期二二、代谢物的酶法测定二、代谢物的酶法测定 终点法终点法终点法终点法概念：概念：概念：概念：在代谢物酶促反应中，随着时间的延续，待测物浓度逐渐在代谢物酶促反应中，随着时间的延续，待测物浓度逐渐在代谢物酶促反应中，随着时间的延续，待测物浓度逐渐在代谢物酶促反应中，随着时间的延续，待测物浓度逐渐减少而产物逐渐增多，一定时间后待测物全部转化为产物，反减少而产物逐渐增多，一定时间后待测物全部转化为产物，反减少而产物逐渐增多，一定时间后
45、待测物全部转化为产物，反减少而产物逐渐增多，一定时间后待测物全部转化为产物，反应趋于平衡，测定反应完全后待测物或产物变化的总量，即终应趋于平衡，测定反应完全后待测物或产物变化的总量，即终应趋于平衡，测定反应完全后待测物或产物变化的总量，即终应趋于平衡，测定反应完全后待测物或产物变化的总量，即终点法（又称平衡法）。点法（又称平衡法）。点法（又称平衡法）。点法（又称平衡法）。测定的基本条件：测定的基本条件：测定的基本条件：测定的基本条件：待测物浓度待测物浓度待测物浓度待测物浓度SSSS应远小于其米氏常数应远小于其米氏常数应远小于其米氏常数应远小于其米氏常数KmKmKmKm，此时任何时刻的，此时任何
46、时刻的，此时任何时刻的，此时任何时刻的反应速度反应速度反应速度反应速度 v=VS/Kmv=VS/Kmv=VS/Kmv=VS/Km，呈一级反应。，呈一级反应。，呈一级反应。，呈一级反应。反应配方中所用酶量（反应配方中所用酶量（反应配方中所用酶量（反应配方中所用酶量（V V V V）应足够大，而）应足够大，而）应足够大，而）应足够大，而KmKmKmKm应小，以保证应小，以保证应小，以保证应小，以保证有较快的反应速度完成测定。有较快的反应速度完成测定。有较快的反应速度完成测定。有较快的反应速度完成测定。返回节返回节 第26页，共96页，编辑于2022年，星期二直接法直接法直接法直接法 待测物与产物在
47、理化性质上有可直接进行检测的差待测物与产物在理化性质上有可直接进行检测的差待测物与产物在理化性质上有可直接进行检测的差待测物与产物在理化性质上有可直接进行检测的差异，这种是最简单的代谢物浓度测定方法。异，这种是最简单的代谢物浓度测定方法。异，这种是最简单的代谢物浓度测定方法。异，这种是最简单的代谢物浓度测定方法。如尿酸在尿酸氧化酶作用下生成的尿囊素在如尿酸在尿酸氧化酶作用下生成的尿囊素在如尿酸在尿酸氧化酶作用下生成的尿囊素在如尿酸在尿酸氧化酶作用下生成的尿囊素在293nm293nm293nm293nm有有有有特异的吸收峰，胆红素在胆红素氧化酶作用下生成胆绿特异的吸收峰，胆红素在胆红素氧化酶作用
48、下生成胆绿特异的吸收峰，胆红素在胆红素氧化酶作用下生成胆绿特异的吸收峰，胆红素在胆红素氧化酶作用下生成胆绿素造成素造成素造成素造成450nm450nm450nm450nm处的吸光度下降等。体内还有很多代谢物可处的吸光度下降等。体内还有很多代谢物可处的吸光度下降等。体内还有很多代谢物可处的吸光度下降等。体内还有很多代谢物可以直接测定，关键是需要相对应的酶。以直接测定，关键是需要相对应的酶。以直接测定，关键是需要相对应的酶。以直接测定，关键是需要相对应的酶。代谢物的酶法测定代谢物的酶法测定代谢物的酶法测定代谢物的酶法测定终点法的类型终点法的类型终点法的类型终点法的类型 返回节返回节 第27页，共9
49、6页，编辑于2022年，星期二酶偶联法酶偶联法酶偶联法酶偶联法 与酶活性测定一样，直接法测定的项目是有限与酶活性测定一样，直接法测定的项目是有限与酶活性测定一样，直接法测定的项目是有限与酶活性测定一样，直接法测定的项目是有限的。每种代谢物可以使用不同的酶而建立多种检测的。每种代谢物可以使用不同的酶而建立多种检测的。每种代谢物可以使用不同的酶而建立多种检测的。每种代谢物可以使用不同的酶而建立多种检测方法。方法。方法。方法。如甘油三酯、肌酐都有多种酶试剂法。指示反如甘油三酯、肌酐都有多种酶试剂法。指示反如甘油三酯、肌酐都有多种酶试剂法。指示反如甘油三酯、肌酐都有多种酶试剂法。指示反应主要分两大类：
50、应主要分两大类：应主要分两大类：应主要分两大类：NADNADNADNAD（P P P P）H H H H和过氧化物酶（和过氧化物酶（和过氧化物酶（和过氧化物酶（PODPODPODPOD）系）系）系）系统。统。统。统。代谢物的酶法测定代谢物的酶法测定代谢物的酶法测定代谢物的酶法测定终点法的类型终点法的类型终点法的类型终点法的类型 返回节返回节 第28页，共96页，编辑于2022年，星期二 Ex Ex Ex Ex 为待测酶，为待测酶，为待测酶，为待测酶，A A A A为底物，为底物，为底物，为底物，B B B B为中间产物。为中间产物。为中间产物。为中间产物。A A A A、B B B B二物质的