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1、 Davison Davison 从分析到制备的解决方案从分析到制备的解决方案美国奥泰公司美国奥泰公司(Alltech)Alltech)于于20042004年年8 8月并入月并入GraceGrace公司，隶属公司，隶属于三大于三大 分支之一的分支之一的DavisonDavison旗下的探索科技部门。旗下的探索科技部门。DavisonDavison是全球最大的硅胶生产商，能够为是全球最大的硅胶生产商，能够为LC,GCLC,GC和和LCLC的应用的应用提供从小规模研发到大规模工业生产的一站式解决方案。提供从小规模研发到大规模工业生产的一站式解决方案。HPLC和GC柱，配件和仪器 硅胶基色谱填料HP
2、LC毛细柱和微径柱 HPLC柱和小型仪器 制备级和工业级LC柱和装柱服务 生物分离专用HPLC柱和填料 GRACEGRACE第1页/共86页大纲常规检测器的回顾ELSD的检测原理ELSD与常规检测器的比较ELSD在分析上的优点Alltech ELSD的介绍ELSD的维护质量保证总结GRACEGRACE第2页/共86页其它检测器的介绍其它检测器的介绍-紫外可见紫外可见UV/VisUV/Vis-示差折光示差折光RIRI-荧光荧光FluorescenceFluorescence-质谱质谱Mass SpectrometryMass SpectrometryGRACEGRACE检测器是高效液相色谱（检测
3、器是高效液相色谱（HPLCHPLC）的核心部件之一，被喻为的核心部件之一，被喻为HPLCHPLC的眼睛。的眼睛。它的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观测的信号，它的作用是将色谱柱流出物中样品含量的变化转换为可供观测的信号，通常是转换为电信号，以便自动记录下来进行定性定量分析通常是转换为电信号，以便自动记录下来进行定性定量分析。第3页/共86页检测器的应用分检测器的应用分布布紫外可见 65%示差和蒸发光10%电化学10%荧光8%质谱4%其它3%GRACEGRACE第4页/共86页紫外紫外/可见检测器可见检测器UV/VISUV/VIS优点：优点：易于操作 可靠性 费用相对低廉 溶剂梯
4、度兼容 对样品没有破坏性 相对灵敏度高GRACEGRACE局限性：局限性：没有好的发光基团 的化合物响应较差 溶剂的使用上受紫外截止波长的限制第5页/共86页荧光检测器荧光检测器FluorescenceFluorescence 优点：优点：很好的灵敏度很好的选择性受流速和温度的变化影响很小GRACEGRACE局限性：局限性：线性范围窄操作复杂-需要对化合物和仪器的变化了解透彻某些物质如氧气会熄灭荧光-必须严格脱气能够自然产生荧光的化合物不是很多衍生方法复杂第6页/共86页示差折光检测器示差折光检测器RIRI优点优点：通用性-对几乎所有的物质具有相应宽的动态线性范围-104易于操作GRACEGR
5、ACE局限性局限性:检测灵敏度不高对于温度和压力的波动敏感平衡慢检测既有正峰也有负峰不能进行梯度洗脱流动相预先混合后的效果好于泵在线混合的第7页/共86页质谱质谱 MSMS优点优点:灵敏度高选择性好提供化学结构信息GRACEGRACE局限性局限性:购买费用高操作复杂需要经常维护定量分析困难第8页/共86页蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器ELSDELSD发展历史检测原理局限性优点在分析中的应用GRACEGRACE第9页/共86页发展历史发展历史:第一台商业化的产品出现在80年代初期 最早的应用集中在聚合物的分析上 90年代初期，更多其它方面的应用 目前,应用在广泛的领域GRACEGRACE第10
6、页/共86页ELSD行业超过行业超过20年的领先制造经验年的领先制造经验:GRACEGRACE500 型2000 型800 型2000ES型3300 型第11页/共86页独特的检测方法：独特的检测方法：检测三部曲:雾化溶剂的蒸发检测GRACEGRACEELSDELSD可以对所有挥发性低于流动相的物质作出可以对所有挥发性低于流动相的物质作出准确检测，而与被检测物质的化学基团关系不大，准确检测，而与被检测物质的化学基团关系不大，物理性质类似的物质响应一致，响应值与样品的物理性质类似的物质响应一致，响应值与样品的质量成正比。质量成正比。第12页/共86页第一步：雾化第一步：雾化色谱柱流出物通过色谱柱
7、流出物通过喷雾器针孔喷雾器针孔与氮气混合与氮气混合形成均匀的雾状液形成均匀的雾状液滴滴(气溶胶气溶胶)GRACEGRACE第13页/共86页第二步：溶剂的蒸发第二步：溶剂的蒸发液滴通过加热的漂移液滴通过加热的漂移管管流动相蒸发流动相蒸发干燥的样品颗粒保留干燥的样品颗粒保留GRACEGRACE第14页/共86页第三步：检测第三步：检测样品颗粒通过流动池样品颗粒通过流动池激光激光“撞击撞击”颗粒被散颗粒被散射射光电二极管检测散射光光电二极管检测散射光检测角度为检测角度为9090，避免虚假，避免虚假信号信号(90(90折射折射/衍射光；衍射光；9090反射反射光光)GRACEGRACE第15页/共8
8、6页两种类型气溶胶处理方式：两种类型气溶胶处理方式：A型-所有液滴进入漂移管及流动池(又称为“无气溶胶分流 No Aerosol Splitting”)B型-部分液滴分流排掉；只有一部分进入漂移管及流动池(“气溶胶分流Aerosol Splitting”)GRACEGRACE第16页/共86页A A型型ELSD-ELSD-气溶胶不分流操作气溶胶不分流操作所有样品从喷雾器进入漂移管及流动池需要较高温度才能完全蒸发流动相；A型ELSD只有不分流一种操作模式GRACEGRACE第17页/共86页B型ELSD-气溶胶分流操作部分样品被排掉较低的温度已足够蒸发所有溶剂B型ELSD只有分流一种操作模式GR
9、ACEGRACE第18页/共86页Alltech 2000(ES)型ELSD唯一提供两种操作模式的ELSD，在任何流动相及样品分析条件下均达到最佳结果GRACEGRACE第19页/共86页一台仪器，两种操作模式：一台仪器，两种操作模式：撞击器(Impactor)关-所有液滴进入漂移管及流动池(A型ELSD-无分流)撞击器(Impactor)开-部分液滴被排除，只有一部分进入漂移管及流动池(B型ELSD-气溶胶分流)采用新型专利“气溶胶分流技术”US Patent#6229605US Patent#6229605 GRACEGRACE第20页/共86页撞击器关模式撞击器与气溶胶流向平行所有样品流
10、过漂移管到达流通池最适用于非挥发性样品及挥发性溶剂(大部分为有机)DriveShaftNebulizerOpticsImpactorOffGRACEGRACENebulizerDriveShaftImpactorOffOpticsExhaustDriftTubeNebulizerImpactorDrain第21页/共86页撞击器开模式撞击器垂直于气溶胶流向，部分液滴碰上撞击器从废液管排掉;其余穿过撞击器，经过漂移管到达流动池最适用于半挥发性样品及低挥发性溶剂(大部分为水溶液)DriveShaftNebulizerImpactorOnOpticsGRACEGRACENebulizerDriveS
11、haftImpactorOnNebulizerDrainImpactorDriftTubeExhaustOptics第22页/共86页撞击器撞击器关关-最适合非挥发性样品最适合非挥发性样品Column:Alltech700CHCarbohydrateColumn10m,300 x6.5mmMobilePhase:100%WaterFlowrate:0.5mL/min1.蜜三糖(50g/mL)2.乳糖(50g/mL)3.葡萄糖(50g/mL)4.甘露糖(50g/mL)Column:Alltech700CHCarbohydrateColumn10m,300 x6.5mmMobilePhase:10
12、0%WaterFlowrate:0.5mL/min#9206#9205ImpactorOnImpactorOff碳水化合物碳水化合物非挥发性样品在撞击器非挥发性样品在撞击器“关关”的情况下也不挥发，全部进入流的情况下也不挥发，全部进入流动池，得到最高灵敏度动池，得到最高灵敏度 GRACEGRACE第23页/共86页撞击器撞击器关关-最适合挥发性溶剂最适合挥发性溶剂有机溶剂在较低温度蒸发，在撞击器“关”的情况下，也会完全蒸发，B型ELSD 任何条件下均分流，造成样品损失，降低检测灵敏度Column:AlltechEconosphere,C18,5m,150 x4.6mmMobilePhase:M
13、ethanol:Water(90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn:AlltechEconosphere,C18,5m,150 x4.6mmMobilePhase:Methanol:Water(90:10)Flowrate:0.8mL/min1.n-癸基-b-D-吡喃糖苷(5g/mL)2.n-辛基-b-D-吡喃糖苷(5g/mL)3.n-十二烷基-b-D-吡喃糖苷(5g/mL)葡萄糖苷分析葡萄糖苷分析ImpactorOnImpactorOff#9180#9179GRACEGRACE第24页/共86页撞击器撞击器开开-最适合半挥发性样品最适合半挥发性样品在撞击器开情况下，可以
14、较低温蒸发溶剂，防止半挥发性样品蒸发防腐剂分析防腐剂分析Column:AlltechEconosphere,C18,5m,150 x4.6mmMobilePhase:Methanol:Water(90:10)Flowrate:0.8mL/minColumn:AlltechEconosphere,C18,5m,150 x4.6mmMobilePhase:Methanol:Water(90:10)Flowrate:0.8mL/min1.羟基苯甲酸甲酯2.羟基苯甲酸乙酯3.羟基苯甲酸丙酯4.羟基苯甲酸丁酯#9202ImpactorOffImpactorOn#9201GRACEGRACE第25页/共8
15、6页撞击器撞击器开开-在几乎室温下检测半挥发样在几乎室温下检测半挥发样品品Column:PrevailCarbohydrateES,5m,250 x4.6mmMobilePhase:Acetonitrile:0.04%AmmoniumHydroxide(80:20)Flowrate:1.0mL/min1.Glycerol甘油GRACEGRACE第26页/共86页ELSDELSD的局限性的局限性1.1.只能使用挥发性的流动相2.2.样品的挥发性必须要小于流动相3.3.检测器响应是非线性的GRACEGRACE第27页/共86页挥发性的流动相改性剂挥发性的流动相改性剂#1#1VolatileMobi
16、lePhaseModifierspKapKbpHRangeBPMPAcidsTrifluoroaceticAcid三氟乙酸三氟乙酸0.313.7072.4CFormicAcid甲酸甲酸3.7510.25100.7CAceticAcid醋酸醋酸4.759.25116.0CCarbonicAcid碳酸碳酸6.377.63BasesAmmonia氨水氨水9.254.75-33.35CMethylamine甲胺甲胺10.813.1916.6CEthylamine二乙胺二乙胺10.663.34-6.3CTriethylamine三乙胺三乙胺11.012.9989.3CBuffersAmmoniumFor
17、mate甲酸胺甲酸胺3.0-5.0120CPyridiniumFormate甲酸吡啶翁甲酸吡啶翁3.0-5.0AmmoniumAcetate乙酸胺乙酸胺3.8-5.8111CPyridiniumAcetate乙酸吡啶翁乙酸吡啶翁4.0-6.0AmmoniumCarbonate(forreversephase)碳酸胺碳酸胺(用于反相用于反相)8.0(adjusted)AmmoniumCarbonate碳酸胺碳酸胺5.5-7.5and9.3-11.3GRACEGRACE第28页/共86页挥发性的流动相改性剂挥发性的流动相改性剂#2#2VolatileMobilePhaseModifierspKap
18、KbpHRangeBPMPIon-PairReagentsPentafluoropropionicAcid五氟丙酸0.696-97CHeptafluorobutyricAcid七氟丁酸0.6120CNonafluoropentanoicAcid九氟戊酸140CPentadecafluoroocatanoicAcid十五氟辛酸0.6189CTridecafluoroheptanoicAcid十三氟庚酸0.6175CGRACEGRACE第29页/共86页载气流速与漂移管温度GRACEGRACE载气流速和漂移管温度是载气流速和漂移管温度是ELSDELSD中可以调节的两个中可以调节的两个重要参数，建立
19、适当的重要参数，建立适当的HPLC-ELSDHPLC-ELSD分析方法需要分析方法需要对这两个参数进行优化。对这两个参数进行优化。优化的原则是降低噪声到可以接受的程度，并尽优化的原则是降低噪声到可以接受的程度，并尽量提高信噪比。量提高信噪比。第30页/共86页载气流速与漂移管温度GRACEGRACE漂移管温度对基线水平和噪音的影响并无明显的漂移管温度对基线水平和噪音的影响并无明显的规律性。低于某一温度，基线水平较高，因为低规律性。低于某一温度，基线水平较高，因为低于这一温度，流动相得不到充分挥发，而盐的加于这一温度，流动相得不到充分挥发，而盐的加入将会提高这一温度，因为盐的挥发需要更高的入将会
20、提高这一温度，因为盐的挥发需要更高的温度，但并不是漂移管温度越高越好，因为温度温度，但并不是漂移管温度越高越好，因为温度太高会使流动相沸腾，反而会增加背景噪音，同太高会使流动相沸腾，反而会增加背景噪音，同时还有可能导致溶质的部分挥发，降低信噪比。时还有可能导致溶质的部分挥发，降低信噪比。故最优温度应为在流动相（包括其中所含的盐）故最优温度应为在流动相（包括其中所含的盐）基本挥发的基础上，产生可接受噪音的最低温度基本挥发的基础上，产生可接受噪音的最低温度第31页/共86页载气流速与漂移管温度GRACEGRACE一一般般来来说说，在在其其它它条条件件不不变变的的情情况况下下，载载气气流流速速越越小
21、小，形形成成的的物物质质粒粒子子半半径径越越大大，对对激激光光的的散散射射能能力力越越强强，相相应应的的响响应应信信号号越越大大。但但并并不不是是载载气气流流速速越越小小越越好好，因因为为当当载载气气流流速速太太小小时时，流流动动相相不不能能完完全全挥发，背景噪音会增加，信噪比也会降低。挥发，背景噪音会增加，信噪比也会降低。最最优优载载气气流流速速应应是是在在可可接接受受噪噪音音的的基基础础上上，产产生生最最大检测响应值时的最低流速。大检测响应值时的最低流速。第32页/共86页如何应对非线性响应的检测器？如何应对非线性响应的检测器？-选择2阶方程或者幂指曲线方程-使用曲线的仅仅线性部分-使用l
22、og/log 双对数方法产生线性曲线 即:对照品的浓度和面积同时取对数,至少两个点得到直线方程在中国药典2005版中，中药计算采用两点双对 数方法,抗生素计算采用三点双对数方法GRACEGRACE散射光的响应值与粒子质量的关系：散射光的响应值与粒子质量的关系：Ikmb取对数：取对数：lgIblgmlgk m：待测组分的粒子质量和待测组分的粒子质量和 I：待测组分所产生的散射光光强待测组分所产生的散射光光强 k,b：常数常数第33页/共86页Log-Log线性方程线性方程GRACEGRACE第34页/共86页ELSD-ELSD-功能强大的功能强大的HPLCHPLC检测器检测器通用性高通用性高-可
23、检测任何挥发性低于流动相 的化合物灵敏度好灵敏度好-比示差及低波长紫外灵敏一致的响应一致的响应-给出准确的样品浓度用途广泛用途广泛-梯度相容，改善分离及缩短分析时间GRACEGRACE第35页/共86页ELSDELSD响应因子的一致性GRACEGRACE不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具不同的物质在蒸发光散射检测器中几乎具有相同的响应因子，这种响应因子的一致有相同的响应因子，这种响应因子的一致性，使纯度分析结果和多组分物质的相对性，使纯度分析结果和多组分物质的相对比例测定结果更准确。比例测定结果更准确。在无合适对照品的情况下，采用另外一种在无合适对照品的情况下，采用另外一种含量已知的物质作内
24、标，测定未知物含量含量已知的物质作内标，测定未知物含量成为可能。这一点对组合分子库、无紫外成为可能。这一点对组合分子库、无紫外发色团物质的新药基准品的建立尤为有用。发色团物质的新药基准品的建立尤为有用。第36页/共86页ELSDELSD比较其它几种检测器的优势比较其它几种检测器的优势示差 RI紫外可见 UV/Vis荧光Fluorescence 质谱MSGRACEGRACE第37页/共86页ELSDELSD相比示差的优势相比示差的优势:示差检测器的限制示差检测器的限制ELSD优点优点温度变化会引起基线不稳定不受环境温度影响可能出现负峰均是正峰不可以用梯度洗脱梯度洗脱兼容受溶剂峰干扰溶剂无响应，无
25、溶剂峰灵敏度差ng级的检测限GRACEGRACE第38页/共86页ELSD不会出负峰五糖五糖,1.5mg/mLELSDRIRI(反转极性)GRACEGRACE第39页/共86页ELSDELSD相对相对RIRI，提高了检测灵敏度和基线稳定，提高了检测灵敏度和基线稳定性性RIELSD10277102781.Fructose果糖2.Glucose葡萄糖3.Sucrose蔗糖Column:PrevailCarbohydrateES,5m,53x7mm(PartNo.35104)MobilePhase:Acetonitrile:Water(75:25)Flowrate:2.0mL/minColumnTe
26、mp:30CGRACEGRACE第40页/共86页碳水化合物的梯度洗脱#7576(Isocratic)1.核糖2.木糖3.果糖4.葡萄糖5.蔗糖6.麦芽糖7.乳糖8.棉子糖1.果糖2.葡萄糖3.蔗糖4.麦芽糖5.乳糖#7570(Gradient)CarbohydratesGRACEGRACE第41页/共86页ELSD相比紫外检测器的优势:UV的局限性 ELSD的优点只能检测吸收紫外或可见光检测挥发性低于溶剂的任的化合物何化合物检测基于样品的消光系数检测基于样品浓度低波长紫外检测作梯度洗脱时梯度洗脱时基线稳定出现基线漂移溶剂峰会干扰溶剂没有响应，无溶剂峰溶剂选择受其紫外末端吸收限制可用任何挥发性
27、的溶剂GRACEGRACE第42页/共86页甾体化合物#79411.雌酮-3-硫酸钠,100ng2.b-雌二醇-17-b-D-葡萄糖苷酸钠,100ng3.5b-孕烷-3a,20a-二醇-葡萄糖酸苷,220ng#7940 Column:AlltimaC18,5m,150 x2.1mm(PartNo.88370)MobilePhase:A:0.1%TFAinWaterB:0.1%TFAinMethanolGradient:Time:01018%B:60100100FlowRate:0.2mL/minGRACEGRACE第43页/共86页10446ELSD显示在UV谱图中未检测到的成分 Lotrim
28、imAFTopicalSolution1.PEG2.ClotrimazoleColumn:AlltimaC18,5m,150 x4.6mm(PartNo.88302)MobilePhase:A:Water B:MethanolGradient:Time:08102025%B:305010010030FlowRate:1.0mL/minColumnTemp.:40C#10446#10447GRACEGRACE第44页/共86页ELSD比比UV更能准确反映样品实际的量更能准确反映样品实际的量1:1混合物1.Ephedrine麻黄素2.Caffeine咖啡因1045010449Column:Allt
29、imaHPEPSC18,5m,150 x4.6mm(PartNo.87715)MobilePhase:1%AceticAcid:Methanol:Acetonitrile(70:20:10)FlowRate:1.0mL/minGRACEGRACE第45页/共86页ELSD检测没有发光团的化合物不需要衍生检测没有发光团的化合物不需要衍生1.lauricAcid2.MyristicAcid3.PalmiticAcid4.StearicAcid5.ArachidicAcid6.BehenicAcid9539Column:PrevailOrganicAcid,5m,150 x4.6mm(PartNo.
30、88640)MobilePhase:(75:25)Acetonitrile:MethanolFlowRate:1.0mL/min脂肪酸GRACEGRACE第46页/共86页ELSD在分离使用的溶剂选择上有特点在分离使用的溶剂选择上有特点1.LGG2.LGL3.LLL4.OGL5.PGL6.OLL7.OGO+PLL8.OOO10047Column:AlltimaC18,5m,250 x4.6mm(PartNo.88056)MobilePhase:A:AcetonitrileB:DichloromethaneGradient:Time:040%B:3050FlowRate:1.0mL/minTri
31、glyceridesinEveningPrimoseOil 月见草油中的甘油三酯GRACEGRACE二氯甲烷对于高分子量的甘油三酯溶解度高.第47页/共86页荧光检测器的局限性大多需要柱前或柱後衍生无需衍生荧光检测器的限制 ELSD的优点GRACEGRACE第48页/共86页柱前衍生法分析氨基酸紫外&荧光1.天门冬氨酸2.谷氨酸3.丝氨酸4.甘氨酸5.组氨酸6.苏氨酸7.丙氨酸8.精氨酸9.脯氨酸10.酪氨酸11.蛋氨酸12.缬氨酸13.半胱氨酸14.异亮氨酸15.亮氨酸16.苯丙氨酸17.赖氨酸#7596#5164GRACEGRACE第49页/共86页 1.Gly2.Ser/Asn3.Asp
32、4.Gln5.Ala/Thr6.Glu7.Cys/Lys8.His9.Pro10.Arg11.Val12.Met13.Tyr14.Ile15.Leu16.Phe17.TrpColumn:PrevailC18,5m,250 x4.6mm(PartNo.99210)MobilePhase:A:5mMHeptafluorobutyricAcid,pH1.0w/0.7%TFAB:AcetonitrileGradient:Time:06825%B:001535FlowRate:1.0mL/minGRACEGRACEELSD对无衍生氨基酸分析第50页/共86页虽然虽然MSMS是通用性的检测器，是通用性的检
33、测器，ELSDELSD也有自己的也有自己的优势优势1.投入和操作的成本低投入和操作的成本低2.操作容易操作容易3.维护简单维护简单4.定量相比更准确定量相比更准确 对于色谱条件的要求在对于色谱条件的要求在ELSDELSD和和MSMS上是相似的，所以上是相似的，所以ELSDELSD方法能够方方法能够方便的应用在便的应用在MSMS上不需要修改。上不需要修改。在在ELSDELSD上进行上进行MSMS的方法研究，能够节省的方法研究，能够节省MSMS用于实际样品的分析用于实际样品的分析 GRACEGRACE第51页/共86页并联使用并联使用UV/ELSD/MS能够得到最多的结构和浓度能够得到最多的结构和
34、浓度信息信息1.Aspartame2.Hydrocortisone3.Reserpine4.TerfenadineColumn:ZORBAXStableBondC18,3.5m,50 x4.6mm(PartNo.835975-902)MobilePhase:A:0.025%FormicAcidinWaterB:0.025%FormicAcidinAcetonitrileGradient:Time:0155.1%B:250025FlowRate:1.0mL/minColumnTemp:30CChrom#10456#10458#10457GRACEGRACE第52页/共86页总结总结:用用ELSD
35、ELSD替代或补充现有检测器的益替代或补充现有检测器的益处处消除衍生简化方法比RI有更好的灵敏度和稳定性给其它检测器作补充，能够看到哪些物质没有检测到能够比UV&MS得到更准确的样品量的信息GRACEGRACE第53页/共86页ELSDELSD更多的优点：更多的优点：通用性的检测器通用性的检测器:-可以使用微径柱来提高灵敏度可以使用微径柱来提高灵敏度-条件方便放大到制备条件方便放大到制备-在极端的梯度条件下进行快速分离在极端的梯度条件下进行快速分离检测没有发光团的化合物的理想选择检测没有发光团的化合物的理想选择:-Lipids-Lipids磷脂磷脂-Polymers-Polymers聚合物聚合
36、物-Surfactants-Surfactants表面活性剂表面活性剂-Carbohydrates-Carbohydrates碳水化合物碳水化合物GRACEGRACE第54页/共86页在在ELSDELSD上用微径柱检测上用微径柱检测1.VitaminA(100ngon-column)2.VitaminE(160ngon-column)3.VitaminK1(130ngon-column)Column:AlltimaC18,3m,150 x1mm(PartNo.88384)MobilePhase:Methanol:Chloroform(90:10)FlowRate:50L/min#10279GR
37、ACEGRACE第55页/共86页制备时通过制备时通过ELSD控制馏分收集器，过滤控制馏分收集器，过滤UV无吸收化合无吸收化合物物Column:AlltimaC18,5m,150 x10mm(PartNo.81102)MobilePhase:Water:Acetonitrile(55:45)FlowRate:5.0mL/minColumnTemp.:25C1.Ethinamate(5.0mg/mL)#10438GRACEGRACE第56页/共86页ELSD对流动相的组成改变不响应，允许在极端梯度条件下的对流动相的组成改变不响应，允许在极端梯度条件下的快速分离快速分离1.Ephedrine2.A
38、cetylsalicylicacid3.Diphenhydramine4.TrimipramineColumn:AlltechAlltimaHPC18,3m,33x7.0mm(PartNo.87671)MobilePhase:A:0.1%TFAinWaterB:0.1%TFAinAcetonitrileGradient:Time:03%B:1090FlowRate:2.5mL/minColumnTemp:30C#10451GRACEGRACE第57页/共86页主要的应用领域主要的应用领域GRACEGRACEPharmaceuticals 药物Non-chromophoric drugs 没有发
39、光团的药品Excipients 赋性剂Impurities 杂质Amino acids氨基酸Aminoglycoside antibiotics 氨基糖甙类Nutraceuticals 天然产物Ginseng 人参Astragaloside IV 黄芪甲苷Ginkgolides 银杏Glucosamine氨基葡萄糖Polymers/Surfactants聚合物/表面活性剂PEGs Polysorbate聚山梨酸酯Tween PVA聚乙烯醇GPECDimethiconeLipids 脂类Phospholipids磷脂Triglycerides 甘油三酸酯Fatty acids 脂肪酸Carboh
40、ydrates碳水化合物Simple sugars单糖Oligomers 寡糖Sugar alcohols糖醇第58页/共86页2005版中国药典中用版中国药典中用ELSD检测的药品名称检测的药品名称序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码1地肤子地肤子皂苷甲醇水冰醋酸=85:15:0.2一部P812路路通路路通酸甲醇水冰醋酸=87:13:0.1一部P2053黄芪黄芪甲苷 C18柱，乙腈：水=32：68 一部P2124炙黄芪黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=32：68 一部P2135银杏叶萜类内酯 白果内酯 C18柱，甲醇:四氢呋喃：水=25：10：65一部P2206银杏叶提取物萜类内酯 白果内酯C1
41、8柱，正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P2827知母拔契皂苷元C18柱，甲醇：水=95：5 一部P1 488意苡仁甘油三油酸酯C18柱，乙腈：二氯甲烷=65：35 一部P2609浙贝母贝母素C18柱，乙腈：水：二乙胺=70：30：0.3一部P20510乙肝宁颗粒黄芪甲苷甲醇水=75:25一部P29011玉屏风口服液黄芪甲苷乙腈水=35:65一部P40912补中益气丸（水丸）黄芪甲苷C18柱，乙腈：水=35：65 一部P48013银杏叶片萜类内酯 白果内酯C18柱，正丙醇：四氢呋喃：水=1：15：84一部P597GRACEGRACE第59页/共86页2005版中国药典中用版中国药典中用E
42、LSD检测的药品名称检测的药品名称序号产品名称检测化合物色谱条件药典页码13硫酸卡那霉素卡那霉素C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=95：5二部P72414硫酸庆大霉素庆大霉素 小诺霉素C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=92：8二部P73015硫酸依替米星依替米星 奈替米星 C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=84：16 二部P740 16硫酸小诺霉素小诺霉素/庆大霉素C1a C18柱，0.2mol/L三氟乙酸溶液：甲醇=94：6 二部P718GRACEGRACE第60页/共86页ELSD对氨基葡萄糖有比对氨基葡萄糖有比RI和和UV更好的响应更好的响应Colum
43、n:PrevailCarbohydrateES,5m,150 x4.6mm(PartNo.35102)MobilePhase:Acetonitrile:Water(65:35)FlowRate:1.0mL/min1.Glucosamine(1mg/mL)#10412#10413#10411GRACEGRACE第61页/共86页使用使用ELSDELSD可以梯度洗脱完全分离多种磷脂可以梯度洗脱完全分离多种磷脂,灵敏度高灵敏度高GRACEGRACE1.Cholesterol胆固醇2.Palmiticacid棕榈酸3.Phosphatidylethanolamine磷脂酰乙醇胺4.Phosphatid
44、ylserine磷脂酰丝氨酸5.Phosphatidylcholine卵磷脂6.Sphingomyelin神经鞘磷脂Column:AlltechAllsphereSilica,3m,100 x4.6mm(PartNo.778382)MobilePhase:A:IPAB:HexaneC:WaterGradient:Time:0715%B:404040%C:288FlowRate:1.25mL/min第62页/共86页ELSDELSD检测糖醇检测糖醇-高灵敏度和稳定的基线高灵敏度和稳定的基线Column:PrevailCarbohydrateES,5m,250 x4.6mm(PartNo.3510
45、1)MobilePhase:Acetonitrile:Water(70:30)FlowRate:1.0mL/min1.iso-Erythritol异赤藻糖醇2.Xylitol木糖醇3.Mannitol甘露醇4.Maltitol麦芽糖醇#9352糖醇GRACEGRACE第63页/共86页ELSDELSD轻松检测困难化合物轻松检测困难化合物-Tween 80Tween 80GRACEGRACE5%Tween80Column:AlltechAlltimaC18,5m,250 x4.6mm(PartNo.88056)MobilePhase:Water:Methanol(60:40)FlowRate:1
46、.0mL/min第64页/共86页ELSDELSD梯度洗脱分离玉米糖浆低聚糖梯度洗脱分离玉米糖浆低聚糖GRACEGRACE1.Dextrose2.Maltose3.Maltotriose4.Maltotetraose5.Maltopentaose6.Maltohexaose7.Maltoheptaose8.Maltooctaose9.Maltononaose10.Maltodecaose11.Maltoundecaose12.Maltododecaose13.Maltotridecaose14.Maltotetradecaose15.MaltopentadecaoseColumn:Alltec
47、hPrevailCarbohydratesES300A,5m,250 x4.6mm(PartNo.35101)MobilePhase:A:AcetonitrileB:WaterGradient:Time:015%B:3550FlowRate:1.0mL/min第65页/共86页无需衍生检测橄榄油中的甘油三酯无需衍生检测橄榄油中的甘油三酯GRACEGRACE1.1,2-Dilinoleyl-3-Oleyl-rac-glycerol(LLO)2.1,2-Dilinoleyl-3-Palmityl-rac-glycerol(LLP)3.1,2-Dioleyl-3-linolein-rac-glyce
48、rol(OOL)4.1-Palmityl-2-Olein-3-linolein-rac-glycerol(POL)5.1,2-Dipalmityl-3-linolein-rac-glycerol(PPL)6.Triolein(OOO)7.1,2-Dioleyl-3-palmityl-rac-glycerol(OOP)8.1,2-Dipalmityl-3-oleyl-rac-glycerol(PPO)9.1,2-Dioleyl-3-stearyl-rac-glycerol(OOS)Column:AlltechAlltimaC18,3m,150 x4.6mm(PartNo.91387)Mobile
49、Phase:A:DichloromethaneB:AcetonitrileGradient:Time:0101820%B:70557070FlowRate:1.5mL/min脂肪和油一般含有特征性的甘油三酯,分析甘油三酯可以鉴定脂肪和油的品种.第66页/共86页掺有植物油的橄榄油的鉴定分析掺有植物油的橄榄油的鉴定分析GRACEGRACE1.LLL2.LLO3.LLP4.OOL5.POL6.OOO7.OOP8.PPO9.OOSColumn:Alltima C18,3m,150 x 4.6mmMobile Phase:A:Dichloromethane B:AcetonitrileGradient
50、:Time:010 18 20%B:70 55 70 70Flowrate:1.5mL/minDetector:ELSD 2000橄榄油含有大量的油酸甘油三酯,而不含亚麻酸甘油三酯.后者却存在于菜油中,显示于掺有菜油的橄榄油谱图中.第67页/共86页生物柴油生物柴油(Biodiesel Poster)Biodiesel Poster)生产中的反应和生产中的反应和质量监控质量监控GRACEGRACE生物柴油是一种可再生、生物可降解和无毒燃料,它可以通过动植物油的转酯反应来制备.作为天然柴油的替代物.目前国内外学者广泛采用的转酯法,即三甘油酯在酸、碱或酶等催化剂作用下经转酯反应制备生物柴油MAGs