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1、第八章第八章 色谱分离技术色谱分离技术第四节第四节 薄层层析法薄层层析法刘耀玺刘耀玺认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目 薄层色谱法（薄层色谱法（Thin-Layer chromatography.简写简写 TLC）是一种简便、快速、微量的层析）是一种简便、快速、微量的层析方法。一般是将某种吸附剂或支持剂均匀地方法。一般是将某种吸附剂或支持剂均匀地铺在玻璃板上，形成一个薄层而进行层析的铺在玻璃板上，形成一个薄层而进行层析的一种方法。广泛地用于化学成分的分离、精一种方法。广泛地用于化学成分的分离、精制、定性鉴定和含
2、量测定。其原理与柱层析制、定性鉴定和含量测定。其原理与柱层析基本相同。基本相同。按其分离原理可分为吸附薄层层析和分配薄按其分离原理可分为吸附薄层层析和分配薄层层析两种。层层析两种。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目一、吸附薄层层析一、吸附薄层层析吸附薄层层析就是利用混合物中各成分对同吸附薄层层析就是利用混合物中各成分对同一吸附剂吸附能力的不同，而使各成分达到一吸附剂吸附能力的不同，而使各成分达到分离目的层析法。凡柱层所用的吸附剂，均分离目的层析法。凡柱层所用的吸附剂，均可用在薄层层析上，主要区别是柱层析所用可用
3、在薄层层析上，主要区别是柱层析所用的吸附剂粒度较大，一般为的吸附剂粒度较大，一般为100-160目，而目，而薄层层析用吸附剂的粒度较细，一般为薄层层析用吸附剂的粒度较细，一般为160-250目。目。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目1、吸附剂、吸附剂薄层层析最常用的吸附剂有薄层层析最常用的吸附剂有氧化铝和硅胶氧化铝和硅胶等。等。由于吸附剂的吸附能力有强有弱，吸附力弱由于吸附剂的吸附能力有强有弱，吸附力弱的对化合物的吸附就不甚牢固。这就是吸附的对化合物的吸附就不甚牢固。这就是吸附层析能分离不同物质的基本原理之一。
4、层析能分离不同物质的基本原理之一。吸附力强弱与吸附剂本身的性质和被吸附的吸附力强弱与吸附剂本身的性质和被吸附的化合物的性质有关。化合物的性质有关。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目吸附剂：吸附剂的选择常是分离工作成败吸附剂：吸附剂的选择常是分离工作成败的关键。对吸附剂的选择与要求和吸附柱层的关键。对吸附剂的选择与要求和吸附柱层析相同。要求小于析相同。要求小于250目，并要求粒度均匀。目，并要求粒度均匀。用于薄层层析的吸附剂或予制薄层一般活度用于薄层层析的吸附剂或予制薄层一般活度不宜过高，以不宜过高，以-级为宜，
5、而展开距离则级为宜，而展开距离则随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细展开随薄层的粒度粗细而定，薄层粒度越细展开距离相应缩短。一般不超过距离相应缩短。一般不超过10cm。否则可。否则可引起色谱扩散，影响分离效果。引起色谱扩散，影响分离效果。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目2、展开剂、展开剂当吸附剂活性为一定值时（当吸附剂活性为一定值时（级或级或级），级），对多组分的样品能否获得满意的分离，对多组分的样品能否获得满意的分离，决定于展开剂的选择。例如使用亲水性决定于展开剂的选择。例如使用亲水性的吸附剂（如氧化铝和硅胶
6、）时，若被的吸附剂（如氧化铝和硅胶）时，若被分离成分极性较大，应选择吸附性较弱分离成分极性较大，应选择吸附性较弱（活性较低）的吸附剂和极性较大的展（活性较低）的吸附剂和极性较大的展开剂；若被分离的成分极性较小，亲脂开剂；若被分离的成分极性较小，亲脂性增强时，则应用吸附性强（活性高）性增强时，则应用吸附性强（活性高）的吸附剂和极性小的展开剂。的吸附剂和极性小的展开剂。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目薄层层析常用的展开剂按极性大小薄层层析常用的展开剂按极性大小(由小到由小到大大)排列如下排列如下:戊烷戊烷石油醚石
7、油醚四氯化碳四氯化碳苯苯乙醚乙醚氯仿氯仿乙酸乙酯乙酸乙酯丙酮丙酮乙醇乙醇甲醇甲醇水。水。有时为了调整展开剂的极性可使用不同比有时为了调整展开剂的极性可使用不同比例的混合展开剂，如氯仿例的混合展开剂，如氯仿无水乙醇无水乙醇19 1或或1 1等。对各种展开剂要求纯度高不含或等。对各种展开剂要求纯度高不含或少含杂质，必要时可重新蒸馏或经过特殊少含杂质，必要时可重新蒸馏或经过特殊处理，方可应用。处理，方可应用。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目3、被分离的成分、被分离的成分被分离的成分与吸附剂、展开剂共为层析被分离的成
8、分与吸附剂、展开剂共为层析中不可缺少的三个方面，彼此紧密相关。中不可缺少的三个方面，彼此紧密相关。在指定的吸附剂和展开剂的条件下，各成在指定的吸附剂和展开剂的条件下，各成分的分离情况直接与被分离成分的结构和分的分离情况直接与被分离成分的结构和性质有关。如对氧化铝和硅胶一类吸附剂，性质有关。如对氧化铝和硅胶一类吸附剂，被分离的成分极性大，被吸附的作用也强。被分离的成分极性大，被吸附的作用也强。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目看一个化合物的极性大小，不但要看特殊看一个化合物的极性大小，不但要看特殊的功能基团，还要
9、看化合物的整个分子极的功能基团，还要看化合物的整个分子极性大小，如整个分子极性基团越多，被吸性大小，如整个分子极性基团越多，被吸附的性能就会更大，分子中双键多，吸附附的性能就会更大，分子中双键多，吸附力强，共轭双键多，吸附力增大；在同系力强，共轭双键多，吸附力增大；在同系物中碳原子少的比碳原子多的吸附力强；物中碳原子少的比碳原子多的吸附力强；在同一母核中，羟基处于能形成分子内氢在同一母核中，羟基处于能形成分子内氢键位置时，其吸附力弱于羟基不能形成氢键位置时，其吸附力弱于羟基不能形成氢键的化合物。键的化合物。总之，全面考虑吸附剂、展开剂和成分三总之，全面考虑吸附剂、展开剂和成分三者间的相互关系，
10、是分离效果成败的关键。者间的相互关系，是分离效果成败的关键。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目二、分配薄层层析二、分配薄层层析分配层析是利用混合物中各成分在固定相分配层析是利用混合物中各成分在固定相和流动相间不断地分配。由于各成分在两和流动相间不断地分配。由于各成分在两相间分配系数不同而达到分离的一种层析相间分配系数不同而达到分离的一种层析方法。分配层析的原理与吸附层析不同，方法。分配层析的原理与吸附层析不同，它不是经过吸附解吸附、再吸附而解吸附它不是经过吸附解吸附、再吸附而解吸附的过程，而是通过在薄层上两相溶
11、剂反复的过程，而是通过在薄层上两相溶剂反复萃取，利用分配系数不同而达到分离目的。萃取，利用分配系数不同而达到分离目的。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目分配薄层层析就是将一种叫做支持剂分配薄层层析就是将一种叫做支持剂(或或称载体称载体)的固体粉末，铺在玻璃板上成为的固体粉末，铺在玻璃板上成为一均匀的薄层，支持剂上吸附着一种极一均匀的薄层，支持剂上吸附着一种极性溶剂，作为固定相，另用一种与固定性溶剂，作为固定相，另用一种与固定相不相混溶的极性较小的溶剂展开，这相不相混溶的极性较小的溶剂展开，这种溶剂称为流动相。由
12、于各成分在两相种溶剂称为流动相。由于各成分在两相间分配系数的不同，在固定相中溶解度间分配系数的不同，在固定相中溶解度大的成分移动慢，而在流动相中溶解度大的成分移动慢，而在流动相中溶解度大的成分移动快，这样不断的移动过程大的成分移动快，这样不断的移动过程中，使得各成分分离。中，使得各成分分离。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目分配薄层层析主要因素也有以下三点分配薄层层析主要因素也有以下三点分配薄层层析主要因素也有以下三点分配薄层层析主要因素也有以下三点:1 1、支持剂、支持剂、支持剂、支持剂:常用的支持剂有硅胶、
13、微晶纤维素、硅藻土等。常用的支持剂有硅胶、微晶纤维素、硅藻土等。常用的支持剂有硅胶、微晶纤维素、硅藻土等。常用的支持剂有硅胶、微晶纤维素、硅藻土等。硅胶、硅藻土和徽晶纤维素等，吸附大量水分后，失去了硅胶、硅藻土和徽晶纤维素等，吸附大量水分后，失去了硅胶、硅藻土和徽晶纤维素等，吸附大量水分后，失去了硅胶、硅藻土和徽晶纤维素等，吸附大量水分后，失去了吸附性质，所以在板上只能起到支持的作用。吸附性质，所以在板上只能起到支持的作用。吸附性质，所以在板上只能起到支持的作用。吸附性质，所以在板上只能起到支持的作用。2 2、展开剂、展开剂、展开剂、展开剂:分配层析所用的展开剂，多为两种以上的溶剂，分配层析所
14、用的展开剂，多为两种以上的溶剂，分配层析所用的展开剂，多为两种以上的溶剂，分配层析所用的展开剂，多为两种以上的溶剂，按一定比例组成的溶剂系统。固定相是极性大的溶剂（如按一定比例组成的溶剂系统。固定相是极性大的溶剂（如按一定比例组成的溶剂系统。固定相是极性大的溶剂（如按一定比例组成的溶剂系统。固定相是极性大的溶剂（如水、酸、碱）、不同水、酸、碱）、不同水、酸、碱）、不同水、酸、碱）、不同pHpH缓冲液和非水而亲水性的溶剂如缓冲液和非水而亲水性的溶剂如缓冲液和非水而亲水性的溶剂如缓冲液和非水而亲水性的溶剂如甲酰胺、三甲基甲酰胺、丙二醇、甘油、乙二醇等；流动甲酰胺、三甲基甲酰胺、丙二醇、甘油、乙二醇
15、等；流动甲酰胺、三甲基甲酰胺、丙二醇、甘油、乙二醇等；流动甲酰胺、三甲基甲酰胺、丙二醇、甘油、乙二醇等；流动相则为与水等不相混溶的极性小的溶剂，如石油醚、苯、相则为与水等不相混溶的极性小的溶剂，如石油醚、苯、相则为与水等不相混溶的极性小的溶剂，如石油醚、苯、相则为与水等不相混溶的极性小的溶剂，如石油醚、苯、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、醇类等。氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、醇类等。氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、醇类等。氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、醇类等。选择展开剂的原则是选择展开剂的原则是选择展开剂的原则是选择展开剂的原则是:若被分离的成分亲水性较强时，则若被分离的成分亲水性较强时，
16、则若被分离的成分亲水性较强时，则若被分离的成分亲水性较强时，则展开剂的极性也应较强。反之，成分亲脂性强，而展开剂展开剂的极性也应较强。反之，成分亲脂性强，而展开剂展开剂的极性也应较强。反之，成分亲脂性强，而展开剂展开剂的极性也应较强。反之，成分亲脂性强，而展开剂的亲脂性亦应较强。的亲脂性亦应较强。的亲脂性亦应较强。的亲脂性亦应较强。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目3、被分离的成分、被分离的成分:虽然各种生物化学成分虽然各种生物化学成分都可采用分配层析分离，但更适用于亲水都可采用分配层析分离，但更适用于亲水性强
17、而又略溶于亲脂性溶剂中的成分分离，性强而又略溶于亲脂性溶剂中的成分分离，如某些苷类、酚类。如某些苷类、酚类。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目三、薄层层析操作技术三、薄层层析操作技术包括吸附剂的选择与处理、薄层板的制备、包括吸附剂的选择与处理、薄层板的制备、点样、展开、显色、测点样、展开、显色、测Rf值及定量等操作程值及定量等操作程序序。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目1 1、吸附剂的选择与处理、吸附剂的选择与处理、吸附剂的选
18、择与处理、吸附剂的选择与处理用于柱层析的吸附剂用于柱层析的吸附剂用于柱层析的吸附剂用于柱层析的吸附剂,如氧化铝、硅胶、硅藻如氧化铝、硅胶、硅藻如氧化铝、硅胶、硅藻如氧化铝、硅胶、硅藻土、聚酰胺、纤维素、淀粉、蔗糖等，一般均土、聚酰胺、纤维素、淀粉、蔗糖等，一般均土、聚酰胺、纤维素、淀粉、蔗糖等，一般均土、聚酰胺、纤维素、淀粉、蔗糖等，一般均可用于薄层层析。其中以氧化铝和硅胶最为常可用于薄层层析。其中以氧化铝和硅胶最为常可用于薄层层析。其中以氧化铝和硅胶最为常可用于薄层层析。其中以氧化铝和硅胶最为常用。氧化铝的规格有酸性、中性和碱性三种，用。氧化铝的规格有酸性、中性和碱性三种，用。氧化铝的规格有
19、酸性、中性和碱性三种，用。氧化铝的规格有酸性、中性和碱性三种，可根据需要进行选择。而硅胶是带微酸性吸附可根据需要进行选择。而硅胶是带微酸性吸附可根据需要进行选择。而硅胶是带微酸性吸附可根据需要进行选择。而硅胶是带微酸性吸附剂，适用于酸性和中性物质的分离。近年来采剂，适用于酸性和中性物质的分离。近年来采剂，适用于酸性和中性物质的分离。近年来采剂，适用于酸性和中性物质的分离。近年来采用聚酰胺成功地分离了黄酮类、酚类和鞣质，用聚酰胺成功地分离了黄酮类、酚类和鞣质，用聚酰胺成功地分离了黄酮类、酚类和鞣质，用聚酰胺成功地分离了黄酮类、酚类和鞣质，也有用纤维素分离氨基酸的。也有用纤维素分离氨基酸的。也有用
20、纤维素分离氨基酸的。也有用纤维素分离氨基酸的。总之，进行分离实验时，首先采用氧化铝或硅总之，进行分离实验时，首先采用氧化铝或硅总之，进行分离实验时，首先采用氧化铝或硅总之，进行分离实验时，首先采用氧化铝或硅胶，不适用时，再考虑选择其他种类吸附剂。胶，不适用时，再考虑选择其他种类吸附剂。胶，不适用时，再考虑选择其他种类吸附剂。胶，不适用时，再考虑选择其他种类吸附剂。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目氧化铝氧化铝:一般市售的氧化铝，若大小颗粒范一般市售的氧化铝，若大小颗粒范围较大，则不能制成均匀的薄层，而且展开剂围
21、较大，则不能制成均匀的薄层，而且展开剂前缘不齐，不能获得良好的分离效果，须经重前缘不齐，不能获得良好的分离效果，须经重新过筛，一般以新过筛，一般以150200目为宜。太粗分离目为宜。太粗分离效果不好，太细展开速度太慢。层析用氧化铝效果不好，太细展开速度太慢。层析用氧化铝分酸、碱、中性三种规格，要按分离的成分性分酸、碱、中性三种规格，要按分离的成分性质去选择哪种规格的氧化铝。如选择不当对分质去选择哪种规格的氧化铝。如选择不当对分离效果影响很大。离效果影响很大。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目硅胶硅胶硅胶硅胶:市
22、售层析用硅胶市售层析用硅胶市售层析用硅胶市售层析用硅胶GG一般不必再进行处理；如一般不必再进行处理；如一般不必再进行处理；如一般不必再进行处理；如果是柱层析用的硅胶或工业用硅胶，必须经过处理果是柱层析用的硅胶或工业用硅胶，必须经过处理果是柱层析用的硅胶或工业用硅胶，必须经过处理果是柱层析用的硅胶或工业用硅胶，必须经过处理才能应用。取市售的层析用硅胶，首先过才能应用。取市售的层析用硅胶，首先过才能应用。取市售的层析用硅胶，首先过才能应用。取市售的层析用硅胶，首先过180180目筛，目筛，目筛，目筛，通过者可供层析用，未通过者可用磨粉机磨细，筛通过者可供层析用，未通过者可用磨粉机磨细，筛通过者可供
23、层析用，未通过者可用磨粉机磨细，筛通过者可供层析用，未通过者可用磨粉机磨细，筛取取取取180180200200目间的细粉；如为工业用硅胶，需加入目间的细粉；如为工业用硅胶，需加入目间的细粉；如为工业用硅胶，需加入目间的细粉；如为工业用硅胶，需加入2N2N盐酸浸泡盐酸浸泡盐酸浸泡盐酸浸泡2424小时以上，不时振摇，使灰色粉未渐小时以上，不时振摇，使灰色粉未渐小时以上，不时振摇，使灰色粉未渐小时以上，不时振摇，使灰色粉未渐变为白色，盐酸液呈浅黄色，抽滤，如盐酸液黄色变为白色，盐酸液呈浅黄色，抽滤，如盐酸液黄色变为白色，盐酸液呈浅黄色，抽滤，如盐酸液黄色变为白色，盐酸液呈浅黄色，抽滤，如盐酸液黄色较
24、深时，需酸洗较深时，需酸洗较深时，需酸洗较深时，需酸洗 2 23 3次，最后用蒸馏水洗至次，最后用蒸馏水洗至次，最后用蒸馏水洗至次，最后用蒸馏水洗至pHpH为为为为6 6左右，检查无氯离子再于左右，检查无氯离子再于左右，检查无氯离子再于左右，检查无氯离子再于120120烘烘烘烘12122424小时，干小时，干小时，干小时，干后取出，置于燥器中保存，以供随时取用。后取出，置于燥器中保存，以供随时取用。后取出，置于燥器中保存，以供随时取用。后取出，置于燥器中保存，以供随时取用。纤维素和聚酰胺等有机性粉未，要求略大些，可纤维素和聚酰胺等有机性粉未，要求略大些，可纤维素和聚酰胺等有机性粉未，要求略大些
25、，可纤维素和聚酰胺等有机性粉未，要求略大些，可在在在在8080140140目间，过粗者要粉碎。目间，过粗者要粉碎。目间，过粗者要粉碎。目间，过粗者要粉碎。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目2、层析板的制备、层析板的制备含粘合剂的层析板含粘合剂的层析板:在吸附剂中加入适量在吸附剂中加入适量的粘合剂，调成糊状，然后用特制的铺层器的粘合剂，调成糊状，然后用特制的铺层器铺板。或用手工方法铺制。介绍如下铺板。或用手工方法铺制。介绍如下:将调成糊状的吸附剂混悬液倒在清洁玻璃板将调成糊状的吸附剂混悬液倒在清洁玻璃板上，轻轻晃
26、动，使其分布于整块板上，放平上，轻轻晃动，使其分布于整块板上，放平晾干后，晾干后，加热活化。用这种方法制得的板，加热活化。用这种方法制得的板，称为称为硬板硬板。常用的粘合剂有烧石膏、淀粉、。常用的粘合剂有烧石膏、淀粉、羧甲基纤维素钠羧甲基纤维素钠(简写为简写为CMCNa)和琼脂等。和琼脂等。烧石膏用量为吸附剂的烧石膏用量为吸附剂的1015%；淀粉为；淀粉为5%；CMC为为0.51%。以淀粉为粘合剂的。以淀粉为粘合剂的板显色剂不能含碘化钾等，否则，会使板面板显色剂不能含碘化钾等，否则，会使板面变兰或变黑，斑点不清晰变兰或变黑，斑点不清晰。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病
27、除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目不含粘合剂的层析板不含粘合剂的层析板不含粘合剂的层析板不含粘合剂的层析板:一般称为一般称为一般称为一般称为软板软板软板软板。又可分干。又可分干。又可分干。又可分干法制板与湿法制板两种法制板与湿法制板两种法制板与湿法制板两种法制板与湿法制板两种:(1)(1)干法制法干法制法干法制法干法制法:取玻棒或细玻璃管，两端用金属片或取玻棒或细玻璃管，两端用金属片或取玻棒或细玻璃管，两端用金属片或取玻棒或细玻璃管，两端用金属片或胶布、橡皮圈包上胶布、橡皮圈包上胶布、橡皮圈包上胶布、橡皮圈包上(厚度厚度厚度厚度0.30.31 1毫米毫米毫米毫米)，中
28、间距离根，中间距离根，中间距离根，中间距离根据需要确定。取玻璃板据需要确定。取玻璃板据需要确定。取玻璃板据需要确定。取玻璃板(单向层析一般为单向层析一般为单向层析一般为单向层析一般为520cm)520cm)上面撒上吸附剂，用玻璃棒向前推动，务使吸附剂上面撒上吸附剂，用玻璃棒向前推动，务使吸附剂上面撒上吸附剂，用玻璃棒向前推动，务使吸附剂上面撒上吸附剂，用玻璃棒向前推动，务使吸附剂铺展均匀，并形成一薄层，铺好后即可使用。如欲铺展均匀，并形成一薄层，铺好后即可使用。如欲铺展均匀，并形成一薄层，铺好后即可使用。如欲铺展均匀，并形成一薄层，铺好后即可使用。如欲双向层析，需取双向层析，需取双向层析，需取
29、双向层析，需取2020cm2020cm玻璃板铺制。如这种方法玻璃板铺制。如这种方法玻璃板铺制。如这种方法玻璃板铺制。如这种方法制得的薄层板，质地疏松，很不坚固。稍受振动或制得的薄层板，质地疏松，很不坚固。稍受振动或制得的薄层板，质地疏松，很不坚固。稍受振动或制得的薄层板，质地疏松，很不坚固。稍受振动或风吹就会把薄层损坏，因此在以后各操作过程中，风吹就会把薄层损坏，因此在以后各操作过程中，风吹就会把薄层损坏，因此在以后各操作过程中，风吹就会把薄层损坏，因此在以后各操作过程中，都要注意加倍小心。这种铺制常用的吸附剂有氧化都要注意加倍小心。这种铺制常用的吸附剂有氧化都要注意加倍小心。这种铺制常用的吸
30、附剂有氧化都要注意加倍小心。这种铺制常用的吸附剂有氧化铝和硅胶。铝和硅胶。铝和硅胶。铝和硅胶。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目(2)湿法制板湿法制板:有的吸附剂用干法制板，很难铺匀。这时有的吸附剂用干法制板，很难铺匀。这时可采用湿法铺板。可采用湿法铺板。氧化铝糊板氧化铝糊板:取层析用氧化铝，加适量水调取层析用氧化铝，加适量水调成糊状，铺制。成糊状，铺制。聚酰胺板聚酰胺板:聚酰胺粉干法制板较困难。一般聚酰胺粉干法制板较困难。一般要加适当有机溶剂或石膏、纤维素等。例要加适当有机溶剂或石膏、纤维素等。例如取聚酰胺粉
31、如取聚酰胺粉5g，加氯仿，加氯仿2份、甲醇份、甲醇3份的份的混合溶剂混合溶剂45ml，混匀调成糊状铺制。，混匀调成糊状铺制。微晶纤维素板微晶纤维素板:取纤维素取纤维素1分加分加5-6倍的水研倍的水研磨或加入丙酮，调成糊状，铺制。磨或加入丙酮，调成糊状，铺制。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目上述各种方法制得的薄层板，若用于分配层析时，上述各种方法制得的薄层板，若用于分配层析时，上述各种方法制得的薄层板，若用于分配层析时，上述各种方法制得的薄层板，若用于分配层析时，则铺层后，置于室温下放置充分干燥，即可使用。则铺
32、层后，置于室温下放置充分干燥，即可使用。则铺层后，置于室温下放置充分干燥，即可使用。则铺层后，置于室温下放置充分干燥，即可使用。若作吸附层析时，自然干燥后则需要活化。活化若作吸附层析时，自然干燥后则需要活化。活化若作吸附层析时，自然干燥后则需要活化。活化若作吸附层析时，自然干燥后则需要活化。活化的条件视吸附剂和要求不同而异，如氧化铝的条件视吸附剂和要求不同而异，如氧化铝的条件视吸附剂和要求不同而异，如氧化铝的条件视吸附剂和要求不同而异，如氧化铝GG薄层薄层薄层薄层置置置置200200220220烘烘烘烘4 4小时，可得活性小时，可得活性小时，可得活性小时，可得活性级的薄层；级的薄层；级的薄层；
33、级的薄层；150150160160烘烘烘烘4 4小时，可得小时，可得小时，可得小时，可得级活性薄层。级活性薄层。级活性薄层。级活性薄层。硅胶硅胶硅胶硅胶GG有在有在有在有在110110烘烘烘烘1 1小时、小时、小时、小时、8080烘半小时或临用烘半小时或临用烘半小时或临用烘半小时或临用前前前前105105活化半小时等，根据需要而定。活化半小时等，根据需要而定。活化半小时等，根据需要而定。活化半小时等，根据需要而定。活化后的薄层必须置干燥器中保存备用。如果展活化后的薄层必须置干燥器中保存备用。如果展活化后的薄层必须置干燥器中保存备用。如果展活化后的薄层必须置干燥器中保存备用。如果展开剂中含有水时
34、，作分配层析板不必活化，常温开剂中含有水时，作分配层析板不必活化，常温开剂中含有水时，作分配层析板不必活化，常温开剂中含有水时，作分配层析板不必活化，常温下干燥即可应用。下干燥即可应用。下干燥即可应用。下干燥即可应用。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目 3、薄层层析操作、薄层层析操作点样点样:将样品用合适的溶剂溶解将样品用合适的溶剂溶解(尽量避免用水，尽量避免用水，因斑点容易扩散，而且影响吸附剂的活性因斑点容易扩散，而且影响吸附剂的活性)。一。一般多用氯仿、丙酮、乙醇。最好采用与展开剂极般多用氯仿、丙酮、乙醇。
35、最好采用与展开剂极性相近的溶剂或低沸点溶剂，以免影响分离效果；性相近的溶剂或低沸点溶剂，以免影响分离效果；溶液浓度不宜过浓或过稀。然后用内径约为溶液浓度不宜过浓或过稀。然后用内径约为1毫毫米、管口平整的毛细管吸取样品液，轻轻点在距米、管口平整的毛细管吸取样品液，轻轻点在距薄板下端薄板下端2.5厘米处，每次加样后，原点扩散直厘米处，每次加样后，原点扩散直径不超过径不超过23毫米，如果一次加样品量不够时，毫米，如果一次加样品量不够时，可使溶剂挥发以后重复点样。可使溶剂挥发以后重复点样。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”
36、项目展开展开展开展开:点样完毕后，接着就是展开操作。点样完毕后，接着就是展开操作。点样完毕后，接着就是展开操作。点样完毕后，接着就是展开操作。(1)(1)展开剂的选择：展开剂的选择原则同柱层析和纸展开剂的选择：展开剂的选择原则同柱层析和纸展开剂的选择：展开剂的选择原则同柱层析和纸展开剂的选择：展开剂的选择原则同柱层析和纸层析一样。主要根据样品的极性及样品溶解度，以层析一样。主要根据样品的极性及样品溶解度，以层析一样。主要根据样品的极性及样品溶解度，以层析一样。主要根据样品的极性及样品溶解度，以及样品在溶剂中的分配系数来选择。也可以参考前及样品在溶剂中的分配系数来选择。也可以参考前及样品在溶剂中
37、的分配系数来选择。也可以参考前及样品在溶剂中的分配系数来选择。也可以参考前人的经验。人的经验。人的经验。人的经验。常用的溶剂极性顺序是常用的溶剂极性顺序是常用的溶剂极性顺序是常用的溶剂极性顺序是:石油醚石油醚石油醚石油醚 二硫化碳二硫化碳二硫化碳二硫化碳 四氯化碳四氯化碳四氯化碳四氯化碳 苯苯苯苯 氯仿氯仿氯仿氯仿 乙醚乙醚乙醚乙醚 乙乙乙乙酸乙酯酸乙酯酸乙酯酸乙酯 乙酸甲酯乙酸甲酯乙酸甲酯乙酸甲酯 正丁醇正丁醇正丁醇正丁醇 丙酮丙酮丙酮丙酮 丙醇丙醇丙醇丙醇 乙醇乙醇乙醇乙醇 甲醇甲醇甲醇甲醇 水。水。水。水。在一般情况，先选用单一的溶剂如乙酸乙酯进行展在一般情况，先选用单一的溶剂如乙酸乙酯
38、进行展在一般情况，先选用单一的溶剂如乙酸乙酯进行展在一般情况，先选用单一的溶剂如乙酸乙酯进行展开，如发现此成分开，如发现此成分开，如发现此成分开，如发现此成分Rf Rf 值很大时，可考虑换用一种极值很大时，可考虑换用一种极值很大时，可考虑换用一种极值很大时，可考虑换用一种极性较小的溶剂，或者在原来的展开剂中加入适量的性较小的溶剂，或者在原来的展开剂中加入适量的性较小的溶剂，或者在原来的展开剂中加入适量的性较小的溶剂，或者在原来的展开剂中加入适量的极性较小的溶剂去展开，反之亦然。极性较小的溶剂去展开，反之亦然。极性较小的溶剂去展开，反之亦然。极性较小的溶剂去展开，反之亦然。认识到了贫困户贫困的根
39、本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目(2)(2)展开操作展开操作展开操作是在密闭的容器中进行的，根据薄层板的展开操作是在密闭的容器中进行的，根据薄层板的大小，选择不同的层析缸。配好展开剂
40、，将展开剂大小，选择不同的层析缸。配好展开剂，将展开剂（一般（一般2-10mL2-10mL）倒入层析缸，密闭放置一定时间，）倒入层析缸，密闭放置一定时间，待层析缸被展开剂饱和后（待层析缸被展开剂饱和后（目的是防止边缘效应的目的是防止边缘效应的产生产生），再迅速将薄层板放入（），再迅速将薄层板放入（注意：切勿使溶剂注意：切勿使溶剂浸没样品点，展开剂浸入薄层高度约浸没样品点，展开剂浸入薄层高度约0.5mm0.5mm即可即可），密闭，展开即开始。当溶剂移动到接近薄板上端，密闭，展开即开始。当溶剂移动到接近薄板上端边缘时，取出薄板，画出溶剂前沿。边缘时，取出薄板，画出溶剂前沿。展开方式可以分为：展开方
41、式可以分为：A A、上行展开法和下行展开法、上行展开法和下行展开法B B、单次展开法和多次展开法、单次展开法和多次展开法C C、单向展开法和双向展开法、单向展开法和双向展开法认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目显色：显色：显色：显色：一般纸层析用的显色剂，均可用在薄层层一般纸层析用的显色剂，均可用在薄层层一般纸层析用的显色剂，均可用在薄层层一般纸层析用的显色剂，均可用在薄层层析上。析上。析上。析上。通常在展开结束后，首先可用紫外线分析灯观察有通常在展开结束后，首先可用紫外线分析灯观察有通常在展开结束后，首先可用紫
42、外线分析灯观察有通常在展开结束后，首先可用紫外线分析灯观察有无萤光斑点，用小细针在薄层上划出斑点位置，再无萤光斑点，用小细针在薄层上划出斑点位置，再无萤光斑点，用小细针在薄层上划出斑点位置，再无萤光斑点，用小细针在薄层上划出斑点位置，再选择显色剂显色，软板与硬板显色方法不同，现分选择显色剂显色，软板与硬板显色方法不同，现分选择显色剂显色，软板与硬板显色方法不同，现分选择显色剂显色，软板与硬板显色方法不同，现分述如下述如下述如下述如下:(1)(1)软板的四种显色法：软板因不含粘合剂，直接软板的四种显色法：软板因不含粘合剂，直接软板的四种显色法：软板因不含粘合剂，直接软板的四种显色法：软板因不含粘
43、合剂，直接喷洒显色剂，可将吸附剂吹散，造成整个试验失败。喷洒显色剂，可将吸附剂吹散，造成整个试验失败。喷洒显色剂，可将吸附剂吹散，造成整个试验失败。喷洒显色剂，可将吸附剂吹散，造成整个试验失败。故采用下述方法故采用下述方法故采用下述方法故采用下述方法:1)1)喷雾法喷雾法喷雾法喷雾法:每类化合物都有特定的显色剂。展每类化合物都有特定的显色剂。展每类化合物都有特定的显色剂。展每类化合物都有特定的显色剂。展开完毕，进行喷雾显色，多数在日光下可找到色点。开完毕，进行喷雾显色，多数在日光下可找到色点。开完毕，进行喷雾显色，多数在日光下可找到色点。开完毕，进行喷雾显色，多数在日光下可找到色点。注意：氧化
44、铝软板在展开后，取出立即划出前沿，注意：氧化铝软板在展开后，取出立即划出前沿，注意：氧化铝软板在展开后，取出立即划出前沿，注意：氧化铝软板在展开后，取出立即划出前沿，趁湿喷雾显色，如果干后显色，吸附剂会被吹散。趁湿喷雾显色，如果干后显色，吸附剂会被吹散。趁湿喷雾显色，如果干后显色，吸附剂会被吹散。趁湿喷雾显色，如果干后显色，吸附剂会被吹散。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目2)2)碘蒸汽法碘蒸汽法碘蒸汽法碘蒸汽法3)3)压板法压板法压板法压板法4)4)侧吮法侧吮法侧吮法侧吮法5 5）生物印迹法：抗生素等生物活性
45、物质可以用生物印生物印迹法：抗生素等生物活性物质可以用生物印生物印迹法：抗生素等生物活性物质可以用生物印生物印迹法：抗生素等生物活性物质可以用生物印迹法进行。取一张滤纸，用适当的缓冲溶液浸湿，覆盖迹法进行。取一张滤纸，用适当的缓冲溶液浸湿，覆盖迹法进行。取一张滤纸，用适当的缓冲溶液浸湿，覆盖迹法进行。取一张滤纸，用适当的缓冲溶液浸湿，覆盖在板层上，上面用另一块玻璃压住。在板层上，上面用另一块玻璃压住。在板层上，上面用另一块玻璃压住。在板层上，上面用另一块玻璃压住。10-1510-15分钟后取出分钟后取出分钟后取出分钟后取出滤纸，然后立即覆盖在接有实验菌种的琼脂平板上，在滤纸，然后立即覆盖在接有
46、实验菌种的琼脂平板上，在滤纸，然后立即覆盖在接有实验菌种的琼脂平板上，在滤纸，然后立即覆盖在接有实验菌种的琼脂平板上，在适当温度下，经过一定时间培养后，即可显出抑菌圈。适当温度下，经过一定时间培养后，即可显出抑菌圈。适当温度下，经过一定时间培养后，即可显出抑菌圈。适当温度下，经过一定时间培养后，即可显出抑菌圈。6 6）紫外线照射法：常用）紫外线照射法：常用）紫外线照射法：常用）紫外线照射法：常用254nm254nm和和和和365nm365nm波长的紫外线。波长的紫外线。波长的紫外线。波长的紫外线。(2)(2)硬板的显色硬板的显色硬板的显色硬板的显色:可将显色剂直接喷洒在薄层上可将显色剂直接喷洒
47、在薄层上可将显色剂直接喷洒在薄层上可将显色剂直接喷洒在薄层上,进行显进行显进行显进行显色，有立即显色的。也有加热一定温度后才显色的。如色，有立即显色的。也有加热一定温度后才显色的。如色，有立即显色的。也有加热一定温度后才显色的。如色，有立即显色的。也有加热一定温度后才显色的。如喷喷喷喷10%10%硫酸，加热硫酸，加热硫酸，加热硫酸，加热100100后才能显色。后才能显色。后才能显色。后才能显色。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高
48、度重视，已经展开了“精准扶贫”项目认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目四、影响薄层层析效果的主要因素四、影响薄层层析效果的主要因素薄层层析的薄层层析的R f 值的精确度仅达值的精确度仅达0.05。如果要想获得两次完全重现的如果要想获得两次完全重现的R f值，则值，则必须使两次测定条件完全一致。所以通必须使两次测定条件完全一致。所以通常作样品成分鉴定时，都采用已知成分常作样品成分鉴定时，都采用已知成分对照展开，最理想的对照展开，最理想的R f 值为值为0.40.5。良好的分离在良好的分离在0.150.75。若小于。
49、若小于0.15或或大于大于0.75者，则分离不好。其影响因素者，则分离不好。其影响因素主要有以下几点主要有以下几点:认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目1 1温度。温度。2 2薄层的物理状态。薄层的物理状态。3 3展开时间和展开距离展开时间和展开距离:4 4层析缸内展开剂蒸汽的饱和程度层析缸内展开剂蒸汽的饱和程度:5 5吸附剂的酸碱性吸附剂的酸碱性:6 6展开剂的组成展开剂的组成:7 7展开剂的展开剂的pHpH8 8样品的性质及浓度样品的性质及浓度:9 9其他其他除上述因素外，吸附剂的粒度，薄层板的除上述因素外，
50、吸附剂的粒度，薄层板的活化程度活化程度(加热时间和温度加热时间和温度)以及溶剂的纯度、展开方以及溶剂的纯度、展开方式、层析缸的大小形状等等皆能影响式、层析缸的大小形状等等皆能影响R R f f 值，致使薄层值，致使薄层层析的层析的R f R f 值重现性较差。因此不能仅用值重现性较差。因此不能仅用R fR f值来鉴定值来鉴定未知成分，必须用已知样品作对照。未知成分，必须用已知样品作对照。认识到了贫困户贫困的根本原因，才能开始对症下药，然后药到病除。近年来国家对扶贫工作高度重视，已经展开了“精准扶贫”项目五、应用五、应用1 1无机及有机化合物的鉴别无机及有机化合物的鉴别无机及有机化合物的鉴别无机