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1、检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质第二章 组成细胞的分子 第1页/共18页 应用某些化学试剂能够使生物组织中的有关应用某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生有机化合物产生特定的颜色反应。特定的颜色反应。实验原理实验原理还原糖（还原糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖葡萄糖、果糖、麦芽糖）+斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀CuCu2 2OO脂肪脂肪 +苏丹苏丹橘黄色橘黄色 苏丹苏丹IVIV红色红色蛋白质蛋白质 +双缩脲试剂双缩脲试剂紫色络合物紫色络合物实质：实质：在碱性条件下，蛋白质与在碱性条件下，蛋白质与CuCu2+2+反应生成紫色或紫红色络合物。反应生成紫色或紫红色络合物。第2页/共18页
2、基本步骤基本步骤选材选材样液制备样液制备加入试剂加入试剂颜色反应颜色反应 观察结果结论选材的原则选材的原则实验现象明显实验现象明显（富含检测之物，避免干扰）；（富含检测之物，避免干扰）；便于处理，易获得；便于处理，易获得；经济节约；经济节约；第3页/共18页1 1、选材：、选材：含糖较高、颜色为白色或近于白色的含糖较高、颜色为白色或近于白色的 植物组织，苹果、梨最好。植物组织，苹果、梨最好。2 2、制样：、制样：苹果切块苹果切块研磨研磨过滤过滤滤液滤液4 4、检测：、检测：3 3、试剂：、试剂：甲液：甲液：0.1g/mL NaOH0.1g/mL NaOH 乙液：乙液：0.05g/mL CuSO
3、0.05g/mL CuSO4 4 组织样液组织样液（2ml2ml）斐林试剂斐林试剂 （1ml1ml）振荡混匀振荡混匀5050 6565水浴加热水浴加热2min2min；观察试管中溶液颜色的变化观察试管中溶液颜色的变化第4页/共18页第5页/共18页注意事项注意事项1.1.斐林试剂不稳定，斐林试剂不稳定，需混匀后使用！需混匀后使用！2.2.本实验对试管中的溶液进行加热时，试管底本实验对试管中的溶液进行加热时，试管底 部不要接触烧杯底部；部不要接触烧杯底部；3.3.另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的 溶液冲出试管，造成烫伤。溶液冲出试管，造成烫伤。第6页/
4、共18页还原糖的检测结果还原糖的检测结果还原糖的检测结果还原糖的检测结果第7页/共18页检测方法检测方法方法一：用方法一：用苏丹染液检苏丹染液检测测组织样液组织样液方法二方法二：制作子叶：制作子叶临时切片临时切片，显微，显微 观察子叶细胞的着色情况。观察子叶细胞的着色情况。特别提醒特别提醒：实验用的花生种子需提前浸泡实验用的花生种子需提前浸泡3-4h,3-4h,浸浸泡时间太短，不易切片泡时间太短，不易切片;浸泡时间太长，则浸泡时间太长，则组织太软，切下的薄片不易成形组织太软，切下的薄片不易成形。第8页/共18页取材：取材：花生种子花生种子(浸泡浸泡3 34h4h），将子叶削成薄片），将子叶削成
5、薄片制片制片取最理想的薄片取最理想的薄片在薄片上滴苏丹在薄片上滴苏丹染液（染液（2 23min3min）去浮色（如何去浮色）去浮色（如何去浮色）制成临时装片制成临时装片1-21-2滴体积分数为滴体积分数为50%50%的酒精溶液的酒精溶液观察观察低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察然后用高倍镜观察结果及结论：结果及结论：圆形小颗粒呈橘黄色，说明有脂肪存在。圆形小颗粒呈橘黄色，说明有脂肪存在。第9页/共18页脂肪的检测结果脂肪的检测结果第10页/共18页1 1、选材：、选材：2 2、制样：、制样：4 4、检测：、检测：3 3、试剂：、试剂：浸泡浸泡1
6、-21-2天的黄豆种子（或用豆浆）天的黄豆种子（或用豆浆）或用鸡蛋蛋白或用鸡蛋蛋白黄豆浸泡切片黄豆浸泡切片研磨研磨过滤过滤滤液滤液A A液：液：0.1g/mL NaOH0.1g/mL NaOH B B液：液：0.01g/mL CuSO0.01g/mL CuSO4 4 组织样液（2ml）双缩脲试剂A（1ml）双缩脲试剂B（4滴）观察溶液颜色 的变化第11页/共18页第12页/共18页以造成碱性环境以造成碱性环境思考：思考：为什么要先加入为什么要先加入A液再入液再入B液？液？注意事项：注意事项：1 1、如果用、如果用鸡蛋清，鸡蛋清，应应加以加以稀释，若稀释不够，稀释，若稀释不够，与双缩脲试剂发生反
7、应后会粘固在试管内壁上，与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗干净。使反应不彻底，且试管不易洗干净。2 2、鉴定之前、鉴定之前,可以留出一部分样液，以便与鉴定可以留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色变化作对比后的样液的颜色变化作对比,这样可以增强说服这样可以增强说服力。力。作对照作对照第13页/共18页蛋白质的检测结果蛋白质的检测结果第14页/共18页还原糖还原糖蛋白质蛋白质淀粉淀粉脂肪脂肪来自那种生来自那种生物材料物材料A +-梨梨B -+黄豆黄豆C +-马铃薯马铃薯D -+花生花生成分待侧样品实验记录实验记录第15页/共18页1、使用双缩脲试剂时为什么B液
8、只能加34滴而不能过量？过量的双缩脲试剂过量的双缩脲试剂B B会与试剂会与试剂A A反应，使溶液反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。呈蓝色，而掩盖生成的紫色。2、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？时间太长，时间太长，Cu(OH)2Cu(OH)2悬浊液就沉淀在试管底部悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。而无法参与反应。深化深化第16页/共18页比较斐林试剂与双缩脲试剂不同比较斐林试剂与双缩脲试剂不同点点斐林试剂斐林试剂双缩脲试剂双缩脲试剂成分成分甲液甲液乙液乙液A A液液B B液液鉴定物质鉴定物质使用方法使用方法反应条件反应条件反应现象反应现象0.1g/mlNaOH蛋白质蛋白质等量混合，现配现用等量混合，现配现用先加先加A液液1ml,创造碱性环境，创造碱性环境，再加再加B液液4滴滴50-65C水浴加热水浴加热不加热处理不加热处理砖红色沉淀砖红色沉淀紫色反应紫色反应0.05g/mlCuSO40.1g/mlNaOH0.01g/mlCuSO4还原性糖还原性糖第17页/共18页感谢您的观看！第18页/共18页