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1、中国药典2015年版微生物基本知识微生物检测环境变化2010版2015版检测环境检测环境应在洁净度10000级背景下的局部100级单向流空气区域内进行应在受控洁净环境（不低于D级洁净环境）下的局部洁净度不低于B级单向流空气区域内进行 其他要求：检验过程及环境既要最大可能防止样品受污染，又要防止检验过程 对环境和人员造成的危害。活动区域的合理规划及区分，提高微生物实验操作的安全性和可靠 性。微生物计数用培养基2010版2015版1、营养琼脂用于细菌计数2、玫瑰红钠用于霉菌和酵母菌计数3、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂用于酵母菌计数4、菌液制备用稀释液：0.9氯化钠溶液1、胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤用
2、于需氧菌总数测定2、沙氏葡萄糖琼脂用于霉菌和酵母菌总数测定3、沙氏葡萄糖琼脂+抗生素用于细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用4、菌液制备用培养基：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9无菌氯化钠溶液2010版2015版试验菌株1、营养琼脂：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌2、玫瑰红钠琼脂：白色念珠菌黑曲霉1、胰酪大豆胨琼脂：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉2、胰酪大豆胨肉汤：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3、沙氏葡萄糖琼脂：白色念珠菌、黑曲霉培养基适用性检查2010版2015版检查范围固体培养基微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配
3、制的固体和液体培养基加菌量50100CFU不大于100CFU培养温度营养琼脂：3035玫瑰红钠：2328胰酪大豆胨琼脂TSA：3035培养胰酪大豆胨肉汤TSB：3035培养沙氏葡萄糖琼脂SDA：2025培养培养时间细菌：48h真菌：72h细菌不超过72h，真菌不超过5天可接受标准70%固体培养基（与对照培养基）：50%200%（0.52）液体培养基（与对照培养基管比较）：生长良好 建议：培养基呈混浊的液体，或划线于相应的分离平板上，培养后呈现典型菌落培养基适用性检查培养基名称沙氏葡萄糖琼脂+抗生素（当细菌超标引起霉菌和酵母菌总数超标用）无菌性检查取已灭菌的SDA注皿，用于2025培养57天，应
4、无菌落生长。试验用菌种抑菌性检查：枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌促生长能力：白色念珠菌、黑曲霉常用抗生素1、庆大霉素：广谱。对G-，G+菌有比较好的抗菌作用2、氯霉素：广谱。对G-菌作用强；对G+菌作用不及青霉素与四环素。接种方法抑菌性：接种不小于100cfu试验用菌。促生长能力：接种不大于100cfu试验用菌。适用性检查白色念珠菌、黑曲霉于2025培养不大于5天。与对照培养基比较，恢复率在50%200%之间。枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌应不得生长。计数方法适用性试验1、常用的供试液制备方法(1)水溶性供试品(2)水不溶性非油脂类供试品(3)油脂类供试品(4)需要特殊
5、方法制备供试液的供试品：膜剂、肠溶及结肠溶制剂、气雾剂喷雾剂、贴剂。2010版2015版(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液(3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）(1)PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(2)PH7.2无菌磷酸盐缓冲液(3)PH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或PH7.6无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）(4)增加胰酪胨大豆肉汤培养基不局限上述稀释液2、接种和稀释2010版2015版试验组供试液和菌液同时加入平皿中供试液，加入试验菌液，混匀，使每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于1
6、00cfu。供试品对照组供试液直接加入平皿中稀释也代替菌液同试验组操作。（中国药典特殊规定的，协调案无相关要求）菌液对照组直接加入菌液到平皿中不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作。中和剂对照组稀释剂对照组中和剂、灭活剂及表面活性剂的稀释液中加入规定量菌液接种和稀释消除供试品的抑菌活性的方法消除供试品的抑菌活性的方法（1）增加稀释剂和培养基的用量；（2）加入中和剂或灭活剂；（3）采用薄膜过滤法和冲洗；（4）综合上述措施。根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行方法适用性试验。若方法适用性试验符合要
7、求，应以该稀释级供试液作为最低稀释级的供试液进行供试品检测。培养条件2010版2015版细菌数：营养琼脂3035 3天需氧菌总数（TAMC）：胰酪大豆胨琼脂3035 35天霉菌及酵母菌数：玫瑰红钠琼脂2328 5天霉菌及酵母菌总数（TYMC)：沙氏葡萄糖琼脂2025 57天结果判断计数方法结果判断薄膜过滤法平皿法（试验组菌落数供试品对照组菌落数）/菌液对照组菌落数比值应在0.52之间MPN法试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内若采用上述方法还存在一株或多株试验菌的回收达不到要求，那么选择回收最接近要求的方法和试验条件进行供试品检查。MPN法的精密度和准确度不及薄膜过滤法和平皿计数法，仅
8、在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法的情况下使用，本法不适用于霉菌计数。供试品检查部分 1、操作2010版2015版按计数方法的验证试验确认的程序进行供试液的制备，用稀释液稀释成1:10、1:102、1:103等稀释级的供试液按照计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。USP361227推荐细菌及酵母菌计数范围:25-250cfu/皿霉菌计数范围：8-80cfu/皿供试品检查部分 2、培养2010版2015版（1）描述方式：计数方法包括平皿法和薄膜过滤法，检查时，按已验证计数方法进行供试品细菌、霉菌和酵母菌数测定。（2）培养条件：细菌3035培养3天，霉菌
9、和酵母菌2328培养5天，必要时可适当延长7天。（1）描述方式：按计数方法适用性试验确认计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数的测定。（2）培养条件：胰酪大豆胨琼脂平板在3035培养35天，沙氏葡萄糖琼脂平板在2025培养57天；MPN法和供试品接种，所有试验管在3035培养3天。供试品检查部分-结果判断2010版2015版 若营养琼脂培养基上长有霉菌和酵母菌、玫瑰红钠琼脂培养基上长有细菌，则应分别点计霉菌和酵母菌、细菌菌落数。然后将营养琼脂培养基上的霉菌和酵母菌数或玫瑰红钠琼脂培养基上的细菌数，与玫瑰红钠琼脂培养基中的霉菌和酵母菌数或营养琼脂培养基中的细菌数进行比较，以菌落数高的培
10、养基中的菌数为计数结果。若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌及酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。如采用MPN法，测定结果为需氧菌总数。供试品检查部分-结果判断2010版2015版供试品的细菌数、霉菌数和酵母菌数其中任何一个不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以三次结果的平均值报告菌数。无相关内容描述。在实际操作过程应依据附录9203药品微生物实验室质量管理指导原则：结果的判断和检测报告-异常结
11、果出现异常结果出现时，应进行偏差调查。时，应进行偏差调查。需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数（包括真菌菌落数）；霉菌及酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。若因沙氏葡萄糖琼脂上生长的细菌使霉菌及酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂或选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基）供试品检查部分-计数标准2010版版2015版版无规定增加：各品种项下要求执行的微生物限度标准解释如下：101cfu为可接受的最大限度为20；102cfu为可接受的最大限度为200；103cfu为可接受的最大限度为2000；以此类
12、推。若供试品的需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数的检查结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。2010版版2015版版无规定例如：当标准为10cfu，不同于以往10cfu规定的以10的指数规定标准，考虑了微生物计数结果的可变性，即计数结果的精密度，而非类似化学检验结果。故要求我们需要在结果判断时或制定内控标准时，对于结果的判断或历史数据的分析需要用风险分析的手段进行评估。制定标准时需要依据历史数据，工艺过程，用药人群等进行相应分析，制定合理的内控标准，即总原则为在内控标准的控制下产品无任何质量风险。基于数据分析和风险评估制定标准-尽管未
13、超过标准规定，但是有风险。-累积数据，建立风险评估体系非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法通用要求要点：(1)控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。本检查法可采用替代检查方法，包括自动检测法，但必须证明其替代方法等效于药典规定的检查方法。（9201）药品微生物检验替代方法验证指导原则。(2)供试液制备及实验环境要求同非无菌产品微生物检查：微生物计数法参考USP1117实验室分区原则。(3)前处理：供试品的抗菌活性，中和剂和灭活剂的有效性及无毒性。表面活性剂的无毒性及与相容性。(4)在各控制菌项下：生化实验和“应进行分离、纯化及适宜的鉴定实验。”改为较少的生化
14、实验或“采用其它适宜方法进一步鉴定。”控制菌结果判断趋向多样化 控制菌检查中将原来大肠菌群的检测改为耐胆盐的革兰氏阴性菌，另外培养基体系也有较明显的变化，较少的生化实验或采用其它适宜方法进一步鉴定（镜检、生化、色谱光谱技术、分子生物学等）2010版2015版大肠菌群耐胆盐革兰阴性菌大肠埃希菌大肠埃希菌沙门菌沙门菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌梭菌梭菌白色念珠菌白色念珠菌供试品检查部分供试品检查部分-耐胆盐革兰阴性菌 大肠菌群的定义是指在37生长时能发酵乳糖，24h内产酸产气的革兰阴性、氧化酶阴性、需氧或兼性厌氧的无芽孢杆菌。它不是分类学上的名称。符合上述定义的菌除埃希菌属
15、外，还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸橼酸菌属、克雷伯菌属。中国医药指南2012年34期大肠菌群检查与胆汁耐受革兰阴性菌检查比较研究大肠菌群检查与胆汁耐受革兰阴性菌检查比较研究【摘要摘要】：目的比对中国药典大肠菌群检查和美国药典胆汁耐受革兰阴性菌检查这两种检测体系在培养基，检测方法和检测菌种范围、灵敏度上的差异。方法选择大肠埃希菌，铜绿假单胞菌和嗜水气单胞菌作为代表菌株，分别按中国人民共和国药典2010版第一部附录XC和美国药典第34版附录62的检测方法进行验证实验。结果胆汁耐受革兰阴性菌检查法在三种菌的检出率和准确率均比大肠菌群检查法高，且操作简便，实验结果易于判断。结论胆汁耐受革兰阴性菌检查法在
16、大肠菌群检测上更易操作和判断结果，且能检测的菌种范围更广，目标菌的检查率和准确度更高。【作者单位作者单位】：广东省食品药品检验所【关键词关键词】：中美药典对比 大肠菌群检测 胆汁耐受革兰阴性菌检测【基金基金】：广东省食品药品监督管理局系统课题（ZA20101504）供试品检查部分-耐胆盐革兰阴性菌取供试品，用胰酪大豆胨液体培养基作为稀释剂照“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（通则1105）制成1:10供试液，混匀，在2025 培养，培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不繁殖（约2小时）。取相当于1g或1ml供试品的上述预培养物接种至适宜体积（经方法适用性试验确定）肠道菌增菌液体培养基中
17、，3035 培养2448小时后，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上，3035 培养1824小时。如果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。1:10TSB供试液（20-25 2h）肠道增菌肉汤 紫红胆盐葡萄糖琼脂（大肠、铜绿+/金葡-）（大肠、铜绿+指示）24-48h 18-24h供试品检查部分-耐胆盐革兰阴性菌选择和分离培养选择和分离培养 取相当于0.1g、0.01g和0.001g(或0.1ml、0.01ml和0.001ml）供试品的预培养物或其稀释液分别接种至适宜体积（经方法适用性试验确定）肠道增菌液体培养基中，3035培养2448h。上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼
18、脂培养基平板上，3035 培养1824h。结果判断结果判断 若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴性。根据各培养管检查结果，从表二查对1g或1ml供试品中含有耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数。表2 耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数（N）-各供试品量的检查结果 -每1g（或1ml）供试品种可能的菌数cfu 0.1g或0.1ml 0.01g或 0.001g或 -+N 103 +-102 N 103 +-10N102 -N 10 -供试品检查部分-大肠埃希菌大肠埃希菌室肠杆菌科埃希菌属的代表种大肠埃希菌室两端钝圆的短小直杆菌，单个或成对，格兰阴性。无芽孢，多鞭毛，培养最适温度为
19、37 ，可在1546 生长，兼性厌氧。取1:10供试液至tsb（适宜体积）（18-24h）MaC肉汤 MaC琼脂 （大肠+/金葡-）（大肠+指示）42-44 24-48h 18-72h结果判断结果判断 若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。供试品检查部分-沙门菌沙门菌为革兰阴性菌，无芽孢，菌体通常（0.40.9）um（13）um，两端钝圆。需氧或兼性厌氧，1042皆可生长，最适温度37.加入10g供试品的TSB供试液（18-24h)RV肉汤 XL
20、D琼脂 （沙门+/金葡-)(沙门+/金葡-）18-24h 18-48h结果判断结果判断 若木糖赖氨酸脱氧但酸盐琼脂培养基平板上有疑似菌落生长，且三糖铁琼脂培养基的斜面为红色、底面为黄色，或斜面黄色、底层黄色或黑色，应进一步进行适宜的鉴定试验，确证是否为沙门菌。若果平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色、底层未见黄色黑色，判供试品未检出沙门菌。非无菌产品微生物限度检查：非无菌药品微生物限度标准表1 非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂微生物限度标准制剂类型制剂类型TAMCTYMC控制菌控制菌口服给药固/液
21、体10310210210大肠埃希菌，含药材原粉的化学药品制剂及含脏器提取物的制剂不得检出沙门菌局部用药口腔黏膜/牙龈/鼻用10210大肠埃希菌，金色葡萄球菌，铜绿假单胞菌耳用/皮肤10210金色葡萄球菌，铜绿假单胞菌呼吸道10210大肠埃希菌，金色葡萄球菌，铜绿假单胞菌、耐胆盐革兰阴性菌尿道/阴道10210金色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，白色念珠菌，梭菌（中药）直肠给药固/液体103102102102金色葡萄球菌，铜绿假单胞菌其他局部给药102102金色葡萄球菌，铜绿假单胞菌非无菌产品微生物限度检查：非无菌药品微生物限度标准表2 非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准制剂类型制剂类型TAMCTY
22、MC控制菌固体口服给药-含豆豉神曲等发酵原粉-不含豆豉神曲等发酵原粉105104丸剂31045102102大肠埃希菌，沙门菌，耐盐胆的阴性菌应小于102个液体口服给药-含豆豉神曲等发酵原粉-不含豆豉神曲等发酵原粉1035102102102大肠埃希菌，沙门菌，耐盐胆的阴性菌应小于101个固体局部给药-表皮或黏膜完整-表皮或黏膜不完整104103102102金色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，阴道尿道给药制剂不得检出白色念珠菌，梭菌。液体局部给药-表皮或黏膜完整-表皮或黏膜不完整102102金色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，阴道尿道给药制剂不得检出白色念珠菌，梭菌。非无菌产品微生物限度检查：非无菌药品微生物限度
23、标准表3 非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准（新增）表4 中药提取物及中药饮片的微生物限度标准（新增）制剂类型制剂类型TAMCTYMC控制菌药用原料及辅料103102未统一要求中药提取物103102未统一要求中药饮片未统一要求未统一要求沙门菌，耐盐胆的阴性菌应小于102个/g非无菌药品微生物限度标准限度标准由限度标准由“数量数量”向向“数量级数量级”转变转变 非无菌药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数照“非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（通则1105）检查；非无菌药品的控制菌照“非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”（通则1106）检查。各品种项下规定的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数标
24、准解释如下：101 cfu:可接受的最大菌数为20;102 cfu:可接受的最大菌数为200;103 cfu:可接受的最大菌数为2000:以此类推。虽然扩大了限度的标准，但是对过程控制的要求有了很大的提高，培养基的营养能力也有了很多的提高，未来将向参数放行方向发展。1101 无菌检查法-培养基 硫乙醇盐酸流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。2010年版2015年版1、硫乙醇盐酸流体培养基3035；2025（三部）2、改良马丁培养基23283、选择性培养基4、0.5葡萄糖肉汤培养基5、营杨肉汤培养基6、营养琼脂培养基7、改良马丁琼脂培养
25、基1、硫乙醇盐酸流体培养基3035；2025培养2、胰酪大豆胨肉汤培养基（TSB)20253、选择性培养基4、0.5葡萄糖肉汤培养基5、胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）6、沙氏葡萄糖肉汤培养基7、沙氏葡萄糖琼脂培养基 培养基体系与国际接轨，改变以往微生物分类培养的错误，正确考虑培养基的广谱性。否定了检查中对微生物分类培养的概念，即某否定了检查中对微生物分类培养的概念，即某种污染了需氧菌的供试品，无论被接种在种污染了需氧菌的供试品，无论被接种在TSB中，均可被检出，不中，均可被检出，不容易漏检。容易漏检。1101 无菌检查法-培养基的适用性检查本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进
26、行。1、无菌性检查 每批培养基随机取不少于五支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。2、灵敏度检查-培养基灵敏度检查所用菌株传代次数不得超过5代。2010年版年版2015年版1、硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭军(4种）2、改良马丁培养基白色念珠菌、黑曲霉（2种）1、硫乙醇酸盐流体培养基金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭军(3种）2、胰酪大豆胨肉汤培养基（TSB)枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（3种）将枯草芽孢杆菌移到TSB灵敏度检查中，能够确保在两种培养基中需气菌都能够生长1101 无菌检查法-培养基灵敏度检查菌液制备用培养基变化2
27、010年版年版2015年版年版金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物接种至营养肉汤培养基或营养肉汤琼脂培养基胰酪大豆胨肉汤培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基生孢梭菌新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基白色念珠菌新鲜培养物接种至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基沙氏葡萄糖肉汤培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基黑曲霉新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天。9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯
28、草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。对照管无菌生长，若加菌的培养基管生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。1101 无菌检查法-方法适用性试验药典规定 进行产品无菌检查时，应进行方法适用性检验，以确认所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，应重新进行方法适用性试验。2010年版年版2015年版年版1、硫乙醇酸盐流体培养基接入小于100cfu的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭军(4种）2、改良马丁培养基接入小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉（2种）1、硫乙醇酸盐流体培养基接入小于100cfu的
29、金色葡萄球菌（G+)、大肠埃希菌（G-）、生孢梭菌（厌氧）（3种）2、胰酪大豆胨肉汤培养基（TSB)接入小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（3种）选用菌株的原则 代表性代表性 普遍性普遍性 低或非致病性低或非致病性 标准菌株（或药品标准菌株（或药品中常见的污染菌）中常见的污染菌）试验方法：薄膜过滤法和直接接种法。可与供试品的无菌检查同时进行。1101 无菌检查法-供试品无菌检查无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。只要供试品允许，应采用薄膜过滤法。供试品检查方法应与方法适用性确认的方法相同。若是表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应证明其有效性，且对微生物无毒性。检验数量及检验量
30、20102015表1：批出产品最少检验数量表2:液体制剂最少检验量及上市抽检样品的最少检验数量表3：固体制剂最少检验量及上市抽样的最少检验数量表1：批出产品及生物制品的原液和半成品最少检验数量表2:上市抽检样品的最少检验数量 （液体和固体制剂）表3：供试品的最少检验量（液体和固体制剂）表1、表2中最少检验数量不包括阳性对照试验的供试品用量1101 无菌检查法-检验量表1：针对注册性质 表2、针对委托、进口、国评等性质 具体检验量要看检品的装量来综合三个表：如果是注册的则看表1和表3，若果是其他的则看表2和表3例1：注射用头孢呋辛钠，规格0.25g，注册查表1得 批产量：500，接种每种培养基所
31、需的最少检验数量：2或20个（取较少者，目前我们都是取20个）查表3得 每支供试品接入每种培养基的最少量：半量（即一瓶样品可以对半接种至每种培养基）综上述得：取30瓶样品，分三份接种至每种培养基里面。例2：注射用宫缩素，规格10单位，注册查表1得 批产量：500，接种每种培养基所需的最少检验数量：2或20个（取较少者，目前我们都是取20个）查表3得 每支供试品接入每种培养基的最少量：全量综上述得：取60瓶样品，分三份接种至每种培养基里面。例3：左卡尼汀注射液，规格5ml：1g左卡尼汀，进口查表2得 供试品最少检查数量（瓶或支）：10支查表3得 每支供试品接入每种培养基的最少量：半量综上述得：取
32、15支样品，分三份接种至每种培养基里面。1101 无菌检查法-供试品无菌检查阳性对照试验阳性对照试验无抑制作用的供试品以金色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阳性为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗革兰阴性为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗氧菌的供试品，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阴性对照试验阴性对照试验 供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。1101 无菌检查法-供试品无菌检查-薄膜过滤法操作方法:将规定量的供试品溶液按薄膜过滤法过滤，冲洗（按适应性试验确认的方法）。将培养基加至滤筒内检查要点：检查要点：采用封
33、闭式包，薄膜过滤器。滤膜孔径应不大于0.45um。根据供试品特性选择滤膜材质。滤过过程保持液面覆盖整张膜。每膜总冲洗量不得过1000ml。2010版版2015版版薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，也可使用一般薄膜过滤器。薄膜过滤法应采用封闭式薄膜过滤器。水溶液供试品 取规定量，直接过滤，或混合至含合适量稀释液的无菌容器内，混匀，立即过滤。如供试品具有抑菌作用或含防腐剂，需用适量的冲洗液冲滤膜，冲洗次数不得少于三次，所用的冲洗量、冲洗方法桶方法验证试验。水溶液供试品内容未变化增加：除生物制品外，一般样品冲洗后，1份滤器加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，1份滤器加入100ml胰酪大豆胨液体培
34、养基。生物制品样品冲洗后，2份滤器加入100ml硫乙醇酸盐流体培养基，1份滤器加入100ml胰酪大豆胨液体培养基。必须使用封闭式薄膜过滤器分别给出一般产品和生物制品薄膜过滤的不同操作方法1101 无菌检查法-供试品无菌检查-培养及观察2010版版2015版版将接种供试品后的培养基容器分别按各培养规定的温度培养14天；将接种供试品后的培养基容器分别按各培养基规定的温度培养14天；增加：接种生物制品供试品的硫乙醇酸盐接种生物制品供试品的硫乙醇酸盐流体培养基的容器应分成两等份，一份置流体培养基的容器应分成两等份，一份置3035培养，一份置培养，一份置2025 培养。培养。不能从外观上判断有无微生物生
35、长，可取该培养基液体适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2天、真菌培养3天，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至新鲜培养基中，培养3天给出一般产品和生物制品直接接种的不同培养条件进一步消除微生物分类培养概率1101 无菌检查法-结果判断阳性对照管应生长良好，阴性随着管无菌生长。若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定；若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。试验结果无效:(1)无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法要求。（2）回顾无菌实验过程，发现有可能引起微生物污染的因素。（3）供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证室因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。判试验结果无效：重测判实验结果不合格：应通过系统风险评估，并有相应的记录。O(_)O谢谢大家！此此课件下件下载可自行可自行编辑修改，修改，仅供参考！供参考！感感谢您的支持，我您的支持，我们努力做得更好！努力做得更好！谢谢!