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1、实验原理实验原理维生素B1又称盐酸硫胺（thiamine hydrochloride），化学名称为氯化4-甲基-3(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)-甲基-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐第1页/共20页性性 质质溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶硫色素反应：紫外吸收特性：Amax=246nm与生物碱沉淀试剂反应氯化物特性：特征性鉴别特征性鉴别特征性鉴别特征性鉴别含量测定含量测定含量测定含量测定氯化物检查氯化物检查氯化物检查氯化物检查第2页/共20页原理原理特征性鉴别硫色素反应维生素维生素B1在在碱液碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色中可被铁氰化钾氧化生成硫色素，色素转溶于素，色素转溶于正丁醇
2、正丁醇(或异丁醇、异戊醇或异丁醇、异戊醇)中，中，显现于酸中消失的显现于酸中消失的蓝色荧光蓝色荧光。（见刘文英主编。（见刘文英主编药物分析第六版，药物分析第六版，P258）含量测定维生素维生素B1有紫外吸收，有紫外吸收，Amax=246nm，第3页/共20页实验方法实验方法1.鉴别反应取本品约取本品约5mg，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液2.5ml使使其溶解，加铁氰化钾试液其溶解，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇与正丁醇5ml，强力振摇，强力振摇2min，放置使成两液层，放置使成两液层，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，上层醇液即显强烈的蓝色荧光，加酸使成酸加酸使成酸性荧光即消失性荧光即消失，再加碱
3、使成碱性，则荧光复，再加碱使成碱性，则荧光复现。现。第4页/共20页含量测定 1.精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg，标示量为每1g药物中含有0.164g维生素B1)，置100ml量瓶中 加盐酸溶液（91000）约70ml，摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 干燥滤纸过滤精密量取续滤液5.0ml，置100ml量瓶中，盐酸溶液（91000）定容至刻度，摇匀 得到供示品溶液。第5页/共20页含量测定2.精密称取维生素B1对照品25mg，置100ml量瓶中，盐酸溶液（91000）定容至刻度，摇匀 得到对照品溶液。3.将2份溶液用紫外分光光度计在246nm处分别测定吸光
4、度，计算即得。第6页/共20页实验内容与要求实验内容与要求鉴别试验吸收波长选择精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算RSD%重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度）计算标示量%，计算RSD%稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算RSD%加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样回收率试验含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。如何引用？如何引用？如何引用？如何引用？第7页/共20页 线性关系和范围分析方法的分析方法的验证1 精密度试验2 重现性试验3 加样回收试验4 稳定性试验5第8页/共20页线性与范围线性与范围精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125m
5、g)，置100ml量瓶中 加盐酸溶液（91000）少量，使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 分别取上述溶液3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml、7.00ml置于100ml容量瓶中，加盐酸溶液（91000）至刻度，摇匀将其置于紫外分光光度计中在246nm处测量并用C做A的回归曲线。第9页/共20页线性性关关系系序号序号序号序号1 1 1 12 2 2 23 3 3 34 4 4 45 5 5 5浓度浓度浓度浓度（mg/mlmg/mlmg/mlmg/ml）测定值测定值测定值测定值第10页/共20页稳定性试验稳定性试验精密称取片粉40.98mg(相当于维生素B125mg)，置10
6、0ml量瓶中 加盐酸溶液（91000）少量，使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇匀 将其置于紫外分光光度计中在246nm处测量在0、15、30、45、60min时间点分别测定样品的A246在0、1、2、4、8、12h分别测定样品的峰面积.RSD 2.0%RSD 2.0%RSD 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到则需要重新选取时间点进行计算，直到RSD 2.0%，否则要尽快测定否则要尽快测定第11页/共20页精密度试验精密度试验目的检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度信程度要求用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶用对照品按样品溶液的制
7、备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作液，同浓度至少平行操作6份，份，浓度与信号值浓度与信号值要在线性范围内要在线性范围内RSD 2.0%RSD 2.0%仪器分析仪器分析第12页/共20页 同批、同法同批、同法序序号号时间(min)(min)信信号号值平均平均信信号号值RSDRSD（%）RSDRSD（%）1 12 23 34 45 56 67 7稳定性定性试验第13页/共20页重现性试验重现性试验目的考察样品溶液制备方法的可靠程度考察样品溶液制备方法的可靠程度要求同批样品按相同方法制备样品溶液，至少同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6份份,浓度与信号值浓度与信号值均要在线性范围内均要在线性
8、范围内RSD 2.0%仪器分析仪器分析第14页/共20页重重现性性试验(示例示例)试验试验序号序号称样量称样量（g g）测定值测定值（mgmg）含量含量（mg/gmg/g）平均含量平均含量（mg/g mg/g）RSDRSD（%）1 10.16660.166622.0422.04132.29132.29134.53134.530.3%0.3%2.0%2.0%2 20.16670.166724.8224.82148.89148.893 30.16690.166921.9021.90131.22131.224 40.17420.174223.5423.54135.13135.135 50.16670
9、.166720.8620.86125.13125.136 6第15页/共20页精密度精密度试验（示例（示例）实验序序号号信信号号值平均平均值RSDRSD1 10.5120.5120.5100.5100.2%0.2%(2.0%)(2.0%)2 20.5080.5083 30.5110.5114 40.5090.5095 50.5100.5106 60.5090.509第16页/共20页加样回收率试验加样回收率试验目的考察准确度，即用该方法测定的结果与真实考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度值或参考值接近的程度要求设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别设计高、中、低三个浓度，
10、每个浓度各分别制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率制备三份供试品溶液进行测试，计算回收率RSD 2.0%第17页/共20页加加样回收回收试验序序号号称称样量量（g g）待待测组分分含量含量（mgmg）对照品加照品加入量入量（mgmg）测得量得量（mgmg）回收率回收率（%）平均加平均加样回收率回收率（%）RSDRSD（%）1 10.160.1665.2865.282 20.25000.250015.015.027.227.2100.1100.13 30.25120.25124 40.25090.250953.0453.045 50.25000.250015.015.029.829.898.698.66 60.25000.25007 70.25040.250442.8442.848 80.25000.250015.015.033.133.1100.0100.09 90.25100.2510取含量测定时一半的称样量，取含量测定时一半的称样量，0.5g/20.5g/298102%98102%第18页/共20页撰写方法学验证论文撰写方法学验证论文线性与范围:设计对照品溶液的浓度精密度试验稳定性试验 根据实验测定数值进行计算重复性试验加样回收试验:设计称样量、对照品加入量含量测定：根据实验测定数值进行计算第19页/共20页感谢您的观看！第20页/共20页