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1、综合实验一：果蔬成分的生化分析实验一 果蔬中维生素C的定量测定（4学时）实验二 果蔬中总糖及还原糖含量的测定（4学时）实验三 果蔬中蛋白质含量的测定（4学时）实验四 果蔬中过氧化物酶分析（12学时）第1页/共21页实验材料：冬枣柚子14组梨（2个品种）58组盘菜萝卜 912组第2页/共21页实实实 验验验 二二二果蔬中总糖及还原糖含量的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定第3页/共21页一、目的 掌握总糖和还原糖含量的测定方法。学习分光光度计的原理和操作方法。第4页/共21页二、原理 总糖是指样品中的还原单糖及在本实验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解成葡
2、萄糖的淀粉。第5页/共21页 多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，在620nm处有最大吸收。第6页/共21页三、实验器材1、植物材料2、吸管（1.0mL2、5.0mL2、0.1mL2、0.2mL2、0.5mL2）3、试管（1.5cm15cm7）4、分光光度计5、水浴锅、电炉6、电子分析天平7、容量瓶（100mL1）、玻璃漏斗8、量筒、研钵、三角烧瓶第7页/共21页四、实验试剂
3、1、蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000mL体积分数为80%的硫酸中，当日配制使用。2、标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000mL（可加几滴甲苯作防腐剂）。3、6mol/L HCl溶液4、20%NaOH溶液：称取20g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100mL。第8页/共21页五、操作1、葡萄糖标准曲线的绘制：取洁净试管6支，按下表进行操作：012345标准葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/mL00.10.20.30.40.5蒸馏水蒸馏水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中置冰水浴中5min蒽酮试剂蒽酮试剂4.04.04.04.04.04.0煮沸煮
4、沸10，冷却后室温放置，冷却后室温放置10，在，在620nm处比色处比色A620nm步骤管号第9页/共21页 以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/mL）为横坐标做图得标准曲线。第10页/共21页2、样品中还原糖的提取和测定 称称取取1g1g果果蔬蔬，加加水水约约3mL3mL，在在研研钵钵中中磨磨成成匀匀浆浆，转转入入三三角角烧烧瓶瓶中中，并并用用约约30mL30mL蒸蒸馏馏水水冲冲洗洗研研钵钵2 23 3次次，洗洗出出液液也也转转入入三三角角烧烧瓶瓶中中。于于5050水水浴浴中中保保温温约约0.5h0.5h（使使还还原原糖糖浸浸出出），取取出出，冷冷却却后后定定容容至至100mL100mL。
5、过过滤滤后后冰冰箱保存。箱保存。冬枣、柚子、梨：取滤液1mL100mL 盘菜、萝卜：取滤液10mL100mL第11页/共21页 吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。第12页/共21页3、样品中总糖的提取、水解和测定 称称取取1g1g果果蔬蔬，加加水水约约3mL3mL，在在研研钵钵中中磨磨成成匀匀浆浆，转转入入三三角角烧烧瓶瓶中中，并并用用约约12mL12mL蒸蒸馏馏水水冲冲洗洗研研钵钵2 23 3次次，洗洗出出液液也也转转入入三三角角烧烧瓶瓶中中。再再向向
6、三三角角烧烧瓶瓶中中加加入入6mol6mol/L L盐盐酸酸10mL10mL，搅搅拌拌均均匀匀后后在在沸沸水水浴浴中中水水解解0.5h0.5h，冷冷却却后后用用20%NaOH20%NaOH溶溶液液中中和和至至pHpH呈呈中中性性。然然后后用用蒸蒸馏馏水水定定容容至至100mL100mL，过过滤滤后后冰冰箱箱保存。保存。第13页/共21页 冬枣、柚子、梨：取滤液5mL用蒸馏水定容至100mL。盘菜、萝卜：取滤液10mL用蒸馏水定容至100mL。取总糖水解液1mL同上法进行还原糖测定。第14页/共21页六、计算 按照下列公式分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（w）。W（还原糖）100%C1V1mW（总糖）0.9100%C2V2m 乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。第15页/共21页式中：W（还原糖）：还原糖质量分数（%）W（总糖）：总糖质量分数（%）C1：还原糖的质量浓度（mg/mL）C2：水解后还原糖的质量浓度（mg/mL）V1：样品中还原糖提取液的体积（mL）V2：样品中总糖提取液的体积（mL）m：样品质量第16页/共21页第17页/共21页第18页/共21页第19页/共21页第20页/共21页感谢您的观看！第21页/共21页