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1、实验五 土壤中微生物的分离计数第1页，共14页，编辑于2022年，星期五一、实验目的：一、实验目的：一、实验目的：一、实验目的：学习学习学习学习微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数微生物稀释平板计数及划线分离技术及划线分离技术二、实验原理二、实验原理二、实验原理二、实验原理:采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法在固体培养基上形成单个菌落。在固体
2、培养基上形成单个菌落。依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落从而推算样品中含有多少细菌的活菌数目。落从而推算样品中含有多少细菌的活菌数目。第2页，共14页，编辑于2022年，星期五取取取取一一一一瓶瓶瓶瓶牛牛牛牛肉肉肉肉膏膏膏膏培培培培养养养养基基基基（250ml250ml250ml250ml瓶瓶）熔熔化化后后每每组组倒倒4 4 4 4个个个个平平平平皿皿皿皿。（每个人倒每个人倒1 1个平皿用于划线分离个平皿用于划线分离个平皿用于划线分离个平皿用于划线分离）三、实验步骤：三、实验步骤：（一）土样的采集（一）土样的采集（一）土样的采集（一）
3、土样的采集 采采采采集集集集土土土土样样样样，扒扒扒扒开开开开表表表表土土土土层层层层大大大大约约约约5cm5cm5cm5cm厚厚厚厚，取取取取土土土土样样样样10g10g10g10g左左左左右右右右，装装装装于于于于灭灭灭灭菌菌菌菌后后后后的的的的牛牛牛牛皮袋中，封口带回。皮袋中，封口带回。皮袋中，封口带回。皮袋中，封口带回。（二）土壤悬液制备（二）土壤悬液制备（二）土壤悬液制备（二）土壤悬液制备准备准备准备准备1 1 1 1瓶土壤悬液：称瓶土壤悬液：称10101010克土壤放入带玻璃珠的克土壤放入带玻璃珠的90ml90ml瓶装无菌瓶装无菌瓶装无菌瓶装无菌水中，振荡（水中，振荡（水中，振荡（
4、水中，振荡（10min10min10min10min），使土样分散。），使土样分散。（三）倒固体琼脂培养基平板（三）倒固体琼脂培养基平板（三）倒固体琼脂培养基平板（三）倒固体琼脂培养基平板第3页，共14页，编辑于2022年，星期五 （四）悬液稀释（四）悬液稀释 无菌操作采用无菌操作采用无菌操作采用无菌操作采用4 4，5 5，6 6 6 6 稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板稀释液涂布牛肉膏蛋白胨平板;每个稀释度每个稀释度2 2个重复。每人用剩下的个重复。每人用剩下的1 1个平板做划线分离，个平板做划线分离，从三角瓶中取土壤悬液作划线分离。从三角瓶中取
5、土壤悬液作划线分离。90毫升毫升无菌水无菌水10克克土样土样10-310-210-410-510-1第4页，共14页，编辑于2022年，星期五第5页，共14页，编辑于2022年，星期五(五五)平板涂布平板涂布简单易行，但易简单易行，但易简单易行，但易简单易行，但易造成机械损伤造成机械损伤Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent Liquid specimen is spread on the surface of solid agar with a sterile bent glass
6、rod.glass rod.第6页，共14页，编辑于2022年，星期五（六）培养：（六）培养：将平板用报纸包好（每个平板方向一致），将平板用报纸包好（每个平板方向一致），写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培写上班级和姓名，皿底朝上，置于培养箱培养养(温度温度3737)。第7页，共14页，编辑于2022年，星期五（七）细菌计数结果（七）细菌计数结果稀释度稀释度 10-5 10-6 10-7平板平板 1 2 1 2 1 2菌落数菌落数各浓度平各浓度平均菌落数均菌落数土壤中含土壤中含细菌数量细菌数量第8页，共14页，编辑于2022年，星期五四、平皿划线四、平皿划线分离法分离法第9页，共14页，编辑
7、于2022年，星期五特点：快速、方便。特点：快速、方便。分区划线（适用于浓度较大的样品）分区划线（适用于浓度较大的样品）连续划线（适用于浓度较小的样品）连续划线（适用于浓度较小的样品）第10页，共14页，编辑于2022年，星期五第11页，共14页，编辑于2022年，星期五五、试管斜面接种五、试管斜面接种1.1.两支试管呈两支试管呈“V V”字形字形 2.2.拔下试管塞拔下试管塞3.3.火焰上微烧一周火焰上微烧一周 4.4.接种环灼烧、冷却接种环灼烧、冷却5.5.接种接种、划线、划线 6.6.塞上塞子，灼烧接种环塞上塞子，灼烧接种环第12页，共14页，编辑于2022年，星期五六、思考题六、思考题(1)(1)要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键?为什么为什么?(2)(2)当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在一起时，你认为问题出在哪里集中在一起时，你认为问题出在哪里?第13页，共14页，编辑于2022年，星期五第14页，共14页，编辑于2022年，星期五