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1、实验五过氧化物酶酶活性的测定第1页，共11页，编辑于2022年，星期五一、实验目的一、实验目的v熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测熟悉测定过氧化物酶活性的常用方法及其测定原理。定原理。第2页，共11页，编辑于2022年，星期五 过过氧化物氧化物酶酶（POD)过过氧氧化化物物酶酶广广泛泛存存在在于于植植物物体体中中，是是活活性性较较高高的的一一种种酶酶。它它与与呼呼吸吸作作用用、光光合合作作用用及及生生长长素素的的氧氧化化等等都都有有关关系系。在在植植物物生生长长发发育育过过程程中中它它的的活活性性不不断断发发生生变变化化。一一般般老老化化组组织织中中活活性性较较高高，幼幼嫩嫩组组织织中中活
2、活性性较较弱弱。这这是是因因为为过过氧氧化化物物酶酶能能使使组组织织中中所所含含的的某某些些碳碳水水化合物转化成木质素，增加木质化程度。化合物转化成木质素，增加木质化程度。此外，过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作此外，过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作用也正在受到重视。用也正在受到重视。第3页，共11页，编辑于2022年，星期五二、实验原理二、实验原理v RH2+H2O22H2O+Rv在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能在有过氧化氢存在的条件下，过氧化物酶能使邻甲氧基苯酚（愈创木酚）氧化，生成茶使邻甲氧基苯酚（愈创木酚）氧化，生成茶褐色物质，该物质在褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大
3、吸收，处有最大吸收，可用分光光度计测量可用分光光度计测量 470 nm 处的吸光度变处的吸光度变化速率来测定过氧化物酶活性。化速率来测定过氧化物酶活性。第4页，共11页，编辑于2022年，星期五第5页，共11页，编辑于2022年，星期五三、实验材料三、实验材料v菠菜、油菜、树叶、草、菠菜、油菜、树叶、草、第6页，共11页，编辑于2022年，星期五四、仪器用品与试剂四、仪器用品与试剂v分光光度计，研钵，移液管，吸管分光光度计，研钵，移液管，吸管 v愈创木酚，愈创木酚，30过氧化氢，磷酸缓冲液过氧化氢，磷酸缓冲液第7页，共11页，编辑于2022年，星期五五、实验步骤五、实验步骤1、称取植物材料称取
4、植物材料 0.5g，剪碎，放入研钵中，加入，剪碎，放入研钵中，加入 1 ml 磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（0.05mol/L）研磨成匀浆，以研磨成匀浆，以 12000 rpm 离心离心 15 min，上清液即为粗酶液，上清液即为粗酶液。试剂试剂01230.01mol/L磷酸缓冲液，磷酸缓冲液，ml0.02mol/L 愈创木酚，愈创木酚，ml酶液，酶液，ml2.920.0502.90.050.022.90.050.022.90.050.02加好反应物，摇匀，立即加新配制的加好反应物，摇匀，立即加新配制的H2O2 (0.01 ml)，即刻摇匀并计时，即刻摇匀并计时，每隔每隔 30s 读数读数1次，共计次，共计6个数值个数值。对照管对照管 测定管测定管第8页，共11页，编辑于2022年，星期五七、思考题七、思考题v说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义说明植物过氧化物酶在植物代谢中的意义。第10页，共11页，编辑于2022年，星期五第11页，共11页，编辑于2022年，星期五