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1、实验三实验三 环境因素对环境因素对微生物的影响微生物的影响第1页，共17页，编辑于2022年，星期五一、实验目的一、实验目的1.1.了解了解温度温度对微生物生长的影响；对微生物生长的影响；2.2.了解了解抗生素抗生素（青霉素、氨苄青霉素等）（青霉素、氨苄青霉素等）的抗菌范围，学习抗菌谱试验的基本方的抗菌范围，学习抗菌谱试验的基本方法。法。3.3.了解了解消毒剂消毒剂（碘酒或酒精）对微生物分（碘酒或酒精）对微生物分布的影响。布的影响。4.4.了解了解紫外线紫外线杀菌对微生物的作用特点杀菌对微生物的作用特点第2页，共17页，编辑于2022年，星期五二、实验原理二、实验原理1.1.1.1.温度温度温
2、度温度:影响微生物生长与存活的最重要因素。影响微生物生长与存活的最重要因素。影响微生物生长与存活的最重要因素。影响微生物生长与存活的最重要因素。n n自然界的微生物可根据对温度的适应性分为自然界的微生物可根据对温度的适应性分为自然界的微生物可根据对温度的适应性分为自然界的微生物可根据对温度的适应性分为低温低温低温低温型、中温型和高温型。型、中温型和高温型。型、中温型和高温型。型、中温型和高温型。n n但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温度范但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温度范但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温度范但不管哪一种温度型的微生物，都有生长温度范围。分为围。分为围。分为围。
3、分为最高、最适和最低最高、最适和最低最高、最适和最低最高、最适和最低生长温度。在最适宜温生长温度。在最适宜温生长温度。在最适宜温生长温度。在最适宜温度里生长良好：超过最高温度细胞死亡；低于最低度里生长良好：超过最高温度细胞死亡；低于最低度里生长良好：超过最高温度细胞死亡；低于最低度里生长良好：超过最高温度细胞死亡；低于最低温度细胞被抑制或死亡。温度细胞被抑制或死亡。温度细胞被抑制或死亡。温度细胞被抑制或死亡。第3页，共17页，编辑于2022年，星期五2.2.2.2.抗生素抗生素抗生素抗生素对微生物生长的影响：抗生素是对微生物生长的影响：抗生素是对微生物生长的影响：抗生素是对微生物生长的影响：抗
4、生素是某些微生物某些微生物某些微生物某些微生物在生在生在生在生长代谢过程中长代谢过程中长代谢过程中长代谢过程中产生的产生的产生的产生的能抑制或杀死其它微生物的能抑制或杀死其它微生物的能抑制或杀死其它微生物的能抑制或杀死其它微生物的次生次生次生次生代谢产物代谢产物代谢产物代谢产物。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌。每种抗生素都有它固定的抗菌范围和抗菌谱。谱。谱。谱。n n例如例如例如例如青霉素青霉素青霉素青霉素只对只对只对只对革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌革兰氏阳性菌具有抗菌作用；具有抗菌作用；具有抗菌作用；具
5、有抗菌作用；多粘菌素多粘菌素多粘菌素多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素窄谱抗生素窄谱抗生素窄谱抗生素；n n另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如另一些抗生素对多种细菌具有作用，例如四环素四环素四环素四环素、土土土土霉素霉素霉素霉素对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为对许多革兰氏阳性菌和阴性菌都有作用称为广广广广谱
6、抗生素。谱抗生素。谱抗生素。谱抗生素。二、实验原理二、实验原理第4页，共17页，编辑于2022年，星期五n n比如比如氨苄青霉素氨苄青霉素，对革兰氏阳性球，对革兰氏阳性球菌、菌、变形杆菌变形杆菌、沙门氏菌、痢疾杆、沙门氏菌、痢疾杆菌、产气荚膜杆菌、菌、产气荚膜杆菌、大肠杆菌大肠杆菌及及流感杆菌等都有很好的抗菌效果。流感杆菌等都有很好的抗菌效果。二、实验原理二、实验原理第5页，共17页，编辑于2022年，星期五3.3.化学消毒剂化学消毒剂对微生物分布的影响对微生物分布的影响 人体人体皮肤皮肤分布着一定种类与数分布着一定种类与数量的微生物。使用量的微生物。使用化学消毒剂化学消毒剂对皮对皮肤进行肤进
7、行表面消毒表面消毒是医院里进行无菌是医院里进行无菌操作常用的方法之一。操作常用的方法之一。二、实验原理二、实验原理第6页，共17页，编辑于2022年，星期五4.4.4.4.紫外线紫外线紫外线紫外线的杀菌作用的杀菌作用的杀菌作用的杀菌作用 波长为波长为波长为波长为200-300nm200-300nm200-300nm200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其的紫外线都有杀菌能力，其的紫外线都有杀菌能力，其的紫外线都有杀菌能力，其中以中以中以中以260nm260nm260nm260nm的杀菌能力最强的杀菌能力最强的杀菌能力最强的杀菌能力最强。其杀菌机理是。其杀菌机理是。其杀菌机理是。其杀菌机理是抑
8、制抑制抑制抑制DNADNADNADNA复制，以及产生复制，以及产生复制，以及产生复制，以及产生臭氧和臭氧和臭氧和臭氧和H H H H2 2 2 2O O O O2 2 2 2 而产生一定的杀菌而产生一定的杀菌而产生一定的杀菌而产生一定的杀菌作用。但紫外线作用。但紫外线作用。但紫外线作用。但紫外线穿透力弱穿透力弱穿透力弱穿透力弱，一般适用于，一般适用于，一般适用于，一般适用于表面消毒表面消毒表面消毒表面消毒和和和和空气消毒空气消毒空气消毒空气消毒。二、实验原理二、实验原理第7页，共17页，编辑于2022年，星期五三、实验材料三、实验材料1、菌种菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌、枯：大肠杆菌、白色葡萄
9、球菌、枯草芽孢杆菌等。草芽孢杆菌等。2、药敏片药敏片:青霉素、庆大霉素、环丙沙星、青霉素、庆大霉素、环丙沙星、菌必治菌必治第8页，共17页，编辑于2022年，星期五四、实验步骤四、实验步骤1.1.1.1.温度温度温度温度对微生物生长的影响（对微生物生长的影响（对微生物生长的影响（对微生物生长的影响（每组每组每组每组）（1 1 1 1）菌种菌种菌种菌种：大肠杆菌：大肠杆菌：大肠杆菌：大肠杆菌(白葡白葡白葡白葡)、枯草芽孢杆菌。、枯草芽孢杆菌。、枯草芽孢杆菌。、枯草芽孢杆菌。（2 2 2 2）培养基培养基培养基培养基：取肉汤培养基：取肉汤培养基：取肉汤培养基：取肉汤培养基（液体培养基）（液体培养基
10、）（液体培养基）（液体培养基）5 5 5 5支支支支。（3 3 3 3）接种接种接种接种：分别接种：分别接种：分别接种：分别接种大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌(白葡白葡白葡白葡)和和和和枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌各各各各2 2 2 2支支支支试管，余下试管，余下试管，余下试管，余下1 1 1 1支不接种支不接种支不接种支不接种作阴性作阴性作阴性作阴性对照对照对照对照。（4 4 4 4）加热加热加热加热：取接种的：取接种的：取接种的：取接种的大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌(白葡白葡白葡白葡)和和和和枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌培养培养培养培养基各基各
11、基各基各1 1 1 1支，于支，于支，于支，于100100100100作用作用作用作用15min15min15min15min后取出，冷水冲凉。后取出，冷水冲凉。后取出，冷水冲凉。后取出，冷水冲凉。5 5 5 5支试支试支试支试管管管管放入放入放入放入37373737温箱培养。温箱培养。温箱培养。温箱培养。（5 5 5 5）观察观察观察观察：培养：培养：培养：培养24h24h24h24h后后后后观察现象，并记录。观察现象，并记录。观察现象，并记录。观察现象，并记录。第9页，共17页，编辑于2022年，星期五2.2.2.2.抗生素抗生素抗生素抗生素对微生物生长的影响对微生物生长的影响对微生物生长
12、的影响对微生物生长的影响（1 1 1 1）菌种菌种菌种菌种：大肠杆菌（大肠杆菌（大肠杆菌（大肠杆菌（G G G G）、）、）、）、白色白色白色白色葡萄球菌或金黄色葡葡萄球菌或金黄色葡葡萄球菌或金黄色葡葡萄球菌或金黄色葡萄球菌（萄球菌（萄球菌（萄球菌（G G G G）。）。）。）。（2 2 2 2）接菌接菌接菌接菌 用用用用接种环接种环接种环接种环刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将无菌的棉签无菌的棉签无菌的棉签无菌的棉签在在在在无菌水无菌水无菌水无菌水(液体培养基液体培养基液体培养基液体培养基)中润湿；用湿润的
13、无菌棉签将中润湿；用湿润的无菌棉签将中润湿；用湿润的无菌棉签将中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的菌体平板上的菌体平板上的菌体平板上的菌体均匀涂布均匀涂布均匀涂布均匀涂布。（2 2 2 2种不同的菌种不同的菌种不同的菌种不同的菌各做各做各做各做1 1 1 1个个个个平板。）平板。）平板。）平板。）四、实验步骤四、实验步骤第10页，共17页，编辑于2022年，星期五（3 3 3 3）放置药敏片放置药敏片放置药敏片放置药敏片：用：用：用：用无菌镊子无菌镊子无菌镊子无菌镊子取取取取4 4 4 4种种种种不同不同不同不同的抗生素的抗生素的抗生素的抗生素药敏片药敏片药敏片药敏片各各各各1 1 1 1个个个
14、个，贴在平板上，贴在平板上，贴在平板上，贴在平板上（每个平板放（每个平板放（每个平板放（每个平板放4 4 4 4个），轻轻压一下，倒置。个），轻轻压一下，倒置。个），轻轻压一下，倒置。个），轻轻压一下，倒置。注意：注意：注意：注意：在贴滤纸条时在贴滤纸条时在贴滤纸条时在贴滤纸条时不要不要不要不要在培养基上在培养基上在培养基上在培养基上拖拖拖拖动动动动滤纸片，避免抗生素溶液在培养基中扩滤纸片，避免抗生素溶液在培养基中扩滤纸片，避免抗生素溶液在培养基中扩滤纸片，避免抗生素溶液在培养基中扩散时分布不均匀。散时分布不均匀。散时分布不均匀。散时分布不均匀。（4 4 4 4）培养培养培养培养：平板于：平板
15、于：平板于：平板于37373737培养培养培养培养24h24h24h24h后观察、记后观察、记后观察、记后观察、记录实验现象。录实验现象。录实验现象。录实验现象。四、实验步骤四、实验步骤第11页，共17页，编辑于2022年，星期五第12页，共17页，编辑于2022年，星期五3.3.3.3.化学消毒剂化学消毒剂化学消毒剂化学消毒剂对微生物分布的影响对微生物分布的影响对微生物分布的影响对微生物分布的影响（1 1 1 1）分区分区分区分区:将将将将1 1 1 1个个个个营养琼脂平板分为营养琼脂平板分为营养琼脂平板分为营养琼脂平板分为4 4 4 4个个个个区域；区域；区域；区域；（2 2 2 2人人人
16、人1 1 1 1个平板，每人个平板，每人个平板，每人个平板，每人2 2 2 2个区）个区）个区）个区）（2 2 2 2）接种接种接种接种：2 2 2 2名同学名同学名同学名同学直接用手指直接用手指直接用手指直接用手指在平板的在平板的在平板的在平板的2 2 2 2个个个个区域划之字形，待用区域划之字形，待用区域划之字形，待用区域划之字形，待用碘酒碘酒碘酒碘酒/酒精棉球酒精棉球酒精棉球酒精棉球消毒消毒消毒消毒后后后后，稍候片刻，再在另外，稍候片刻，再在另外，稍候片刻，再在另外，稍候片刻，再在另外2 2 2 2个区域个区域个区域个区域划之字划之字划之字划之字形形形形；（3 3 3 3）培养培养培养培
17、养：平板于：平板于：平板于：平板于37373737培养培养培养培养24h24h24h24h后观察、记后观察、记后观察、记后观察、记录实验现象。录实验现象。录实验现象。录实验现象。四、实验步骤四、实验步骤甲甲乙乙第13页，共17页，编辑于2022年，星期五4.4.4.4.紫外线紫外线紫外线紫外线的消毒作用（的消毒作用（的消毒作用（的消毒作用（穿透穿透穿透穿透作用）作用）作用）作用）（1 1 1 1）菌种：菌种：菌种：菌种：大肠杆菌、白色葡萄球菌大肠杆菌、白色葡萄球菌大肠杆菌、白色葡萄球菌大肠杆菌、白色葡萄球菌（2 2 2 2）接菌：接菌：接菌：接菌：用用用用接种环接种环接种环接种环刮取一环菌体，
18、轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将刮取一环菌体，轻放在平板上；将无菌的无菌的无菌的无菌的棉签棉签棉签棉签在在在在无菌水无菌水无菌水无菌水(液体培养基液体培养基液体培养基液体培养基)中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的中润湿；用湿润的无菌棉签将平板上的菌体菌体菌体菌体均匀涂布均匀涂布均匀涂布均匀涂布。【可做可做可做可做1 1 1 1种菌，也可做种菌，也可做种菌，也可做种菌，也可做2 2 2 2种（中间划线）种（中间划线）种（中间划线）种（中间划线）】。四、实验步骤四、实验步骤第14页，共1
19、7页，编辑于2022年，星期五4.4.4.4.紫外线紫外线紫外线紫外线的消毒作用（的消毒作用（的消毒作用（的消毒作用（穿透穿透穿透穿透作用）作用）作用）作用）（4 4 4 4）照射照射照射照射：用平皿盖：用平皿盖：用平皿盖：用平皿盖半遮盖平板半遮盖平板半遮盖平板半遮盖平板，置于，置于，置于，置于紫外灯照射紫外灯照射紫外灯照射紫外灯照射15min15min15min15min。（5 5 5 5）培养培养培养培养：盖上平皿盖，：盖上平皿盖，：盖上平皿盖，：盖上平皿盖，于于37373737培养培养培养培养24h24h24h24h后观察实验现后观察实验现后观察实验现后观察实验现象。象。象。象。四、实验步骤四、实验步骤第15页，共17页，编辑于2022年，星期五第16页，共17页，编辑于2022年，星期五思考题思考题n n如果药敏实验的抑菌带隔一段时间后如果药敏实验的抑菌带隔一段时间后又长出少许菌落，你如何解释这种现又长出少许菌落，你如何解释这种现象？象？要要 求求上交实验报告，写清楚实验现象，并解释实上交实验报告，写清楚实验现象，并解释实验结果。验结果。第17页，共17页，编辑于2022年，星期五