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1、实验五 可溶性总糖的测定第1页，共10页，编辑于2022年，星期五一、目的一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。原理和方法。第2页，共10页，编辑于2022年，星期五二、原理二、原理 强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在呈蓝绿色，该物质在620nm620nm处有最大吸收。在处有最大吸收。在1010100g100g范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。正比。这一方法有很高的灵敏度，
2、糖含量在这一方法有很高的灵敏度，糖含量在0g0g左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。适。第3页，共10页，编辑于2022年，星期五三、仪器、试剂和材料三、仪器、试剂和材料、仪器、仪器分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗；分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗；容量瓶；试管；水浴锅容量瓶；试管；水浴锅、试剂、试剂葡萄糖标准液；浓硫酸；葡萄糖标准液；浓硫酸；蒽酮试剂：蒽酮试剂：0.2g0.2g蒽酮溶于蒽酮溶于100mL100mL浓硫酸中当日配制使用。
3、浓硫酸中当日配制使用。、材料、材料小麦小麦第4页，共10页，编辑于2022年，星期五四、操作步骤四、操作步骤、葡萄糖标准曲线的制作、葡萄糖标准曲线的制作 取支大试管，按下表数据配制一系列不取支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：同浓度的葡萄糖溶液：第5页，共10页，编辑于2022年，星期五管号管号 1234567葡萄糖葡萄糖标准液标准液（mlml）0 0.10.20.30.40.60.8蒸馏水蒸馏水（mlml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖葡萄糖含量含量（gg）0102030406080第6页，共10页，编辑于2022年，星期五 在每支试管中立即加入蒽酮试剂在每支试
4、管中立即加入蒽酮试剂4.0ml4.0ml，加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸1010分钟取分钟取出，用流水冷却，室温放置出，用流水冷却，室温放置1010分钟，在分钟，在620nm620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。吸光值作纵坐标作标准曲线。第7页，共10页，编辑于2022年，星期五、植物样品中可溶性糖的提取、植物样品中可溶性糖的提取 将小麦剪碎至将小麦剪碎至mmmm以下，准确称取克，以下，准确称取克，放入放入5050三角瓶中，加沸水三角瓶中，加沸水25ml25ml，在水浴中加盖，在水浴
5、中加盖煮沸煮沸1010分钟，冷却后过滤，滤液收集在分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml50ml容容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液量瓶中，定容至刻度。吸取提取液mlml置另一置另一50ml50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测定。定。第8页，共10页，编辑于2022年，星期五、测定、测定 吸取吸取mlml已稀释的提取液于大试管中，加已稀释的提取液于大试管中，加入入4.0ml4.0ml蒽酮试剂，以一操作同标准曲线制作。蒽酮试剂，以一操作同标准曲线制作。比色波长比色波长620nm620nm，记录吸光度，在标准曲线上，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（查出葡萄糖的含量（gg）。）。查表所得糖含量查表所得糖含量稀释倍数稀释倍数第9页，共10页，编辑于2022年，星期五五、结果处理五、结果处理植物样品含糖量（）查表所得糖含量植物样品含糖量（）查表所得糖含量（gg）稀释倍数样品重（稀释倍数样品重（g g）106100106100第10页，共10页，编辑于2022年，星期五