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1、关于微生物的关于微生物的实验室培养室培养(7)第1页，讲稿共60张，创作于星期日一、微生物的概念与分类概念：个体多数十分概念：个体多数十分微小微小，结构都相当，结构都相当简单简单，通常，通常要用要用光学显微镜或电子显微镜光学显微镜或电子显微镜才能看到的才能看到的低等低等生物。生物。分类：分类：u病毒界（植物病毒、动物病毒、噬菌体）u原核生物界（细菌、蓝藻、放线菌、支原体、衣原体）u真菌界（酵母菌、霉菌、大型真菌）u原生生物界（衣藻、草履虫、变形虫等）特点：特点：结构都相当简单，个体多数十分微小。结构都相当简单，个体多数十分微小。第2页，讲稿共60张，创作于星期日基础知识补充基础知识补充第3页，
2、讲稿共60张，创作于星期日1、细菌、细菌（原核生物）（原核生物）：鞭鞭 毛毛荚荚 膜膜细胞壁细胞壁细胞膜细胞膜拟拟 核核细胞质细胞质细胞壁：细胞壁：（1 1）基本结构）基本结构与功能与功能功能：保护细胞和维持细胞形状功能：保护细胞和维持细胞形状成分：肽聚糖成分：肽聚糖应用：应用：溶菌酶、青霉素溶菌酶、青霉素等可破坏细菌等可破坏细菌的细胞壁的细胞壁第4页，讲稿共60张，创作于星期日鞭鞭 毛毛荚荚 膜膜细胞壁细胞壁细胞膜细胞膜拟拟 核核细胞质细胞质鞭毛：鞭毛：（2 2）特殊结构与功能）特殊结构与功能功能：与运动有关功能：与运动有关荚膜：荚膜：位置：细胞壁位置：细胞壁外外成分：多糖成分：多糖和多和多
3、肽肽功能功能：（：（1）抵抗干燥（）抵抗干燥（2）加）加强致病力，免受吞噬强致病力，免受吞噬1、细菌、细菌（原核生物）（原核生物）：第5页，讲稿共60张，创作于星期日芽孢：芽孢：（2 2）特殊结构与功能）特殊结构与功能 有些细菌在一定的条件下，细胞有些细菌在一定的条件下，细胞质高度浓缩脱水形成的椭圆形休眠体，质高度浓缩脱水形成的椭圆形休眠体，叫做叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力的环境有很强的抵抗力。芽孢又芽孢又小小又又轻轻，可以随风飘散。，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时当环境适宜（如温度、水分适宜）
4、的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.研究意义：研究意义：衡量各种消毒灭菌措施的主要指标衡量各种消毒灭菌措施的主要指标。1、细菌、细菌（原核生物）（原核生物）：第6页，讲稿共60张，创作于星期日细菌（单细胞的原核生物）（3）细菌的繁殖：细菌的繁殖：a.繁殖方式：主要以繁殖方式：主要以二分裂二分裂的的方式繁殖方式繁殖Q:有人说，细菌细胞分裂时无有人说，细菌细胞分裂时无纺锤体和染色体的出现，因此纺锤体和染色体的出现，因此属于无丝分裂，这种说法对吗属于无丝分裂，这种说法对吗？第7页，讲稿共60张，创作于星期日细菌（单细胞的原核生物）(3)细菌的繁殖：细菌的繁殖：b.菌
5、落：菌落：概念：概念：单个或者少数细菌单个或者少数细菌在在固体培养基固体培养基上大量繁上大量繁殖时，会形成一个殖时，会形成一个肉肉眼可见的、具有一定眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群形态结构的子细胞群体体第8页，讲稿共60张，创作于星期日细菌（单细胞的原核生物）特征：特征：不同种类的细菌形成的菌不同种类的细菌形成的菌落，在落，在大小、形状、光大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透泽度、颜色、硬度、透明度明度等方面具有不同的等方面具有不同的特征。特征。应用：应用：菌种鉴定菌种鉴定(3)细菌的繁殖：细菌的繁殖：b.菌落：菌落：第9页，讲稿共60张，创作于星期日2、放线菌（原核生物）、放线菌（原核生物
6、）结构：结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）第10页，讲稿共60张，创作于星期日孢子孢子生殖细胞生殖细胞孢子是细菌、细菌、原生原生动动物、真菌和植物等物、真菌和植物等产产生的一种有繁殖或休眠作用生的一种有繁殖或休眠作用的生殖的生殖细细胞胞，能直接能直接发发育成新个体。育成新个体。第11页，讲稿共60张，创作于星期日3、真菌（真核细胞）、真菌（真核细胞）（1）单细胞真菌）单细胞真菌酵母菌酵母菌酵母菌、霉菌、大型真菌（蘑菇、木耳等）酵母菌、霉菌、大型真菌（蘑菇、木耳等）第12页，讲稿共60张，创作于星期日（2）丝状真菌（霉菌）丝状真菌（霉菌
7、）霉菌：是霉菌：是丝丝状真菌的俗称，意即状真菌的俗称，意即发发霉的真菌霉的真菌，它，它们们往往往能形成分枝繁茂的菌往能形成分枝繁茂的菌丝丝体。体。在潮湿温暖的地方，很多物品上在潮湿温暖的地方，很多物品上长长出一些肉眼可出一些肉眼可见见的的绒绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。第13页，讲稿共60张，创作于星期日（3）大型真菌）大型真菌第14页，讲稿共60张，创作于星期日原生生物界：原生生物界：例如：衣藻、草履虫、变形虫等第15页，讲稿共60张，创作于星期日课题1 微生物的实验室培养1.提供营养和条件2.防止污染第16页，讲稿共60张，创作于星期日一、基
8、础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的制出供其生长繁殖的营养基质。营养基质。1、培养基的营养构成、培养基的营养构成（1 1）基本成分：）基本成分：（2 2）特殊营养：）特殊营养：维生素、碱基等（维生素、碱基等（生长因子）生长因子）（3 3）pHpH、氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。、氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)水、水、碳
9、源、碳源、氮源、氮源、无机盐等无机盐等第17页，讲稿共60张，创作于星期日2、培养基种类：、培养基种类：第18页，讲稿共60张，创作于星期日选择培养基选择培养基加入加入青霉素青霉素的培养基的培养基:分离分离酵母菌、霉菌等真菌酵母菌、霉菌等真菌加入加入高浓度食盐高浓度食盐的培养基的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌 只含氮气的只含氮气的培养基培养基:分离固氮菌分离固氮菌只含无机碳只含无机碳的培养基的培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物可抑制细菌、放线菌细胞壁主要成分肽聚糖的合成其细胞壁是由纤维素、几丁质、葡聚糖组成第19页，讲稿共60张，创作于星期日3、培养基配制原则 （2）营养要
10、协调营养要协调：营养全面、浓度适宜、比例恰当营养全面、浓度适宜、比例恰当 （3）pH要适宜要适宜：各种微生物适宜生长的：各种微生物适宜生长的pH范围不同范围不同 细菌细菌pH为：为：6.5-7.5；放线菌放线菌pH为：为：7.5-8.5；真菌真菌pH为：为：5.0-6.0。目的明确：目的明确：有机碳源有机碳源异养型：异养型：根据微生物的根据微生物的种类、培养目的种类、培养目的选择原料选择原料自养型：自养型：无机碳源无机碳源（COCO2 2碳源，碳源，碳酸盐碳酸盐）第20页，讲稿共60张，创作于星期日二、无菌技术：二、无菌技术：1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 指医疗、护理技术过程中，防止一
11、切微生指医疗、护理技术过程中，防止一切微生物侵入人体和保持无菌物品及无菌区域不被污物侵入人体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。染的操作技术和管理方法。第21页，讲稿共60张，创作于星期日（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：是指使用是指使用强烈强烈的理化因素杀死物体内外的理化因素杀死物体内外所有的所有的微生微生物，包括所有细菌的孢子、芽孢、霉菌及病毒，而达到物，包括所有细菌的孢子、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。（包括（包括芽孢、孢子芽孢、孢子）2.消毒与灭菌及两者的区别消毒与灭菌及两者的区别使用较为使用较为温和温和化学或物理方法，杀死物体表面或内部的
12、化学或物理方法，杀死物体表面或内部的部分部分微生物的过程。微生物的过程。（不包括芽孢、孢子）（不包括芽孢、孢子）（）（）消毒定义：消毒定义：第22页，讲稿共60张，创作于星期日消毒的方法：消毒的方法：1 1、煮沸消毒法：、煮沸消毒法：100100煮沸煮沸5 56min6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70707575下煮下煮30min30min或或8080下煮下煮15min15min3 3、用体积分数为、用体积分数为50%70%70%酒精溶液等进行皮肤消毒酒精溶液等进行皮肤消毒4 4、氯气消毒水源、氯气消毒水源5 5、紫外线消毒、紫外线消毒灭菌的方法：灭菌的方法：1 1、灼烧灭菌、灼烧
13、灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160160170170下加热下加热1 12h2h3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持151530min30min3.3.常用的消毒与灭菌的方法：常用的消毒与灭菌的方法：是指用紫外线（能量）照射杀灭微生物的方法，紫外线不仅能使核酸、蛋白质变性，而且能使空气中氧气产生微量臭氧，从而达到共同杀菌作用。第23页，讲稿共60张，创作于星期日1 1、灼烧灭菌：、灼烧灭菌：灭菌的方法：灭菌的方法：2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160160170170下加热下加热1 12h2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：1
14、00kPa100kPa、121121条件下维持条件下维持151530min30min。接种环、接种针、接种环、接种针、试管口试管口第24页，讲稿共60张，创作于星期日2.2.无菌范围：无菌范围：A.A.实验操作空间消毒实验操作空间消毒B.B.操作者的手、衣着消毒操作者的手、衣着消毒C.C.实验用具灭菌实验用具灭菌D D.实验操作过程实验操作过程二二.无菌技术：无菌技术：1.1.消毒与灭菌：消毒与灭菌：酒精灯旁操作酒精灯旁操作超净工作台超净工作台 如：如：培养基、培养基、和玻璃、金属材质的和玻璃、金属材质的器具（器具（培养皿、玻棒、试管、烧瓶、培养皿、玻棒、试管、烧瓶、镊子、剪刀，等）镊子、剪刀
15、，等）第25页，讲稿共60张，创作于星期日 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，（它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏基本保持培养基的营养成分不被破坏。）。）有些有些玻璃器皿也可采用玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。补充：补充：第26页，讲稿共60张，创作于星期日1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具
16、是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。第27页，讲稿共60张，创作于星期日微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2、培养基的配制、培养
17、基的配制3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4、倒平板、倒平板5、微生物接种、微生物接种6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7、菌种的保存、菌种的保存第28页，讲稿共60张，创作于星期日三三.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（用于细菌培养用于细菌培养）1.1.计算：计算：依配方计算各成分的用量依配方计算各成分的用量2.2.称量：称量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快牛肉膏、称量纸牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解、少量水加热溶解取纸取纸蛋白胨、蛋白胨、NaCl
18、NaCl琼脂琼脂补水定容补水定容（容量瓶中）（容量瓶中）4.4.调调pHpH、分散成单个细胞分散成单个细胞,形成单个菌落形成单个菌落6.6.分装、（将培养基由容量瓶转入锥形瓶）分装、（将培养基由容量瓶转入锥形瓶）7.7.加塞、包扎：加塞、包扎：第29页，讲稿共60张，创作于星期日 8 8灭菌灭菌:将将装有培养基的锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在将将装有培养基的锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将培养皿用牛皮纸包裹，放入干热灭菌箱内，在将培养皿用牛皮纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160160170 170
19、 下灭菌下灭菌2 2h h。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒平板。左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平板，无杂菌污染才可用后观察平板，无杂菌污染才可用来接种来接种.第30页，讲稿共60张，创作于星期日 9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平板，无杂菌污染才可用来接后观察平板，无杂菌污染才可用来接种种.10 10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培
20、养基放入3737的温室中的温室中培养培养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。第31页，讲稿共60张，创作于星期日 10 10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。第32页，讲稿共60张，创作于星期日1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉
21、锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。养基。第33页，讲稿共60张，创作于星期日3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？答：平
22、板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第34页，讲稿共60张，创作于星期日（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌常用的微生物接种方法：常用的微生物接种方法：1.平板划线法平板划线法2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法三三.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（一
23、）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（用于细菌培养用于细菌培养）第35页，讲稿共60张，创作于星期日二二.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：平板划线法：平板划线法：1.1.接种：接种：第36页，讲稿共60张，创作于星期日第37页，讲稿共60张，创作于星期日一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状
24、的菌落。个条状的菌落。第38页，讲稿共60张，创作于星期日划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线（重复实验）（重复实验）（空白对照）（空白对照）第39页，讲稿共60张，创作于星期日1.接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液,但要在培养基不同位但要在培养基不同位置置连续划线多次连续划线多次.2.划线划线首尾不能相接首尾不能相接3.划线后划线后,培养皿培养皿倒置培养倒置培养划线分离法注意事项划线分离法注意事项:第40页，讲稿共60张，创作于星期日为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧灼烧接种环？在划线操作结束时
25、，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物能存在的微生物污染培养物杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。染操作者。第41页，讲稿共60张
26、，创作于星期日 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的
27、菌落。少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第42页，讲稿共60张，创作于星期日6 6支试管，分别加入支试管，分别加入9ml9ml无菌水无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：菌液菌液微量微量 移液器移液器第43页，讲稿共60张，创作于星期日稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：a.a.梯度稀释菌液：梯度稀释菌液：b.b.涂布平板：涂布平板：不超过不超过0.1ml0.1ml各梯度分别涂布各梯度分别涂布3个平板个平板1 1个不涂布作空白对照个不涂布作空白对照滴滴灼灼试试涂涂稀稀释释10103 3
28、倍倍稀稀释释10104 4倍倍稀稀释释10105 5倍倍应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等.第44页，讲稿共60张，创作于星期日平板划线法：平板划线法：二二.大肠杆菌的纯化培养：大肠杆菌的纯化培养：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌：纯化大肠杆菌：1.1.接种：接种：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：2.2.培养：培养：将将接种后接种后的三个培养基和一个的三个培养基和
29、一个未接种未接种的培养基的培养基放入放入3737恒温箱中培养恒温箱中培养12h12h24h24h后，后，观察并记录观察并记录第45页，讲稿共60张，创作于星期日三三.菌种的保藏：菌种的保藏：1.1.临时保藏：临时保藏：试管固体斜面培养基上试管固体斜面培养基上442.2.长期保存：长期保存：菌种易被污染、变异菌种易被污染、变异甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020当培养基冷却至当培养基冷却至50 左右时，将左右时，将试管带棉塞的一端试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁在一根木棒上。搁置的长度要合适搁置的长度要合适，使培养基形成的，使培养基形成的斜面的长度不超过斜面的长度不
30、超过试管总长的一半。试管总长的一半。第46页，讲稿共60张，创作于星期日四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；并符合大肠杆菌菌落的特点，则
31、说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态
32、度与习惯。度与习惯。第47页，讲稿共60张，创作于星期日本课题知识小结本课题知识小结:第48页，讲稿共60张，创作于星期日【典例解析典例解析】例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于微生物的具体情况分析。对于A A
33、、B B选项，它的表达是不完整的。有选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁多，选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而可作为自养型微生
34、物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。则只能提供无机盐。对于对于DD选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3NH3可为硝可为硝化细菌提供能量和氮源。化细菌提供能量和氮源。答案：答案：D第49页，讲稿共60张，创作于星期日例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确不正确不正确的是的是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解
35、析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是A A正确正确的；的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C是正确是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门
36、接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。菌就会把所接菌种也杀死。第50页，讲稿共60张，创作于星期日例例3 3右表是某微生物培养右表是某微生物培养基成分，请据此回答：基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养的）右表培养基可培养的微生物类型微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，可如不想浪费此培养基，可再加入再加入 .自养型微生物自养型微生物含碳有机物含碳有机物第51页，讲稿共60张，创作于星期日（3 3）若除去成分）若除去成分，加入
37、（，加入（CH2OCH2O），该培养），该培养基可用于培养基可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则是）右表中各成分重量确定的原则是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是分是 。固氮微生物固氮微生物3调整调整pHpH依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）第52页，讲稿共60张，创作于星期日液体培养基：液体培养基：表面生
38、长表面生长表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力无动力无动力有动力有动力(弥散弥散)固体培养基：菌落固体培养基：菌落(是否运动是否运动)第53页，讲稿共60张，创作于星期日水作用水作用:n 是细胞中生化反应的良好介质；营养物质和代是细胞中生化反应的良好介质；营养物质和代谢产物都必须溶解在水里，才能被吸收或排出体谢产物都必须溶解在水里，才能被吸收或排出体（细胞）外。（细胞）外。n 水的比热高，能有效的吸收代谢过程中放出的水的比热高，能有效的吸收代谢过程中放出的热量，不致使细胞的温度骤然上升。热量，不
39、致使细胞的温度骤然上升。n 维持细胞的膨压（控制细胞形态）。维持细胞的膨压（控制细胞形态）。第54页，讲稿共60张，创作于星期日：提供碳元素的物质。：提供碳元素的物质。无机碳源：无机碳源：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3、Ca(HCOCa(HCO3 3)2 2等等有机碳源：有机碳源：糖类糖类、脂肪酸、花生粉、脂肪酸、花生粉饼、石油等饼、石油等构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物有些碳源是异养微生物的主要能有些碳源是异养微生物的主要能源物质源物质.概念概念.来源：来源：.作用：作用：碳源碳源:凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的
40、营养物质都称为碳源质都称为碳源。自养微生物自养微生物:以二氧化碳或碳酸盐为惟一碳源进行代谢生以二氧化碳或碳酸盐为惟一碳源进行代谢生长；长；异养微生物异养微生物:必须以有机物作为碳源进行代谢生长。必须以有机物作为碳源进行代谢生长。第55页，讲稿共60张，创作于星期日氮源氮源无机氮源：无机氮源：无机氮源：无机氮源：N N N N2 2、NHNH4 4+、NONONONO3 3-、NHNHNHNH3 3 3 3等。等。有机氮源：有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等等主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含氮氮的代谢产物。的代谢产物。的代谢产物。的代谢产
41、物。.来源：来源：来源：来源：.作用：作用：作用：作用：提供氮元素的物质。提供氮元素的物质。.概念：概念：概念：概念：对许多微生物来说，既可利用无机态氮，也可利用有机态氮。对许多微生物来说，既可利用无机态氮，也可利用有机态氮。固氮微生物可以利用氮气作为氮源进行生长。固氮微生物可以利用氮气作为氮源进行生长。某些种类的氮源也能为微生物提供能量，如某些种类的氮源也能为微生物提供能量，如NH3既是硝化细菌的氮源又是能既是硝化细菌的氮源又是能源，含源，含C、H、O、N的蛋白质等也能为微生物提供能量。的蛋白质等也能为微生物提供能量。第56页，讲稿共60张，创作于星期日无机盐无机盐无机化合物无机化合物.来源
42、：来源：.提供除碳源、氮源以外的各种重要提供除碳源、氮源以外的各种重要提供除碳源、氮源以外的各种重要提供除碳源、氮源以外的各种重要元素元素元素元素。.概念：概念：第57页，讲稿共60张，创作于星期日.常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：常见的生长因子：.概念：概念：.作用：作用：微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。生长因子生长因子.来源：来源：来源：来源：酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等。酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等。酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等。酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等。第58页，讲稿共60张，创作于星期日第59页，讲稿共60张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第60页，讲稿共60张，创作于星期日