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1、关于实验四小鼠精子畸形试验第1页，讲稿共13张，创作于星期日目的目的 精精子子畸畸形形试试验验是是检检测测受受试试化化学学毒毒物物能能否否破破坏坏哺哺乳乳动动物物精精子子正正常常形形态态的的实实验验方方法法。通通过过该该实实验验，学学习习和和掌掌握握小小鼠鼠精精子子畸畸形形试试验的原理和步骤。验的原理和步骤。第2页，讲稿共13张，创作于星期日原理原理v小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间性染色体基因直接或间接地决定精子形态。接地决定精子形态。v精子的畸形主要是指形态的异常，是决定精精子的畸形主要是
2、指形态的异常，是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。第3页，讲稿共13张，创作于星期日器材和试剂器材和试剂v器材：器材：眼眼科科剪剪、眼眼科科镊镊、小小平平皿皿、显显微微镜镜、擦擦镜镜纸纸、带带橡橡皮皮头头吸吸管管、载载玻玻片片、玻玻璃璃染染缸缸v试试剂剂 生生理理盐盐水水、甲甲醇醇（分分析析纯纯）、环环磷磷酰酰胺胺第4页，讲稿共13张，创作于星期日操作步骤操作步骤v动物动物 雄性雄性小鼠小鼠68 周龄，体重周龄，体重2030gv药物药物 环磷酰胺环磷酰胺v剂量剂量 环磷酰
3、胺环磷酰胺40mg/kg腹腔注射，每天腹腔注射，每天 1次，连续次，连续5天天第5页，讲稿共13张，创作于星期日制制 片片v在在第第1次次染染毒毒后后第第45周周，小小鼠鼠脱脱颈颈椎椎处处死死，剪剪开开腹腹腔腔，分分离离并并摘摘取取双双侧侧附附睾睾，将将附附睾放入有约睾放入有约1mL生理盐水的小平皿中。生理盐水的小平皿中。第6页，讲稿共13张，创作于星期日制制 片片v用用眼眼科科剪剪将将附附睾睾纵纵向向剪剪12刀刀，用用吸吸管管将将悬悬浮液轻轻吹打浮液轻轻吹打5-6次，静置次，静置3-5min；v用用4层层擦擦镜镜纸纸过过滤滤除除组组织织碎碎片片，用用胶胶头头滴滴管管吸吸取取精精子子悬悬液液，
4、滴滴一一滴滴于于清清洁洁载载玻玻片片上上，均匀推片；均匀推片；v待玻片晾干后用甲醇固定待玻片晾干后用甲醇固定5分钟，干燥。分钟，干燥。第7页，讲稿共13张，创作于星期日v先先用用低低倍倍镜镜粗粗检检，找找到到背背景景清清晰晰、精精子子重重叠叠较较少少的的部部位位，用用高高倍倍镜镜检检查查精精子子形形态态。每每只只小鼠检查精子小鼠检查精子1000条。条。v精精子子畸畸形形：主主要要在在头头部部，其其次次为为尾尾部部。畸畸形形类类型型可可分分为为无无钩钩、香香蕉蕉形形、双双头头、胖胖头头、无无定形、尾折叠、双尾等。定形、尾折叠、双尾等。v分分别别记记录录异异常常类类型型和和数数量量，以以便便统统计
5、计精精子子畸畸形率及精子畸形类型的构成比。形率及精子畸形类型的构成比。镜镜 检检第8页，讲稿共13张，创作于星期日注意事项注意事项v判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精判断双头、双尾畸形时，要注意与两条精子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与子的部分重叠相鉴别，判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。人为剪碎及折叠相鉴别。v使用的小鼠要健康，以免感染、体温增高使用的小鼠要健康，以免感染、体温增高等可能导致精子畸形率增高，造成假阳性等可能导致精子畸形率增高，造成假阳性结果。结果。第9页，讲稿共13张，创作于星期日结果分析与评价结果分析与评价v计计算算精精子子畸畸形形发发生生率率，与与阴阴性性对对照照组组比比较较，畸畸形形率率至至少少为为阴阴性性对对照照组组的的2倍倍或或2倍倍以以上上；或或经经统统计计有有显显著著性性差差异异（P0.01），并有剂量反应关系），并有剂量反应关系。v一一般般阴阴性性对对照照组组的的精精子子异异常常率率为为0.83.4。第10页，讲稿共13张，创作于星期日正常和畸形精子形状正常和畸形精子形状第11页，讲稿共13张，创作于星期日40 x第12页，讲稿共13张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第13页，讲稿共13张，创作于星期日