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1、关于常见病原微生物的检测PPT 第1页，讲稿共82张，创作于星期日2n兔血兔血浆浆制制备备:无菌采取兔心无菌采取兔心脏脏血血,以以1份份灭灭菌的菌的3.8%枸枸橼橼酸酸钠钠液抗凝液抗凝剂剂加加4份兔血的比例充分混匀份兔血的比例充分混匀,离心离心,吸取上清液即吸取上清液即为为原兔血原兔血浆浆,分装分装成成1ml/支或支或0.5ml/支支;n另用另用灭灭菌生理菌生理盐盐水水稀稀释释兔血兔血浆浆,制成制成4倍稀倍稀释释血血浆浆(以下以下简简称称为为稀稀释释兔血兔血浆浆),分装同上分装同上,于于-18以下冰以下冰冻冻保存保存,供供试验试验遗留问题遗留问题第2页，讲稿共82张，创作于星期日3第一节第一节
2、 炭疽杆菌（一）炭疽杆菌（一）n炭疽杆菌炭疽杆菌（Bacillusanthraci）属于需氧芽胞杆菌属，能属于需氧芽胞杆菌属，能引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主义作为引起羊、牛、马等动物及人类的炭疽病。炭疽杆菌曾被帝国主义作为致死战剂之一。致死战剂之一。n（一）生物学性状（一）生物学性状n1.菌体粗大，排列似竹节状，无鞭毛，无动力，菌体粗大，排列似竹节状，无鞭毛，无动力，革兰氏染色阳性革兰氏染色阳性，本，本菌在氧气充足，温度适宜菌在氧气充足，温度适宜（2530）的条件下易形成芽胞的条件下易形成芽胞。第3页，讲稿共82张，创作于星期日42.在在活体活体或未或未经经解剖的尸体
3、内，解剖的尸体内，则则不能形成芽胞。芽胞呈不能形成芽胞。芽胞呈椭圆椭圆形，形，位于菌体中央，其位于菌体中央，其宽宽度小于菌体的度小于菌体的宽宽度。度。3.形成形成荚荚膜膜是毒性特征。是毒性特征。4.炭疽杆菌受低炭疽杆菌受低浓浓度青霉素作用，菌体可度青霉素作用，菌体可肿肿大形成园珠，称大形成园珠，称为为“串珠反串珠反应应”。这这也是炭疽杆菌特有的反也是炭疽杆菌特有的反应应。第4页，讲稿共82张，创作于星期日5n1.本菌本菌专专性需氧或兼性性需氧或兼性厌厌氧，在普通培养基中易繁殖。氧，在普通培养基中易繁殖。n2.最适温度最适温度为为37，最适，最适pH为为7.27.4n3.在在琼琼脂平板培养脂平板
4、培养24小小时时，粗糙菌落。菌落呈毛玻璃状，粗糙菌落。菌落呈毛玻璃状，边缘边缘不整不整齐齐，呈卷，呈卷发发状，有一个或数个小尾突起，状，有一个或数个小尾突起，这这是本菌向外伸延繁殖所致是本菌向外伸延繁殖所致。（二）培养特性（二）培养特性第5页，讲稿共82张，创作于星期日6n4.在在510%绵绵羊血液羊血液琼琼脂平板上，菌落周脂平板上，菌落周围围无明无明显显的溶血的溶血环环，但培养但培养较较久后可出久后可出现轻现轻度溶血。菌落有粘性，用接种度溶血。菌落有粘性，用接种针钩针钩取可拉取可拉成成丝丝，称称为为“拉拉丝丝”现现象象。n5.在普通肉在普通肉汤汤培养培养1824小小时时，管底有絮状沉淀生，管
5、底有絮状沉淀生长长，无菌膜，无菌膜，菌液清亮。菌液清亮。有毒株在碳酸有毒株在碳酸氢钠氢钠平板，平板，20%CO2培养下，形成培养下，形成粘液状菌落（有粘液状菌落（有荚荚膜），而无毒株膜），而无毒株则为则为粗糙状。粗糙状。第6页，讲稿共82张，创作于星期日7n（三）抵抗力（三）抵抗力n繁殖体抵抗力不强，易被一般消毒剂杀灭，而芽胞抵抗力强，在干繁殖体抵抗力不强，易被一般消毒剂杀灭，而芽胞抵抗力强，在干燥的室温环境中可存活数十年，在皮毛中可存活数年。牧场一旦被燥的室温环境中可存活数十年，在皮毛中可存活数年。牧场一旦被污染，芽胞可存活数年至数十年。煮沸污染，芽胞可存活数年至数十年。煮沸1010分钟或干
6、热分钟或干热14031403小时可小时可将芽胞杀死。炭疽芽胞对碘特别敏感，对青霉素、链霉素、卡那霉将芽胞杀死。炭疽芽胞对碘特别敏感，对青霉素、链霉素、卡那霉素等高度敏感。素等高度敏感。第7页，讲稿共82张，创作于星期日8一）致病性一）致病性n人人类类主要通主要通过过工工农业农业生生产产而感染。机体抵抗力降低而感染。机体抵抗力降低时时，接触，接触污污染物品可染物品可发发生下列疾病：生下列疾病：n1皮肤炭疽，最常皮肤炭疽，最常见见，多，多发发生于屠宰或毛刷工人及生于屠宰或毛刷工人及饲饲养养员员。n2纵纵隔障炭疽，隔障炭疽，少少见见。由吸入病菌芽胞所致，多。由吸入病菌芽胞所致，多发发生于皮毛工人，生
7、于皮毛工人，病死率高。病初似感冒，病死率高。病初似感冒，进进而出而出现严现严重的支气管肺炎，可在重的支气管肺炎，可在23天天内死于中毒性休克。内死于中毒性休克。二、致病性与免疫性二、致病性与免疫性第8页，讲稿共82张，创作于星期日9n3肠炭疽，肠炭疽，由食入病兽肉制品所致，以全身中毒症状为主，由食入病兽肉制品所致，以全身中毒症状为主，并有胃肠道溃疡、出血及毒血症，发病后并有胃肠道溃疡、出血及毒血症，发病后23日内死亡。日内死亡。n上述疾病若引起上述疾病若引起败血症时败血症时，可继发，可继发“炭疽性脑膜炎炭疽性脑膜炎”。炭疽杆菌。炭疽杆菌的致病性取决于荚膜和毒素的协同作用。的致病性取决于荚膜和毒
8、素的协同作用。第9页，讲稿共82张，创作于星期日10n（二）免疫性n注射炭疽外毒素中保护性抗原于机体，能形成抗毒素免疫，对注射炭疽外毒素中保护性抗原于机体，能形成抗毒素免疫，对受染炭疽有保护作用。但单纯的荚膜抗体对机体没有保护作用。受染炭疽有保护作用。但单纯的荚膜抗体对机体没有保护作用。病后可获较强的免疫力。病后可获较强的免疫力。第10页，讲稿共82张，创作于星期日11三、微生物学检查三、微生物学检查n1.采集皮肤炭疽的脓液、渗出物，肠炭疽的粪便以及病人的的血液等送采集皮肤炭疽的脓液、渗出物，肠炭疽的粪便以及病人的的血液等送检，检，兽尸禁止解剖，兽尸禁止解剖，可割取耳朵或舌尖一片送检。可割取耳
9、朵或舌尖一片送检。n2.将标本直接涂片，沙黄荚膜染色镜检，观察形态及荚膜特征，可以将标本直接涂片，沙黄荚膜染色镜检，观察形态及荚膜特征，可以初步帮助诊断。初步帮助诊断。第11页，讲稿共82张，创作于星期日12n3.确确诊应进诊应进行行血平板分离培养血平板分离培养，37孵育孵育1215小小时时，钩钩取取可疑菌落，可疑菌落，进进行行青霉素串珠青霉素串珠试验试验，噬菌体裂解，噬菌体裂解试验试验，碳酸，碳酸氢钠氢钠平板二氧化碳培养。平板二氧化碳培养。荚荚膜膜肿胀试验肿胀试验和小白鼠致病力和小白鼠致病力试验试验等与其等与其他需氧芽胞杆菌他需氧芽胞杆菌进进行行鉴别鉴别确定。确定。第12页，讲稿共82张，创
10、作于星期日13四、特异防治四、特异防治n1.预防人类炭疽首先应防止家畜炭疽的发生。家畜炭疽感染预防人类炭疽首先应防止家畜炭疽的发生。家畜炭疽感染消灭后，人类的传染源也随之消灭。消灭后，人类的传染源也随之消灭。n2.目前我国使用的炭疽活疫菌，作目前我国使用的炭疽活疫菌，作皮上划痕皮上划痕接种，免疫力可接种，免疫力可维护半年至一年。青霉素是治疗炭疽的首选药物，对肠道维护半年至一年。青霉素是治疗炭疽的首选药物，对肠道及吸入性炭疽治疗困难，有条件的可用抗血清及吸入性炭疽治疗困难，有条件的可用抗血清。第13页，讲稿共82张，创作于星期日14五、检测方法五、检测方法n1.环状沉淀反应环状沉淀反应n2.噬菌
11、体裂解实验噬菌体裂解实验n3.荚膜荧光抗体检测荚膜荧光抗体检测n4.质谱分析法质谱分析法第14页，讲稿共82张，创作于星期日15第一节第一节 布鲁氏杆菌布鲁氏杆菌（二）n本菌属初次分离培养本菌属初次分离培养时时多呈小球杆状，多呈小球杆状，毒力菌株有毒力菌株有荚荚膜膜，经传经传代培养代培养渐渐呈杆状，呈杆状，革革兰兰氏染色阴性氏染色阴性。n我国流行的是我国流行的是羊、羊、牛、猪布氏杆菌牛、猪布氏杆菌一、生物学性状一、生物学性状1.形形态态染色染色第15页，讲稿共82张，创作于星期日16n本菌本菌为为严严格需氧菌格需氧菌；n牛布氏杆菌在初次分离牛布氏杆菌在初次分离时时，需在，需在510%CO2环环
12、境中才能生境中才能生长长，最最适温度适温度37，最适的，最适的pH6.67.1，营营养要求高，生养要求高，生长时长时需需硫胺硫胺素，烟草酸和生物素，泛酸素，烟草酸和生物素，泛酸钙钙等，等，实验实验室常用室常用肝浸液培养基或改肝浸液培养基或改良厚氏培养基良厚氏培养基。n此菌生此菌生缓缓慢，培养慢，培养48小小时时后才出后才出现现透明的小菌落，透明的小菌落，鸡鸡胚培养也能胚培养也能生生长长。2.培养特性培养特性第16页，讲稿共82张，创作于星期日17n在自然界中抵抗力在自然界中抵抗力较较强强，在，在病畜的病畜的脏脏器和分泌物中器和分泌物中，一般能存，一般能存活活4个月左右，在个月左右，在食品中食品
13、中约约能生存能生存2个月。个月。对对低温的抵抗力也低温的抵抗力也强强，对热对热和消毒和消毒剂剂抵抗力弱。抵抗力弱。对对链链霉素、霉素、氯氯霉素和四霉素和四环环素素等均敏感。等均敏感。3.抵抗力抵抗力第17页，讲稿共82张，创作于星期日18n本菌侵入人体后，被吞噬细胞吞噬，由于本菌侵入人体后，被吞噬细胞吞噬，由于本菌具有荚膜本菌具有荚膜，能抵抗吞噬细，能抵抗吞噬细胞的吞噬消毁，并能在该细胞内增殖。反复出现胞的吞噬消毁，并能在该细胞内增殖。反复出现菌血症菌血症。由于内毒素。由于内毒素的作用，病人出现的作用，病人出现发热、无力等中毒症状发热、无力等中毒症状，血流中细菌逐步消失，体，血流中细菌逐步消失
14、，体温也逐渐消退。细菌在细胞内繁殖至一定程度时，再次进入血流又出温也逐渐消退。细菌在细胞内繁殖至一定程度时，再次进入血流又出现菌血症，体温再次上升，反复呈波浪热型。现菌血症，体温再次上升，反复呈波浪热型。二、致病性和免疫性二、致病性和免疫性第18页，讲稿共82张，创作于星期日19 人感染布氏杆菌表现乏力，全身软弱，食欲不振，失眠，咳嗽，有白色人感染布氏杆菌表现乏力，全身软弱，食欲不振，失眠，咳嗽，有白色痰，可听到肺部干鸣，多呈波浪热，也有稽留热、不规则热或不发热。痰，可听到肺部干鸣，多呈波浪热，也有稽留热、不规则热或不发热。盗汗或大汗，一个或多个关节发生无红肿热的疼痛，肌肉酸痛，盗汗或大汗，一
15、个或多个关节发生无红肿热的疼痛，肌肉酸痛，由于关节和肌肉疼痛难忍，即使不发烧也不能劳动，成为能吃不能活由于关节和肌肉疼痛难忍，即使不发烧也不能劳动，成为能吃不能活懒汉，故该病又被称作懒汉，故该病又被称作懒汉病懒汉病。病灶发生在生殖器官，影响生育，严重者可引起死亡。病灶发生在生殖器官，影响生育，严重者可引起死亡。三三、主要症状主要症状第19页，讲稿共82张，创作于星期日20本菌本菌传传染性大，要注意防止染性大，要注意防止实验实验室室污污染。染。（一）分离培养（一）分离培养急性期急性期采集血液，采集血液，慢性期慢性期采取骨髓，接种于采取骨髓，接种于双相肝浸液培养基双相肝浸液培养基（一半斜（一半斜面
16、，一半液体）置面，一半液体）置3710%CO2环环境中培养，每隔境中培养，每隔2天天检查检查一次，一次，如无如无细细菌生菌生长则摇荡长则摇荡培养基，使液体浸培养基，使液体浸过过斜面上，有斜面上，有细细菌生菌生长长，可依可依鉴鉴定定项项目确定是否目确定是否为为布氏杆菌。布氏杆菌。经经一月培养无一月培养无细细菌生菌生长长，可，可报报告阴性。告阴性。四、微生物学检验四、微生物学检验第20页，讲稿共82张，创作于星期日21（二）血清学二）血清学检查检查通常作凝集通常作凝集试验试验，判定，判定凝集效价凝集效价1：50可疑，可疑，1：100以上以上为为阳阳性。效价增高性。效价增高4倍以上倍以上时时，更有，
17、更有诊诊断价断价值值。（三）（三）酶酶联联免疫吸附免疫吸附检测检测第21页，讲稿共82张，创作于星期日22（四）（四）PCR检测检测此法敏感、特异、快速，此法敏感、特异、快速，实时荧实时荧光定量光定量PCR已用于布氏杆已用于布氏杆菌特异性基因的菌特异性基因的检测检测，即在，即在PCR反反应应体系中加体系中加荧荧光基光基团团，利用利用荧荧光信号光信号积积累，累，实时监测实时监测整个整个过过程。通程。通过标过标准曲准曲线线可可进进行定量。行定量。第22页，讲稿共82张，创作于星期日23第一节第一节 结核分枝杆菌（三）结核分枝杆菌（三）简介简介第23页，讲稿共82张，创作于星期日24（1 1）形态与
18、染色）形态与染色一、生物学性状一、生物学性状第24页，讲稿共82张，创作于星期日25（2 2）培养特性）培养特性第25页，讲稿共82张，创作于星期日26第26页，讲稿共82张，创作于星期日27（3 3）生化反应）生化反应第27页，讲稿共82张，创作于星期日28（4 4）抵抗力）抵抗力第28页，讲稿共82张，创作于星期日29（5 5）变异性）变异性第29页，讲稿共82张，创作于星期日30二、致病性二、致病性第30页，讲稿共82张，创作于星期日31（一）致病物质（一）致病物质第31页，讲稿共82张，创作于星期日32 1.1.荚膜荚膜第32页，讲稿共82张，创作于星期日33梭状因子蜡质D硫酸脑苷脂磷
19、脂 2.2.脂质脂质第33页，讲稿共82张，创作于星期日34第34页，讲稿共82张，创作于星期日35 3.3.蛋白质蛋白质第35页，讲稿共82张，创作于星期日36 4.4.多糖质多糖质第36页，讲稿共82张，创作于星期日37 5.5.核酸核酸第37页，讲稿共82张，创作于星期日38（二）所致疾病（二）所致疾病第38页，讲稿共82张，创作于星期日39n三、检测方法三、检测方法n检测方法：免疫学和细菌学检测n根据感染部位选择样品制作标本根据感染部位选择样品制作标本n分离培养分离培养n动物试验动物试验n快速诊断快速诊断第39页，讲稿共82张，创作于星期日40n是是人类霍乱人类霍乱的病原体。的病原体。
20、引起肠道传染病。引起肠道传染病。n霍乱是一种古老且流行广泛的霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病。烈性传染病。n曾在世界上曾在世界上引起多次大流行引起多次大流行，主要表现为，主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。n属于属于国际检疫甲类传染病国际检疫甲类传染病。第一节第一节霍乱弧菌（霍乱弧菌（V.cholerae）（四）（四）第40页，讲稿共82张，创作于星期日41n两个生物型两个生物型：古典生物型古典生物型（霍乱的病原体）和埃尔托生物型（霍乱的病原体）和埃尔托生物型（副霍乱的病原体）（副霍乱的病原体）第41页，讲稿共82张，创作于星期日42流行情况流
21、行情况第42页，讲稿共82张，创作于星期日43一、生物学性状一、生物学性状形态与染色形态与染色1.呈呈弧形或逗点状弧形或逗点状；排；排列成鱼群状列成鱼群状2.革兰阴性；无芽孢，无革兰阴性；无芽孢，无荚膜荚膜3.有单鞭毛，运动活泼，有单鞭毛，运动活泼，呈穿梭样或流星样呈穿梭样或流星样4.有菌毛有菌毛第43页，讲稿共82张，创作于星期日44培养特性培养特性1.营养要求不高；营养要求不高；2.兼性厌氧菌；兼性厌氧菌；3.生长繁殖温度范围广（生长繁殖温度范围广（18-37）；）；4.嗜碱嗜碱-碱性蛋白胨碱性蛋白胨(pH8.8-9.0):初次分离培养初次分离培养TCBS平板：黄色菌落平板：黄色菌落5.可
22、在无盐环境中生长可在无盐环境中生长 第44页，讲稿共82张，创作于星期日45 抵抗力抵抗力1.对热、干燥、日光，化学消毒剂和酸均很敏感对热、干燥、日光，化学消毒剂和酸均很敏感2.耐低温，耐碱。耐低温，耐碱。四怕四怕：怕醋、怕煮、怕晒、怕药。：怕醋、怕煮、怕晒、怕药。怕热不怕冷怕热不怕冷 怕干不怕湿怕干不怕湿 怕酸不怕碱怕酸不怕碱怕咸不怕淡怕咸不怕淡第45页，讲稿共82张，创作于星期日46毒毒素素霍乱肠毒素霍乱肠毒素(CT)：前噬菌体基因编码前噬菌体基因编码小带联结毒素小带联结毒素Zot增加肠黏膜通透性增加肠黏膜通透性副霍乱肠毒素副霍乱肠毒素Ace肠段积液肠段积液侵袭力侵袭力鞭鞭毛毛菌毛菌毛致病
23、物质致病物质第46页，讲稿共82张，创作于星期日47CTCT的结构的结构B亚单位：亚单位：与小肠粘膜上皮细胞与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合；神经节苷脂受体结合；由由1个个A亚单位和亚单位和5个个B亚单位构成亚单位构成的多聚体，不耐热。的多聚体，不耐热。（前噬菌体基因编码）（前噬菌体基因编码）1A+5B第47页，讲稿共82张，创作于星期日48 霍乱典型临床特征霍乱典型临床特征患者出现上吐下泻，泻出物呈患者出现上吐下泻，泻出物呈“米泔米泔水样水样”。并发症有血容量减少，并发症有血容量减少，循环衰竭及肾循环衰竭及肾功能衰竭，导致尿闭、电解质、酸碱功能衰竭，导致尿闭、电解质、酸碱平衡失调导
24、致肌肉痉挛。平衡失调导致肌肉痉挛。第48页，讲稿共82张，创作于星期日49免疫性感染后可获感染后可获牢固免疫力牢固免疫力；再感染少见；再感染少见局部黏膜免疫；抗菌抗体（局部黏膜免疫；抗菌抗体（O）；抗毒素抗体（）；抗毒素抗体（B）O1群与群与O139群不存在交叉免疫保护作用群不存在交叉免疫保护作用。第49页，讲稿共82张，创作于星期日50微生物学检查微生物学检查a.采集采集样样品品b.镜检镜检c.分离培养并生化反分离培养并生化反应应和凝集反和凝集反应应 PCRPCR检查检查 Southern blotSouthern blot检测检测 检验方法检验方法第50页，讲稿共82张，创作于星期日51第
25、二节第二节食物传播的病毒及其检验食物传播的病毒及其检验1.1.朊病毒朊病毒2.2.禽流感病毒禽流感病毒3.3.甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒第51页，讲稿共82张，创作于星期日52一、朊病毒及其检验一、朊病毒及其检验n朊病毒朊病毒(prion)-传染性蛋白粒子传染性蛋白粒子/朊粒朊粒/朊毒体，是一种不同于细菌、朊毒体，是一种不同于细菌、病毒或类病毒的在分类上病毒或类病毒的在分类上尚未尚未定论的病原因子定论的病原因子，其本质为由正常宿主，其本质为由正常宿主细胞基因编码的、构象异常的蛋白质，称为细胞基因编码的、构象异常的蛋白质，称为朊蛋白朊蛋白(prionprotein,PrP)，目前尚未检出任何核酸成
26、分，是人和动物的传染性目前尚未检出任何核酸成分，是人和动物的传染性海绵状脑病海绵状脑病（TSEs)的病原体的病原体。第52页，讲稿共82张，创作于星期日53n （一）形（一）形态态与与结结构构nprion是一种不含核酸和脂是一种不含核酸和脂类类的疏水性糖蛋白，分子量的疏水性糖蛋白，分子量为为2730103，因此又称，因此又称为为PrP2730。大小。大小30-50nm，电镜电镜下看不下看不到病毒粒子，到病毒粒子，负负染后看到聚集而成的棒状体，大小染后看到聚集而成的棒状体，大小10-250nm100-200nm。n其能在宿主其能在宿主细细胞内复制，无免疫性，不胞内复制，无免疫性，不诱发诱发抗体。
27、抗体。一、生物学特性一、生物学特性第53页，讲稿共82张，创作于星期日54n1.细细胞胞朊朊病毒蛋白病毒蛋白(cellularPrP,PrPC)：具有：具有42%的的-螺旋，螺旋，3%的的折叠。存在于正常折叠。存在于正常组织组织及感染及感染动动物的物的组织组织中，是正常基因的中，是正常基因的产产物，通物，通常常情况下是无害的情况下是无害的，对对蛋白蛋白酶酶K敏感。敏感。n2.骚扰骚扰型型朊朊病毒蛋白病毒蛋白(scrapieprionprotein,PrPsc)：-螺旋占螺旋占30%，折叠高达折叠高达43%，仅仅存在于感染存在于感染动动物的物的组织组织中，中，与致病和与致病和传传染有关，染有关，
28、对对蛋白蛋白酶酶K有抗性有抗性。两种不同的分子构型两种不同的分子构型第54页，讲稿共82张，创作于星期日55n朊病毒颗粒对一些理化因子朊病毒颗粒对一些理化因子的抵抗力之强，大大高于已知各的抵抗力之强，大大高于已知各类微生物和寄生虫。类微生物和寄生虫。n1.传染源：感染朊毒体的人和动物。传染源：感染朊毒体的人和动物。n2.传染途径：消化道传播。传染途径：消化道传播。n医源性传播：脑外科手术、器官移植等遗传医源性传播：脑外科手术、器官移植等遗传。（二（二）抵抗力抵抗力（三）致病性（三）致病性第55页，讲稿共82张，创作于星期日56n 疯牛病疯牛病：牛海绵状脑病。病牛临床表现为步态不稳、共济失调、搔
29、：牛海绵状脑病。病牛临床表现为步态不稳、共济失调、搔痒、烦躁不安等神经症状。痒、烦躁不安等神经症状。n绵羊痒病：绵羊痒病：它是羊的一种它是羊的一种慢性致死性疾病慢性致死性疾病，病羊具有中枢神经系，病羊具有中枢神经系统变性、剧痒、共济失调、高死亡率等特点。统变性、剧痒、共济失调、高死亡率等特点。n克克-雅氏病：雅氏病：人的一种人的一种中枢神经系统变性疾病中枢神经系统变性疾病。其临床症状和病理。其临床症状和病理组织学变化与疯牛病、绵羊痒病十分相似。组织学变化与疯牛病、绵羊痒病十分相似。3.3.导致疾病导致疾病第56页，讲稿共82张，创作于星期日57n共同特征：潜伏期长（可达数年至数十年），一旦发病
30、共同特征：潜伏期长（可达数年至数十年），一旦发病即呈慢性进行性发展，最终死亡。即呈慢性进行性发展，最终死亡。n 第57页，讲稿共82张，创作于星期日58nPrPC转变为转变为PrPSC是是疾病发生的基本条件疾病发生的基本条件，PrPSC在中枢神经系在中枢神经系统细胞内聚集，导致统细胞内聚集，导致神经元的破坏神经元的破坏。脑组织病理学特点：脑组织病理学特点：中枢神经细胞空泡化、弥漫性神经细胞缺失、中枢神经细胞空泡化、弥漫性神经细胞缺失、胶质细胞增生、淀粉样斑块形成、脑组织海绵状改变；胶质细胞增生、淀粉样斑块形成、脑组织海绵状改变；PrPSc聚集。聚集。4.发病机理发病机理第58页，讲稿共82张，
31、创作于星期日59n1.1.免疫组化技术免疫组化技术 n 取取可疑患者的脑组织或非神经组织切片可疑患者的脑组织或非神经组织切片，经脱水性或水解性，经脱水性或水解性高压消毒、甲酸和硫氰酸胍处理，使其高压消毒、甲酸和硫氰酸胍处理，使其感染性消失并破坏感染性消失并破坏PrPCPrPC后后，再用单克隆抗体检测对上述处理有再用单克隆抗体检测对上述处理有抗性的抗性的PrPSCPrPSC。朊病毒的检验朊病毒的检验第59页，讲稿共82张，创作于星期日60n 组织印迹法检测组织印迹法检测PrPSCPrPSC是一种简单而敏感的诊断方法。是一种简单而敏感的诊断方法。n方法：方法：首先将待测的样品印迹在首先将待测的样品
32、印迹在固相载体固相载体硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜上，用上，用病毒的病毒的家兔特异性抗体（家兔特异性抗体（IgGIgG）与吸附在固相载体上的病毒进行特与吸附在固相载体上的病毒进行特异性反应，再与酶标记的羊抗兔第二抗体进行反应，最后用酶的反异性反应，再与酶标记的羊抗兔第二抗体进行反应，最后用酶的反应底物进行显色反应，根据颜色的变化，确定病毒的感染程度。应底物进行显色反应，根据颜色的变化，确定病毒的感染程度。2.2.免疫印迹技术免疫印迹技术第60页，讲稿共82张，创作于星期日61n 从病人从病人外周血白细胞中提取外周血白细胞中提取DNA，对，对20号染色体号染色体prion基基因进行分子遗传学分析因进
33、行分子遗传学分析。3.3.基因分析基因分析第61页，讲稿共82张，创作于星期日62 第一节第一节 禽流感病毒禽流感病毒（二）（二）n禽流感是禽流行性感冒（禽流感是禽流行性感冒（AvianInfluenza，AI）的简称，这是）的简称，这是一种由一种由甲型流感病毒甲型流感病毒的一种亚型引起的传染性疾病综合征，被国际兽疫的一种亚型引起的传染性疾病综合征，被国际兽疫局定为局定为类传染病类传染病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。第62页，讲稿共82张，创作于星期日631.形态学特点形态学特点n禽流感病毒是禽流感病毒是正粘病毒，正粘病毒，流感病毒属的一个成流感病毒属的一个成员。员。n禽
34、流感病毒禽流感病毒具有具有A型抗原型抗原，属于，属于A型流感病毒，型流感病毒，列为禽流感病毒类。列为禽流感病毒类。一、生物学特性一、生物学特性第63页，讲稿共82张，创作于星期日64n流感病毒流感病毒分为三个不同的抗原型分为三个不同的抗原型，即，即A A、B B、C C三型。其中三型。其中B B、C C两型仅两型仅能对人致病能对人致病，A A型可对人、猪、马和禽致病。型可对人、猪、马和禽致病。n依据病毒表面的依据病毒表面的两种糖蛋白血凝素两种糖蛋白血凝素HA和神和神经经氨酸氨酸酶酶NA可将可将A型流感病毒分成若干型流感病毒分成若干亚亚型。目前已有型。目前已有15种种HA（H1-H15)和和9种
35、种NA(N1-N9)。2.禽流感病毒的分型禽流感病毒的分型第64页，讲稿共82张，创作于星期日65n对热对热的抵抗力的抵抗力较较低，低，6530分分钟钟，1002分分钟钟即即灭灭活，普通活，普通消毒消毒剂剂能很快将它能很快将它杀杀死。死。n低温低温冻冻干或甘油保存可使病毒存活多年。干或甘油保存可使病毒存活多年。3.抵抗力抵抗力第65页，讲稿共82张，创作于星期日66n禽流感在家禽中以禽流感在家禽中以鸡和火鸡鸡和火鸡及某些野禽的易感性最高，并呈及某些野禽的易感性最高，并呈急性致死性传染病。急性致死性传染病。n鸭、鹅及其它水禽类的易感性较差，多为隐性感染或带鸭、鹅及其它水禽类的易感性较差，多为隐性
36、感染或带毒，有时也能大批死亡。鸽子可带毒，但很少自然发病。毒，有时也能大批死亡。鸽子可带毒，但很少自然发病。4.4.流行病学流行病学第66页，讲稿共82张，创作于星期日67n禽流感的症状极为复杂，有禽流感的症状极为复杂，有最急性、急性、亚急性及隐性感染等。最急性、急性、亚急性及隐性感染等。n潜伏期一般较短，通常为潜伏期一般较短，通常为4-5天，体温急剧上升至天，体温急剧上升至43.3-44.4，精，精神沉郁、拒食、病鸡很快陷于昏睡状态，有些颈部出现向后扭转的神沉郁、拒食、病鸡很快陷于昏睡状态，有些颈部出现向后扭转的神经症状。病鸡多呈急性死亡，有的也可能神经症状。病鸡多呈急性死亡，有的也可能出现
37、呼吸道症状，咳出现呼吸道症状，咳嗽、打喷嚏，气管出现咯音，流泪嗽、打喷嚏，气管出现咯音，流泪等症状，羽毛蓬松，产蛋率下降，等症状，羽毛蓬松，产蛋率下降，死亡率高低不等。死亡率高低不等。5.5.临床症状和病理变化临床症状和病理变化第67页，讲稿共82张，创作于星期日68n1.病原的分离病原的分离n病原的分离和鉴定可以从病原的分离和鉴定可以从活体或尸体分离病毒。活体或尸体分离病毒。n用棉拭子法常可从活体的气管和泄殖腔中分离到病毒，可用不同大小的用棉拭子法常可从活体的气管和泄殖腔中分离到病毒，可用不同大小的棉拭子擦取气管或泄殖腔，然后将拭子棉拭子擦取气管或泄殖腔，然后将拭子放入灭菌的保存液放入灭菌的
38、保存液2550%甘油盐水、肉汤或甘油盐水、肉汤或1000u/ml青霉素和青霉素和10mg/mL链霉素的细胞维持液链霉素的细胞维持液中。中。n病料的采取时间病料的采取时间：一般在一般在感染初期或发病急性期采取感染初期或发病急性期采取。如转为后期。如转为后期则因机体已形成足够的抗体而不易分离到病毒则因机体已形成足够的抗体而不易分离到病毒.二、诊断二、诊断第68页，讲稿共82张，创作于星期日69n通常用通常用鸡胚鸡胚来进行。来进行。n接种接种9-10日龄鸡胚尿囊腔，继续孵育日龄鸡胚尿囊腔，继续孵育48-72h。n如材料中含有病毒时，则接种如材料中含有病毒时，则接种48h鸡胚死亡，但在多数情况下初代分
39、鸡胚死亡，但在多数情况下初代分离时鸡胚多不死，为此需将经离时鸡胚多不死，为此需将经72h未死的鸡胚置冰箱内冻死后，收集未死的鸡胚置冰箱内冻死后，收集尿囊液作第二代接种。如第二代接种的鸡胚仍不死亡，即可尿囊液作第二代接种。如第二代接种的鸡胚仍不死亡，即可判定分判定分离病毒为阴性离病毒为阴性。2.病毒分离病毒分离第69页，讲稿共82张，创作于星期日70三、介绍高致病性禽流感的其他知识三、介绍高致病性禽流感的其他知识n鉴定鉴定高致病性禽流感的标准高致病性禽流感的标准:按照国际标准，按照国际标准，能引起接种鸡死亡能引起接种鸡死亡75以上的分离株，是高致病性毒株。以上的分离株，是高致病性毒株。尽管接种鸡
40、是确定致病的尽管接种鸡是确定致病的“黄金标准黄金标准”，但它不能反应致死率小于，但它不能反应致死率小于75%的的H5或或H7亚型病毒的潜在致病力。因此亚型病毒的潜在致病力。因此0IE(国际兽疫局国际兽疫局根据科学家的建根据科学家的建议，推出新鉴定标准。议，推出新鉴定标准。第70页，讲稿共82张，创作于星期日71n1.任何任何分离到分离到A型流感病毒型流感病毒，用，用0.2mL1:10稀释的无菌尿囊稀释的无菌尿囊液静脉或肌肉注射液静脉或肌肉注射8只只48周龄易感鸡，周龄易感鸡，10天内的死亡率不天内的死亡率不低于低于75%。第71页，讲稿共82张，创作于星期日722.对对所所有低致病的有低致病的
41、H5、H7毒株毒株，血凝素切割位点的氨基酸序，血凝素切割位点的氨基酸序列与高致病性禽流感病毒一致。列与高致病性禽流感病毒一致。3.H5、H7以外的以外的A型流感病毒，可以致死型流感病毒，可以致死15只只鸡鸡，在缺乏，在缺乏胰蛋白胰蛋白酶酶的情况下的情况下,能在能在细细胞上生胞上生长长形成形成蚀蚀斑。斑。第72页，讲稿共82张，创作于星期日73禽流感的传播途径是什么？禽流感的传播途径是什么？n禽流感的传播禽流感的传播：有病禽和健康禽直接接触；病毒污染物间接接触。：有病禽和健康禽直接接触；病毒污染物间接接触。n禽流感病毒存在于病禽和感染禽的禽流感病毒存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和禽体消化道、
42、呼吸道和禽体脏器组织脏器组织中。健康禽通过呼吸道和消化道感染，引起发病。中。健康禽通过呼吸道和消化道感染，引起发病。第73页，讲稿共82张，创作于星期日74如何防范禽流感如何防范禽流感n禽流感被国际兽疫局定禽流感被国际兽疫局定为类传染病为类传染病，且变异后的病毒能威胁人类健康。，且变异后的病毒能威胁人类健康。n1.避免直接接触病禽及其排泄物、分泌物等能有效防止感染病毒。避免直接接触病禽及其排泄物、分泌物等能有效防止感染病毒。n2.饲养员、屠宰工人等经常与活禽密切接触的人，必须做好保护。饲养员、屠宰工人等经常与活禽密切接触的人，必须做好保护。n3.注重自身健康、保持良好的免疫力也是避免感染禽流感
43、病毒的有效注重自身健康、保持良好的免疫力也是避免感染禽流感病毒的有效措施。措施。n4.不要去疫区旅游。不要去疫区旅游。n5.食用烹熟的家禽肉、蛋不会传染禽流感。食用烹熟的家禽肉、蛋不会传染禽流感。第74页，讲稿共82张，创作于星期日75禽流感与其他流感有什么关系？禽流感与其他流感有什么关系？n除禽流感以外，常见的流感还有除禽流感以外，常见的流感还有人流感、马流感和猪流感人流感、马流感和猪流感等。等。禽流感与人流感和人类健康的关系非常密切。由于猪与人的种间禽流感与人流感和人类健康的关系非常密切。由于猪与人的种间差异较小，禽流感病毒可以在中间宿主差异较小，禽流感病毒可以在中间宿主(猪猪)体内与人流
44、感病毒体内与人流感病毒杂交，并产生能感染人的新的流感病毒。杂交，并产生能感染人的新的流感病毒。第75页，讲稿共82张，创作于星期日76禽流感病毒为何消灭不了？禽流感病毒为何消灭不了？n流感病毒为了生存而不断发生变异，以逃脱动物产生的特异性抵抗流感病毒为了生存而不断发生变异，以逃脱动物产生的特异性抵抗力。人们为了预防禽流感也研制出了各种疫苗。力。人们为了预防禽流感也研制出了各种疫苗。n但但机体在产生特异性抗体后机体在产生特异性抗体后，病毒为逃脱机体的扑杀而不，病毒为逃脱机体的扑杀而不断地发断地发生着变异生着变异，这样原有的抗体即失去作用，病毒就可使动物重新发病。，这样原有的抗体即失去作用，病毒就
45、可使动物重新发病。因此就目前的防疫技术和手段而言，禽流感病毒是消灭不了的。因此就目前的防疫技术和手段而言，禽流感病毒是消灭不了的。第76页，讲稿共82张，创作于星期日77n属于小属于小RNA病毒科，嗜肝病毒科，嗜肝RNA病毒病毒n601h不被灭活，只有一个血清型不被灭活，只有一个血清型n负染后电镜下可见病毒有实心和空心颗粒两种形态，负染后电镜下可见病毒有实心和空心颗粒两种形态，实心者实心者为完为完整病毒，具有传染性；整病毒，具有传染性；空心者空心者则无传染性，不产生甲肝抗体。则无传染性，不产生甲肝抗体。甲型肝炎病毒（三）甲型肝炎病毒（三）一、生物学特性一、生物学特性甲型肝炎甲型肝炎（hepat
46、itis Ahepatitis A，HAHA，简称甲肝），简称甲肝）是一种由甲型肝炎病毒（是一种由甲型肝炎病毒（HAVHAV）引起的急性肠道传染病。）引起的急性肠道传染病。第77页，讲稿共82张，创作于星期日78 该病主要经该病主要经粪粪-口口途径传播，易发生食物型和水型爆发行途径传播，易发生食物型和水型爆发行,常呈季节性和周期性流行常呈季节性和周期性流行。传染源传染源：水源、食物、海产品、食具：水源、食物、海产品、食具 经人口进入人体后，最终在经人口进入人体后，最终在肝细胞中增殖肝细胞中增殖 产生的抗体：产生的抗体：IgMIgM和和IgCIgC 二、致病性二、致病性 第78页，讲稿共82张，
47、创作于星期日79n甲肝病毒甲肝病毒较较一般一般肠肠道病毒抵抗力道病毒抵抗力强强n对对酸、碱、乙酸、碱、乙醚醚、氯氯仿仿等也有等也有较较强强的耐受性。的耐受性。HAV不能耐受不能耐受冷冷冻冻干燥，干燥，对对紫外紫外线线敏感，敏感，对对化学消毒化学消毒剂剂的抵抗力与一般的抵抗力与一般肠肠道病道病毒相似毒相似三、抵抗力三、抵抗力第79页，讲稿共82张，创作于星期日80四、检测方法四、检测方法1.ELISA1.ELISA方法方法（检测检测病人的病人的康康-HAVIgM)2.2.基因芯片法基因芯片法（从粪便或血（从粪便或血液中采样）液中采样）第80页，讲稿共82张，创作于星期日81作业作业n课后习题P234第81页，讲稿共82张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第82页，讲稿共82张，创作于星期日