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1、关于临床检测关于临床检测-谷丙转谷丙转氨酶活性的测定氨酶活性的测定第1页，讲稿共12张，创作于星期一n n1.1.掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理。掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理。n n2.2.熟悉血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的具体操熟悉血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的具体操作方法。作方法。n n3.3.了解血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的临床意了解血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的临床意义。义。【目的要求目的要求】第2页，讲稿共12张，创作于星期一临床意义临床意义谷丙转氨酶谷丙转氨酶(Glutamic pyruvic Transaminase，GPT)丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基
2、转移酶(Alanine Transaminase，ALT)ALT(GPT)广泛存在于机体各种组织中，但在肝细胞中广泛存在于机体各种组织中，但在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是含量最多，当肝脏有病变，特别是急性肝炎及肝细胞坏死急性肝炎及肝细胞坏死，血，血清中谷丙转氨酶活性显著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病清中谷丙转氨酶活性显著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此酶活性也可中度或轻度增高。时，此酶活性也可中度或轻度增高。第3页，讲稿共12张，创作于星期一如何测定酶的活性如何测定酶的活性?活性单位定义中必须规定哪些条件活性单位定义中必须规定哪些条件?第4页，讲稿共12张，创作于星期一 在紫
3、外分光光度计中，在紫外分光光度计中，1ml血清血清(反应溶液总量为反应溶液总量为3ml)在在340nm波长下，用内径为波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在的比色皿，在25，1分钟内分钟内生成的生成的丙酮酸丙酮酸，在乳酸氢酶催化下，使，在乳酸氢酶催化下，使NADH+H+变成变成NAD+，使光密度下降，使光密度下降0.001为为1个转氨酶活性单位。个转氨酶活性单位。卡门氏单位的定义为：卡门氏单位的定义为：丙氨酸丙氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸 谷氨酸谷氨酸+丙酮酸丙酮酸GPT乳酸氢酶乳酸氢酶 NAD+乳酸乳酸NADH+H+第5页，讲稿共12张，创作于星期一丙氨酸丙氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸 谷氨酸谷氨酸
4、+丙酮酸丙酮酸GPT乳酸氢酶乳酸氢酶 NAD+乳酸乳酸NADH+H+改良赖氏法改良赖氏法显色反应显色反应分光光度法分光光度法 赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用卡赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用卡赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用卡赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用卡门氏单位作表示的。门氏单位作表示的。门氏单位作表示的。门氏单位作表示的。第6页，讲稿共12张，创作于星期一n n血清中的谷血清中的谷-丙转氨酶（丙转氨酶（ALTALT），在），在3737、pH7.4pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的条件下，可催化基质（底物）液中的
5、丙氨酸与的丙氨酸与-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：【实验原理实验原理】第7页，讲稿共12张，创作于星期一第8页，讲稿共12张，创作于星期一0 01 12 23 34 45 5丙丙丙丙酮酮酮酮酸酸酸酸标标标标准液准液准液准液(ml)(ml)0.000.000.050.050.100.100.150.150.200.200.250.25ALTALT底物底物底物底物试剂试剂试剂试剂(ml)(ml)0.500.500.450.450.400.400.350.350.300.300.250.250.1M0.1M磷酸磷酸磷酸磷酸盐缓盐缓盐缓盐缓冲液冲液冲液冲液pH7.4(ml)p
6、H7.4(ml)0.100.100.100.100.100.100.100.100.100.100.100.10相当于相当于相当于相当于GPTGPT活性活性活性活性(卡卡卡卡门门门门氏氏氏氏单单单单位位位位)0.000.00282857579797150150200200 3737水浴预温水浴预温5 5分钟，各管加分钟，各管加2,4-2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼0.5ml0.5ml混匀，再在混匀，再在3737水浴中放置水浴中放置2020分钟后，各管加分钟后，各管加0.4mol/L 0.4mol/L NaOHNaOH溶液溶液5ml5ml，混匀放，混匀放置置1010分钟后，以蒸馏水调零点，用分钟后
7、，以蒸馏水调零点，用520nm520nm波长比色，读取各管光密。波长比色，读取各管光密。.各管的读数均减去对照管各管的读数均减去对照管(O(O管管)的光密度，然后以光密度值为的光密度，然后以光密度值为纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。实验操作实验操作1.1.标准曲线的制作标准曲线的制作:第9页，讲稿共12张，创作于星期一T T T TC C C C血血血血 清清清清(ml)(ml)(ml)(ml)0.10.10.10.1ALTALTALTALT底物液底物液底物液底物液(ml)(ml)(ml)(ml)0.50.50.5
8、0.50.50.50.50.5混匀后，置混匀后，置混匀后，置混匀后，置37373737水浴中保温水浴中保温水浴中保温水浴中保温30303030分钟分钟分钟分钟2 2 2 2，4-4-4-4-二硝基苯肼液二硝基苯肼液二硝基苯肼液二硝基苯肼液(ml)(ml)(ml)(ml)0.50.50.50.50.50.50.50.5混匀后，置混匀后，置混匀后，置混匀后，置37373737水浴中保温水浴中保温水浴中保温水浴中保温30303030分钟分钟分钟分钟血血血血 清清清清(ml)(ml)(ml)(ml)0.10.10.10.10.4mol/L NaOH(ml)0.4mol/L NaOH(ml)0.4mol
9、/L NaOH(ml)0.4mol/L NaOH(ml)5.05.05.05.05.05.05.05.02.2.酶活性测定：酶活性测定：测定前将底物缓冲液在测定前将底物缓冲液在3737水浴中预温水浴中预温5 5分钟，分钟，再按下表操作。再按下表操作。混匀，在室温中放置混匀，在室温中放置1010分钟，以蒸馏水调零点，用分钟，以蒸馏水调零点，用520nm520nm波长比波长比色，读取光密度。用色，读取光密度。用T-CT-C管的光密度查标准曲线，即得到待测血清中所管的光密度查标准曲线，即得到待测血清中所含含ALTALT的酶活性。的酶活性。参考值：参考值：525卡门氏单位卡门氏单位第10页，讲稿共12
10、张，创作于星期一n n【临床意义临床意义】n n肝细胞中含ALTALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞受损最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞受损伤时，伤时，ALTALT即大量释放入血液，致使血清中ALT活性活性增高。测定增高。测定ALTALT是检查肝功能的重要指标之一。是检查肝功能的重要指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。n n【思考题思考题思考题思考题】n n 1.1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？n n 2.2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要避免溶血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要避免溶血？血？第11页，讲稿共12张，创作于星期一2023/4/7感感谢谢大大家家观观看看第12页，讲稿共12张，创作于星期一