肿瘤继承性免疫治疗DecJN.ppt

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1、肿瘤继承性免疫治疗DecJN现在学习的是第1页，共91页全球癌症趋势全球癌症趋势今后20年全球新患人数每年1000万1500万死亡人数每年600万1000万 18th International Congress on Anti-Treatment,Paris,2007现在学习的是第2页，共91页中国癌症趋势中国癌症趋势 2000年发病约180-200万死亡140-150万064岁人口中，1/4死于癌症 中国癌症预防与控制规划纲要中国癌症预防与控制规划纲要（2004-20102004-2010）现在学习的是第3页，共91页癌症的三大常规治疗癌症的三大常规治疗手术手术-破冰船破冰船历史悠久手术本

2、身的两面性：消除（降低）肿瘤负荷促进转移的倾向难以清除肿瘤微小转移灶很多患者就诊时已失去手术最佳时机现在学习的是第4页，共91页癌症的三大常规治疗癌症的三大常规治疗化疗化疗-轰炸机轰炸机肿瘤内科治疗的基石对肿瘤细胞的杀伤缺乏选择性损伤正常组织Goldie-Coldman假说及“一级动力学”理论：化疗对数杀灭细胞，不可能彻底清除肿瘤细胞现在学习的是第5页，共91页癌症的三大常规治疗癌症的三大常规治疗1898 年发现镭镭用于治疗肿瘤放疗有效破坏或消灭癌细胞，甚至可以治愈部分肿瘤放疗损伤机体正常细胞，降低机体免疫力 3 3放疗放疗-太阳能太阳能现在学习的是第6页，共91页肿瘤治疗的肿瘤治疗的 现状现

3、状靶向药物靶向药物靶向药物靶向药物肿瘤生物治疗肿瘤生物治疗是进一步提高疗效的是进一步提高疗效的很有前景的方法很有前景的方法现在学习的是第7页，共91页目前癌症疗效的总体评估 “近20年来，我国癌症死亡率上升了29%，癌症治愈率(5年生存率)仍徘徊 在 20%-30%左右。其中肺癌仅10%，肝癌3%左右”。-卫生部2006年中国慢性病报告 “近30年来，晚期转移肿瘤5年生存率基本上没有改变。这主要是由我们目前肿瘤治疗不当和过度治疗造成的。”-程书钧 院士现在学习的是第8页，共91页癌症治疗的误区 注重肿瘤本身，想尽办法杀死肿瘤细胞体内正常细胞被错杀为什么要长肿瘤？现在学习的是第9页，共91页癌症

4、认识的误区只有确切了解癌症，才可能找到治愈的方法 重大突破通常来源于认识上的巨大转变细菌与感染的联系得到证实后，才意识到要治愈此类疾病便必须除去细菌。结果是促使抗生素的诞生，从而控制一系列的传染病现在学习的是第10页，共91页癌症治疗的困境与未来术后1 年复发率达60%死于肿瘤复发和转移的人超过80%彻底消灭癌细胞及体内不再产生癌细胞的“根治”任务很可能落在生物治疗身上现在学习的是第11页，共91页癌症治疗的生物疗法肿瘤生物免疫疗法成为最令人瞩目、最鼓舞人心的焦点，将成为21世纪人类攻克癌症具有战略意义的一个重要方面.37-39届美国临床肿瘤学会（ASCO）第7届中国抗癌协会临床肿瘤学协作专业

5、委员会（CSCO）现在学习的是第12页，共91页Strength(优势优势)n细胞免疫技术发展给成功的临床治疗带来可能性。n科学家和临床专家全力发展此技术n卫生部医政处也大力支持。己批准此临床技术,并核准收费标准Opportunity(机会机会)n目前各研究所及医科大学各自为政地，并且各机构只有少量临床病例报道，因此给产业化，系统化发展带来可能。肿瘤生物治疗现状肿瘤生物治疗现状Weakness(劣势劣势)n部分各科临床医师对此技术认知程度偏低n广大病人对此知识一无所知Threat(威胁威胁)n各单位技术力量大小不一，并参差不齐，易造成混乱，阻滞此技术的临床健康发展。现在学习的是第13页，共91

6、页政府全力支持政府全力支持-卫生部文件卫生部文件国家发展改革委、卫生部、国家中医药国家发展改革委、卫生部、国家中医药管理局关于印发管理局关于印发全国医疗服务价格项全国医疗服务价格项目规范目规范新增和修订项目（新增和修订项目（2007年）年）的通知的通知n发改价格发改价格20072193号号1.新增项目新增项目 2.修订项目修订项目 n第第56条条 310800024 细胞因子活化杀伤（细胞因子活化杀伤（CIK）细）细胞输注治疗胞输注治疗 含药物加无血清培养基、体外细胞培养；含药物加无血清培养基、体外细胞培养；包括树突状细胞治疗包括树突状细胞治疗(DC)次次 LAK细胞治疗酌情加收细胞治疗酌情加

7、收现在学习的是第14页，共91页政府全力支持政府全力支持-卫生部文件卫生部文件 医疗技术临床应用管理办法 卫生部明确国家建立医疗技术临床应用准入和管理制度，对医疗技术实行分类、分级管理。医疗技术分三类管理n卫医政发(2009)18号现在学习的是第15页，共91页癌症治疗的生物疗法肿瘤免疫的概念起源于本世纪初1909年Ehrlich首先提出，免疫系统不仅负责防御微生物侵犯，而且清除机体内改变了的宿主成分 肿瘤生物免疫疗法已成为肿瘤治疗基础和临床研究的重要领域现在学习的是第16页，共91页癌症生物治疗的分类-操作模式非细胞治疗w抗体、多肽/蛋白质疫苗、基因疫苗、体内基因治疗等w可以规模化生产w有严

8、格、均一的产品质量标准w主要由制药公司开发细胞治疗w采集患者自体细胞进行制备，再回输给患者w无法规模化生产w更适于在医疗机构开展，完成从采集、制备到回输的全过程现在学习的是第17页，共91页正常机体免疫系统识别和清除突变细胞：免疫监视免疫逃逸的机理还不很清楚，但主要的机制与CD8CD8+T T细胞不能有效地清除肿瘤细胞有关现在学习的是第18页，共91页肿瘤免疫治疗的三种新途径肿瘤免疫治疗的三种新途径-针对肿瘤免疫逃逸针对肿瘤免疫逃逸增强免疫应答增强免疫应答间接作用间接作用如抑制血管生成如抑制血管生成直接抑制肿瘤生长直接抑制肿瘤生长毒素毒素放射性核素放射性核素药物药物细胞介导免疫治疗细胞介导免疫

9、治疗过继性免疫细胞治疗过继性免疫细胞治疗供体淋巴细胞输注供体淋巴细胞输注肿瘤疫苗肿瘤疫苗现在学习的是第19页，共91页限制肿瘤免疫应答的因素限制肿瘤免疫应答的因素现在学习的是第20页，共91页免疫均衡与免疫逃逸免疫均衡与免疫逃逸淋巴细胞因素淋巴细胞因素肿瘤细胞因素肿瘤细胞因素现在学习的是第21页，共91页肿瘤过继性免疫治疗肿瘤过继性免疫治疗体外分离细胞体外分离细胞APC（巨噬细胞、树突状细胞）（巨噬细胞、树突状细胞）T淋巴细胞淋巴细胞自然杀伤（自然杀伤（NK）细胞）细胞离体培养、扩增、活化离体培养、扩增、活化细胞因子刺激细胞因子刺激抗原冲击抗原冲击基因修饰基因修饰自体或自体或(同种异体同种异体

10、)回输回输诱发机体特异性抗肿瘤免疫诱发机体特异性抗肿瘤免疫现在学习的是第22页，共91页淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)树突状细胞（树突状细胞（DC）共培养免疫细胞共培养免疫细胞(DC-CIK)自然杀伤细胞型的淋巴细胞自然杀伤细胞型的淋巴细胞(NKT)肿瘤过继性免疫治疗肿瘤过继性免疫治疗现在学习的是第23页，共91页淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)树状突细胞（树

11、状突细胞（DC）双克隆免疫细胞双克隆免疫细胞(DC-CIK)肿瘤过继性免疫治疗肿瘤过继性免疫治疗现在学习的是第24页，共91页淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞lymphokine-activated killer cells,LAK1980年年，Rosenberg实实验验室室首首报报荷荷瘤瘤小小鼠鼠的的脾脾脏脏淋淋巴巴细细胞胞和和肿肿瘤瘤患患者者外外周周血血淋淋巴巴细细胞胞在在含含有有IL-2的的条条件件下下，短短期期培培养养后后可可诱诱导导出出一一种种非非特特异异性性的的杀杀伤伤细细胞胞，能能杀杀伤伤新鲜分离的实体瘤细胞和体外培养的多种肿瘤细胞新鲜分离的实体瘤细胞和体外培养的多种

12、肿瘤细胞目前尚未发现目前尚未发现LAK细胞特有的表面标志细胞特有的表面标志LAK细胞的前体细胞是细胞的前体细胞是NK细胞和细胞和T细胞。细胞。现在学习的是第25页，共91页LAKLAK的临床应用的临床应用o1984年年Rosenberg研研 究究 组组 首首 次次 应应 用用IL-2与与LAK协协同同治治疗疗25例例肾肾细细胞胞癌癌、黑黑素素瘤瘤、肺肺癌癌、肝癌肝癌/结肠癌等患者结肠癌等患者oLAK细胞细胞0.618.41010oIL-2 2.81053.3106U/kgo11例肿瘤缩小超过例肿瘤缩小超过50，1例黑色素瘤完全消退例黑色素瘤完全消退现在学习的是第26页，共91页LAKLAK的临

13、床应用的临床应用o1988年用年用IL-2与与LAK细胞协同治疗细胞协同治疗222例例o16例转移灶完全消退例转移灶完全消退o26例肿瘤消退例肿瘤消退50以上以上o对对转转移移性性肾肾细细胞胞癌癌、黑黑色色素素瘤瘤、肝肝癌癌、结结肠肠癌和非霍奇金淋巴瘤疗效较显著癌和非霍奇金淋巴瘤疗效较显著现在学习的是第27页，共91页LAKLAK的临床应用的临床应用o乳乳腺腺癌癌、膀膀胱胱癌癌局局部部联联用用IL-2也也获获得得明明显显疗疗效效o由由于于IL-2用用量量大大，一一些些病病例例出出现现较较大大毒毒副副反反应应现在学习的是第28页，共91页异体异体LAKLAK：采采用用抗抗原原性性较较弱弱的的5个

14、个月月以以内内胎胎儿儿的的脾脾细细胞胞、肝肝细细胞和胸腺细胞胞和胸腺细胞体外诱导培养后具有很强的体外诱导培养后具有很强的LAK细胞活性细胞活性出现早而持久，不易引起移植排斥反应出现早而持久，不易引起移植排斥反应骨骨髓髓细细胞胞用用rhIL-2培培养养后后有有很很强强的的LAK活活性性，比比外外周周血来源者强而持久；血来源者强而持久；胎胎儿儿脐脐血血细细胞胞经经IL-2诱诱导导后后，LAK活活性性也也明明显显强强于于成人。成人。现在学习的是第29页，共91页淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞

15、(CIK)树状突细胞（树状突细胞（DC）双克隆免疫细胞双克隆免疫细胞(DC-CIK)肿瘤继承性免疫治疗肿瘤继承性免疫治疗现在学习的是第30页，共91页肿瘤浸润淋巴细胞肿瘤浸润淋巴细胞tumor infiltrating lymphocyte,TILtumor infiltrating lymphocyte,TIL 1986年年Rosenberg研究组首先报道研究组首先报道从从肿肿瘤瘤局局部部分分离离出出TIL，加加入入高高剂剂量量IL-2体体外外培培养养，残存的肿瘤细胞残存的肿瘤细胞713天全部死亡。天全部死亡。从从手手术术切切下下的的肿肿瘤瘤组组织织、肿肿瘤瘤引引流流淋淋巴巴结结、癌癌性性胸

16、胸腹腹水水中中获获得得淋淋巴巴细细胞胞，加加IL-2培培养养后后，其其生生长长、扩扩增能力强于增能力强于LAK细胞细胞14例例转转移移性性肺肺癌癌等等晚晚期期肿肿瘤瘤患患者者,其其中中4例例肿肿瘤瘤缩缩小小50以上，副作用明显低于以上，副作用明显低于IL-2/LAK疗法。疗法。现在学习的是第31页，共91页肿瘤浸润淋巴细胞（肿瘤浸润淋巴细胞（TILTIL）治疗转移性黑色素瘤）治疗转移性黑色素瘤2002.Science现在学习的是第32页，共91页2007年，法国热那亚大学细胞与基因治疗中心对用TIL+IL-2治疗过的期黑色素瘤进行了长期随访，发现经治疗过的只有一个淋巴结转移的患者其复发率明显低

17、于对照组，总生存期也明显长于只用IL-2治疗的患者。肿瘤侵润性淋巴细胞肿瘤侵润性淋巴细胞现在学习的是第33页，共91页 20072007年南京大学医学院附属南京市鼓楼医院肿瘤中心刘年南京大学医学院附属南京市鼓楼医院肿瘤中心刘宝瑞等用快速制备自体肿瘤浸润淋巴细胞方法联合白细胞介素宝瑞等用快速制备自体肿瘤浸润淋巴细胞方法联合白细胞介素2 2胸腔输注治疗癌性胸腔积液、胸腔输注治疗癌性胸腔积液、20012001年江西省萍乡市人民医院肿瘤年江西省萍乡市人民医院肿瘤科用科用TIL/LAKTIL/LAK治疗恶性浆膜腔积液治疗恶性浆膜腔积液38 38 例等报道，他们发现经过例等报道，他们发现经过TILTIL治

18、疗后，患者生活质量明显提高治疗后，患者生活质量明显提高,体力状况得到恢复，有效患者随访中体力状况得到恢复，有效患者随访中治疗侧胸腔未再出现胸腔积液或胸腔积液量增加治疗侧胸腔未再出现胸腔积液或胸腔积液量增加,治疗后除少数病例治疗后除少数病例短时间内出现可耐受的低热及胸痛外短时间内出现可耐受的低热及胸痛外,无一例出现其他不良反应。无一例出现其他不良反应。肿瘤侵润性淋巴细胞肿瘤侵润性淋巴细胞现在学习的是第34页，共91页淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)树状突细胞（DC）双克隆免疫细胞(DC-CIK)肿瘤继承性免疫治疗肿瘤

19、继承性免疫治疗现在学习的是第35页，共91页细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞Cytokine-induced killer cell,CIKCytokine-induced killer cell,CIK由由-IFN、TNFa、CD3单单抗抗、IL-1、IL-2等等在在体体外外诱诱导导并大量扩增的具有杀伤肿瘤活性的细胞并大量扩增的具有杀伤肿瘤活性的细胞1991年斯坦福骨髓移植中心首先报道年斯坦福骨髓移植中心首先报道1994年年Schmidt-wolf报报道道了了体体外外大大量量增增殖殖CIK细细胞胞的的方法。方法。是目前国际上广泛应用的肿瘤免疫治疗手段是目前国际上广泛应用的肿瘤免疫

20、治疗手段现在学习的是第36页，共91页细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)现在学习的是第37页，共91页分分2-3次静脉回输体内次静脉回输体内采集病人外周血单个核细胞采集病人外周血单个核细胞加入多种细胞因子培养加入多种细胞因子培养扩增、活化、诱导成为扩增、活化、诱导成为CIK细胞细胞发挥抗肿瘤作用发挥抗肿瘤作用到达病变部位直接清除残存肿瘤细胞到达病变部位直接清除残存肿瘤细胞调节和增强全身免疫机能调节和增强全身免疫机能防止肿瘤复发及转移防止肿瘤复发及转移 现在学习的是第38页，共91页CIKCIK细胞的特点细胞的特点1）高增殖活性高增殖活性：培养第：培养第18-22天达顶峰；天达顶峰；CD3+CD5

21、6+细胞增加细胞增加1000-6000倍；倍；28-30天达平台期，细胞毒活性亦达峰值天达平台期，细胞毒活性亦达峰值2）高细胞毒力高细胞毒力 CIK细胞的肿瘤细胞抑制指数为细胞的肿瘤细胞抑制指数为1.5-3.5，LAK细胞为细胞为0.5-1.5；3）杀瘤谱广泛杀瘤谱广泛：非：非MHC限制性限制性现在学习的是第39页，共91页4）细胞来源丰富）细胞来源丰富 正常或患者的骨髓单个核细胞或外周血单个核细胞、正常或患者的骨髓单个核细胞或外周血单个核细胞、干细胞均可诱导获得干细胞均可诱导获得CIK细胞；细胞；5）对多耐药性肿瘤细胞同样敏感）对多耐药性肿瘤细胞同样敏感6）不受免疫抑制剂）不受免疫抑制剂CS

22、A、FK506影响影响7）抵抗肿瘤细胞诱发的效应细胞）抵抗肿瘤细胞诱发的效应细胞Fas-FasL凋亡，凋亡，细胞内表达抗凋亡基因和保护基因细胞内表达抗凋亡基因和保护基因8）对正常骨髓前体细胞毒性很小）对正常骨髓前体细胞毒性很小现在学习的是第40页，共91页256例例各各种种中中晚晚期期肿肿瘤瘤患患者者（乳乳腺腺癌癌、肺肺癌癌、肠肠癌癌、肝肝癌癌、胃癌、淋巴瘤等）胃癌、淋巴瘤等）1-4疗程疗程CIK治疗治疗部分缓解和轻度缓解为部分缓解和轻度缓解为207例（例（80.86%）1年生存期为年生存期为96.06%2年生存期为年生存期为92.96%3年生存期为年生存期为88.38%生存质量卡氏评分提高率

23、为生存质量卡氏评分提高率为88.28%无无心心、肝肝、肾肾不不良良反反应应，仅仅数数例例有有一一过过性性发发热热，24小小时即正常时即正常国内国内2003年报道年报道现在学习的是第41页，共91页CIK细胞治疗细胞治疗癌性胸、癌性胸、腹水腹水136例癌性胸水例癌性胸水61例完全消失例完全消失57例显著减少例显著减少有效率有效率86.8%83例癌性腹水例癌性腹水26例完全消失例完全消失44例显著减少例显著减少有效率有效率84.3%现在学习的是第42页，共91页1999年，德国柏林Freie大学Schmidtwolf等人报告用自身CIK细胞治疗10例肿瘤肿瘤患者，结果1例完全缓解，3例稳定。200

24、5年，美国斯坦福大学医学中心Leembuis T等人用自身CIK（1109-1010）治疗9例霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，结果2例部分缓解，2例稳定，5例无反应，无严重毒副作用。2007年，意大利卡利亚里骨髓移植中心用供者CIK细胞治疗11例恶性血液疾病，结果病人能够耐受治疗，有助于控制疾病复发。CIKCIK细胞治疗细胞治疗现在学习的是第43页，共91页淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)树突状细胞（树突状细胞（DC）双克隆免疫细胞(DC-CIK)肿瘤过继性免疫治疗肿瘤过继性免疫治疗现在学习的是第44页，共91页树突状细胞（树突状细胞

25、（dendritic cell,DCdendritic cell,DC）应用负载肿瘤抗原的树突状细胞应用负载肿瘤抗原的树突状细胞激发机体产生肿瘤特异性激发机体产生肿瘤特异性CTL有效地杀伤肿瘤细胞有效地杀伤肿瘤细胞建立持久的抗肿瘤的特异性免疫应答建立持久的抗肿瘤的特异性免疫应答现在学习的是第45页，共91页DCDC研究历史研究历史美国学者美国学者Steinman及及Cohn于于1973年发现年发现1992年年Steinman建立了建立了应用应用GM-CSF从小鼠骨髓从小鼠骨髓中大规模培养制备中大规模培养制备DC的方法的方法此后建立并完善了多种培养扩增此后建立并完善了多种培养扩增DC的方法的方法

26、DC的研究得以深入的研究得以深入现在学习的是第46页，共91页2009年，英国伯明翰英国癌症研究临床年，英国伯明翰英国癌症研究临床试验组的试验组的Palmer等人用肝癌细胞株溶胞等人用肝癌细胞株溶胞产物致敏产物致敏DC治疗治疗35例晚期肝癌病人例晚期肝癌病人部分缓解和病情稳定者部分缓解和病情稳定者10例例4例例AFP明显下降明显下降7例例T细胞对细胞对AFP有免疫反应有免疫反应DCDC细胞细胞 -近期研究近期研究现在学习的是第47页，共91页DC细胞的基本特征细胞的基本特征体内功能最强的抗原提呈细胞体内功能最强的抗原提呈细胞显著刺激初始型显著刺激初始型T细胞增殖细胞增殖机体免疫反应的始动者机体

27、免疫反应的始动者在免疫应答的诱导中具有独特的地位在免疫应答的诱导中具有独特的地位现在学习的是第48页，共91页DCDC对抗原的加工处理与提呈对抗原的加工处理与提呈DC与与T细胞接触细胞接触表面的表面的MHC-肽复合物被肽复合物被T细胞识别细胞识别将抗原信息传递给将抗原信息传递给T细胞细胞抗原提呈抗原提呈现在学习的是第49页，共91页树突状细胞与树突状细胞与T细胞的作用细胞的作用现在学习的是第50页，共91页v脑以外的全身各脏器脑以外的全身各脏器v皮肤、肝、皮肤、肝、脾、骨髓、淋巴器官脾、骨髓、淋巴器官和外周血中和外周血中v仅占人外周血单个核细胞的仅占人外周血单个核细胞的1左右左右v外周血中有很

28、多外周血中有很多DC前体细胞，在体外诱导成前体细胞，在体外诱导成DCDCDC的组织分布的组织分布现在学习的是第51页，共91页现在学习的是第52页，共91页现在学习的是第53页，共91页肿瘤抗原致敏患者自身的树突状细胞肿瘤抗原致敏患者自身的树突状细胞制备成制备成瘤苗瘤苗(或或细胞悬浮液细胞悬浮液)回输患者回输患者DC细胞治疗肿瘤的方案和途径细胞治疗肿瘤的方案和途径现在学习的是第54页，共91页树突状细胞（DC）治疗流程图 收集患者外周血单个模细胞PBMC抗原致敏的DC体外细胞因子刺激回输给同一患者相关多肽致敏现在学习的是第55页，共91页树突状细胞树突状细胞（杀伤性杀伤性T T细胞细胞）杀伤性

29、杀伤性T T细胞细胞机理机理现在学习的是第56页，共91页淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)树状突细胞（DC）共培养免疫细胞共培养免疫细胞(DC-CIK)肿瘤继承性免疫治疗肿瘤继承性免疫治疗现在学习的是第57页，共91页共培养免疫细胞(DC-CIK)共培养免疫细胞共培养免疫细胞(DC-CIK)n 树突状细胞树突状细胞(DC)+细胞因子诱导的杀伤细胞细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)n DC 和和 CIK 是肿瘤免疫治疗的两部分是肿瘤免疫治疗的两部分nDC 识别病原识别病原,激活获得性免疫系统激活获得性免疫系统nCIK通过发挥自身细胞毒性与分

30、泌细胞因子杀伤肿瘤细胞通过发挥自身细胞毒性与分泌细胞因子杀伤肿瘤细胞n二者联合确保有效和谐的免疫反应之完成二者联合确保有效和谐的免疫反应之完成现在学习的是第58页，共91页共培养免疫细胞共培养免疫细胞(DC-CIK)n大容量体外大容量体外CIK细胞扩增技术诱导细胞扩增技术诱导CIK细胞细胞n按一定比例与按一定比例与DC细胞混合培养细胞混合培养n得到一种新的抗肿瘤免疫活性细胞群得到一种新的抗肿瘤免疫活性细胞群nDC-CIK疗法拥有更强的增殖能力及特异性识别疗法拥有更强的增殖能力及特异性识别杀伤杀伤肿瘤细胞之特性肿瘤细胞之特性共培养免疫细胞(DC-CIK)现在学习的是第59页，共91页2008年中

31、国科学院生物物理研究所邓笑伟等用不同来源的CIK和DC联合治疗21例中晚期肺癌，结果CR 2例,PR 7例,SD5例,PD 7例,有效率为42.9%,临床获益率(CR+PR+SD)为66.7%，细胞回输后主要不良反应为一过性发热。CIK-DCCIK-DC共培养细胞治疗共培养细胞治疗现在学习的是第60页，共91页Barry等（匹兹堡大学肿瘤研究所等（匹兹堡大学肿瘤研究所2003年）年）15例转移性乳腺癌回输例转移性乳腺癌回输NK细胞细胞4例完全缓解，耐受性良好，无毒副作用例完全缓解，耐受性良好，无毒副作用NKNK细胞细胞现在学习的是第61页，共91页Koehl等（德国法兰克福大学医院等（德国法兰

32、克福大学医院2004年）年）3例例ALL干细胞移植病人干细胞移植病人NK细胞细胞+IL-2治疗治疗患儿能充分耐受患儿能充分耐受NKNK细胞细胞现在学习的是第62页，共91页Miller等（明尼阿波利大学肿瘤中心等（明尼阿波利大学肿瘤中心2005年）年）NK细胞联合细胞联合CTX+Fludarabine治疗治疗19例例AML5例血液学完全缓解例血液学完全缓解NKNK细胞细胞现在学习的是第63页，共91页Arai等（芝加哥等（芝加哥Risb大学医学中心大学医学中心2008年）年）同种异基因细胞系同种异基因细胞系NK-92治疗治疗12例晚期肾癌例晚期肾癌和黑色素瘤病人和黑色素瘤病人1例完全缓解，例完

33、全缓解，1例稳定，例稳定，1例为混合反应例为混合反应NKNK细胞细胞现在学习的是第64页，共91页Kobayashi等（东京女子医学大学等（东京女子医学大学2007年）年）自身自身T细胞治疗细胞治疗7例进展期肺癌例进展期肺癌治疗后患者治疗后患者T细胞明显增多细胞明显增多无明显毒副作用。无明显毒副作用。TT 细胞细胞现在学习的是第65页，共91页Bennouna等（等（2008年，法国）年，法国）自身自身T细胞（细胞（8109）+IL-210例转移性肾癌患者例转移性肾癌患者6例患者治疗后例患者治疗后25.7周内病情稳定周内病情稳定仅出现感冒样症状仅出现感冒样症状TT 细胞细胞现在学习的是第66页

34、，共91页OkaiOkai等（澳大利亚昆土兰州医学研究所等（澳大利亚昆土兰州医学研究所等（澳大利亚昆土兰州医学研究所等（澳大利亚昆土兰州医学研究所20022002年）年）年）年）半乳糖神经酰胺（半乳糖神经酰胺（半乳糖神经酰胺（半乳糖神经酰胺（-galcer-galcer）荷载）荷载）荷载）荷载DCDC4 4例癌转移患者例癌转移患者例癌转移患者例癌转移患者治疗后病人治疗后病人治疗后病人治疗后病人NKTNKT细胞明显增多细胞明显增多细胞明显增多细胞明显增多患者未出现不良反应患者未出现不良反应患者未出现不良反应患者未出现不良反应NKT NKT 细胞细胞现在学习的是第67页，共91页ShikawaSh

35、ikawa等（神奈川县千叶大学医院等（神奈川县千叶大学医院等（神奈川县千叶大学医院等（神奈川县千叶大学医院20052005年）年）年）年）-galcer-galcer荷载荷载荷载荷载DCDC9 9例复发性非小细胞肺癌例复发性非小细胞肺癌例复发性非小细胞肺癌例复发性非小细胞肺癌治疗后治疗后治疗后治疗后5 5例病情稳定例病情稳定例病情稳定例病情稳定未出现不良反应未出现不良反应未出现不良反应未出现不良反应NKT NKT 细胞细胞现在学习的是第68页，共91页2008年，千叶大学医院年，千叶大学医院-galcer荷载荷载DC9例头部肿瘤例头部肿瘤1例部分缓解例部分缓解4例稳定例稳定NKT NKT 细胞

36、细胞现在学习的是第69页，共91页DC-CIKDC-CIK免疫治疗联合常规治疗方法免疫治疗联合常规治疗方法治疗时机与方案治疗时机与方案联合治疗意义联合治疗意义术后联合术后联合DC-CIK1.快速恢复手术造成的免疫损伤；快速恢复手术造成的免疫损伤；2.特异清除术后残余肿瘤细胞；防治转移复发特异清除术后残余肿瘤细胞；防治转移复发3.增强放疗敏感性，减少放疗毒副作用；增强放疗敏感性，减少放疗毒副作用；4.抵抗化疗药物的免疫抑制作用；抵抗化疗药物的免疫抑制作用；5.增强对化疗药物敏感性；增强对化疗药物敏感性；6.支持骨髓功能衰竭后的免疫重建；支持骨髓功能衰竭后的免疫重建；放疗联合放疗联合DC-CIK化

37、疗联合化疗联合DC-CIK常规治疗无效常规治疗无效支持疗法支持疗法 现在学习的是第70页，共91页DC-CIK DC-CIK 治疗与常规治疗方法比较治疗与常规治疗方法比较 治疗种类治疗种类 特点特点 DC-CIKDC-CIK免疫治疗免疫治疗 增强机体免疫功能增强机体免疫功能增强放、化疗的敏感性增强放、化疗的敏感性清除微小病灶和残余肿瘤细胞清除微小病灶和残余肿瘤细胞无明显毒副作用无明显毒副作用 手术手术 局部快速切除肿瘤组织；见效快；局部快速切除肿瘤组织；见效快；微小病灶或转移病灶；微小病灶或转移病灶；放疗放疗 局部减少肿瘤负荷；见效快；局部减少肿瘤负荷；见效快；不敏感细胞，复发根源；不敏感细胞

38、，复发根源；造成免疫损伤；造成免疫损伤；化疗化疗 全身减轻肿瘤负荷；见效快；全身减轻肿瘤负荷；见效快；不敏感细胞，复发根源；不敏感细胞，复发根源；毒副作用大，造成免疫损伤；毒副作用大，造成免疫损伤；现在学习的是第71页，共91页CD3AK细胞细胞：免疫原性较强的肿瘤（具有：免疫原性较强的肿瘤（具有T细胞受体（细胞受体（TCR）除外）除外）CIK细胞细胞：各种肿瘤，对低表达：各种肿瘤，对低表达MHC分子更有效分子更有效T细胞细胞：各种肿瘤，对呼吸系统、消化系统和生殖系统以及部分血液恶性：各种肿瘤，对呼吸系统、消化系统和生殖系统以及部分血液恶性疾病疗效好疾病疗效好树突状细胞树突状细胞：成熟：成熟D

39、C可与各种细胞联合应用，增强抗肿瘤免疫效果可与各种细胞联合应用，增强抗肿瘤免疫效果树突状细胞疫苗树突状细胞疫苗：可以预防和治疗相应的各种肿瘤：可以预防和治疗相应的各种肿瘤NKT细胞细胞：对消化系统尤其是肝癌和呼吸系统肿瘤以及头颈部肿瘤效果好：对消化系统尤其是肝癌和呼吸系统肿瘤以及头颈部肿瘤效果好NK细胞细胞：对不表达：对不表达MHC分子的肿瘤效果好分子的肿瘤效果好巨噬细胞巨噬细胞：型型M具有一定的抗肿瘤作用，可一其他免疫细胞联合应用具有一定的抗肿瘤作用，可一其他免疫细胞联合应用免疫细胞和细胞群抗癌谱免疫细胞和细胞群抗癌谱现在学习的是第72页，共91页免疫联合治疗免疫联合治疗CIKCIKCIKC

40、IK细胞细胞细胞细胞DC-CIKDC-CIKDC-CIKDC-CIK共培养细胞共培养细胞共培养细胞共培养细胞DCDCDCDC联合联合联合联合CIKCIKCIKCIK细胞细胞细胞细胞CD3AKCD3AKCD3AKCD3AK细胞细胞细胞细胞DCDCDCDC疫苗联合疫苗联合疫苗联合疫苗联合CIKCIKCIKCIK、CD3AKCD3AKCD3AKCD3AK细胞细胞细胞细胞共刺激共刺激共刺激共刺激T T细胞细胞细胞细胞巨噬细胞联合巨噬细胞联合巨噬细胞联合巨噬细胞联合CIKCIK细胞细胞细胞细胞肿瘤特异性肿瘤特异性肿瘤特异性肿瘤特异性T T细胞联合细胞联合细胞联合细胞联合NKNK、TTTT细胞、细胞、细胞

41、、细胞、NKTNKTNKTNKT细胞细胞细胞细胞现在学习的是第73页，共91页细胞培养实验场所细胞培养场所条件:符合GMP要求 按照品质管理架构之模式管理。GTP GTP细胞培养细胞培养/治疗流程治疗流程 实验室管理流程实验室管理流程 生物安全实验流程生物安全实验流程 消毒程序与周期流程消毒程序与周期流程 维护和性能验证程序维护和性能验证程序 设备设备3Q3Q品质验证品质验证 设备清洁和维护保养设备清洁和维护保养 试剂、耗材的外购品质检测流程试剂、耗材的外购品质检测流程最终细胞产品检测流程最终细胞产品检测流程:用常规方法进行细菌和真菌培养试验用常规方法进行细菌和真菌培养试验 用鲎试剂法进行内毒

42、素检测用鲎试剂法进行内毒素检测 用功能性杀瘤实验法进行杀伤活性检测用功能性杀瘤实验法进行杀伤活性检测 用流式细胞仪进行表面标记检测用流式细胞仪进行表面标记检测 用常规方法检测细胞总数、细胞存活率、特定生物活性效价用常规方法检测细胞总数、细胞存活率、特定生物活性效价现在学习的是第74页，共91页各种细胞回输方法各种细胞回输方法培养细胞收集于离心瓶。培养细胞收集于离心瓶。2500rpm8min，20 进行细胞计数、检查内毒素、细胞表型，将细胞重悬于自身血浆中，按照不同的细胞选择不同的回输方法。留样封存。0.9注射用生理盐水2000rpm8min2次，20核对好病人姓名、性别、年龄、住院号、细胞数、

43、无菌结果、病区及治疗项目现在学习的是第75页，共91页CIK细胞制备培养 用血液保养袋用血液保养袋采采集集200ML外周血外周血2000g15min，20 75cm2培养瓶CIK培养液（含IFN-）第2天加混合细胞因子PMNC层CIK培养隔天扩瓶培养瓶内细胞收集、离心、洗涤回输第7天扩瓶后抽样送检（细菌培养和表型分析）第3天扩瓶培养留血浆50ML备用分离出6ml富含白细胞的血液淋巴细胞分离液现在学习的是第76页，共91页第10天培养瓶内DC细胞收集、离心、洗涤和回输第3天补充含半量细胞因子的培养基，并加肿瘤抗原第6天补充培养基，加TNF-，抽样送检（细菌培养和表型分析）75cm2培养瓶1640

44、培养液2000g15min，20 留血浆50ML备用分离出6ml富含白细胞的血液淋巴细胞分离液PMNC层用血液保养袋用血液保养袋采集采集200ML外周血外周血细胞贴壁120min贴壁细胞进行贴壁细胞进行DC细胞培养方案悬浮细胞进行CIK培养方案树突状细胞树突状细胞制制备备流程流程现在学习的是第77页，共91页癌症生物治疗的优点1）应用范围广几乎可以应用于所有肿瘤患者。2）对原发肿瘤转移肿瘤均有明显疗效 3）对于手术后的恶性肿瘤患者的残存肿瘤细胞的清除预防肿瘤 的复发有着比化疗更明显的作用。4）副作用小，目前仅发现有发烧类似感冒的副作用。5）不损伤正常组织并能提高机体免疫力和改善身体状况的作用。

45、生物治疗具有无创伤无痛苦安全无副作用等特点，是未来肿瘤治疗的重要发展方向。特异性强适应症广延长生命性强抗复发性强安全性好(副作用低 几乎没有)合适的费用现在学习的是第78页，共91页适应症适应症 主要用于恶性黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、各种肺癌、喉癌、鼻咽癌、胰腺癌、肝癌、胃癌等实体瘤手术后防止复发；也可以用于多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤和白血病等血液系统恶性肿瘤缓解期进一步预防复发；还可以用于上述实体瘤缓解期进一步巩固治疗或上述晚期肿瘤配合放化疗、介入治疗、热疗等方法，达到延长生存期、提高生活质量和控制肿瘤进展的目的。现在学习的是第79页，共91页

46、适应症适应症A、适合免疫治疗者：年龄大于16岁；病理组织学或细胞学确诊为肿瘤患者生活自理，卡氏体力状况评分标准60分以上；预计生存期至少大于6个月；签署知情同意书；放化疗结束一个月以上的；如若可以接受手术治疗或其它方式能够获得一定数量的肿瘤组织件或细胞的患者最佳。现在学习的是第80页，共91页不适合症不适合免疫治疗者：怀孕或哺乳期妇女；器官功能衰竭者：心脏：IV级以上；肝脏：达到国内肝功能分级C级以上；肾脏：肾功能衰竭及尿毒症期以上；肺：出现严重的呼吸衰竭症状，并累及到其他脏器，如肝、肾功能；脑：脑转移并伴意识障碍者；脏器移植者；长期使用免疫抑制药物或正在使用的自身免疫性疾病患者；精神疾病者，

47、发生急性肝炎或其他急性感染病活动期；对本治疗中所用生物试剂过敏者。治疗者中途撤出者：病情恶化；患者产生无法忍受的副作用;患者要求退出治疗。现在学习的是第81页，共91页禁忌症:病人生命体征己出现衰竭的现象病人处于怀孕期和哺乳期病人明确诊断肉瘤(除恶性黑色素瘤)病人明确诊断软骨瘤病人明确诊断原发性颅内肿瘤现在学习的是第82页，共91页肿瘤临床分期及治疗原则:现在学习的是第83页，共91页肿瘤临床分期及治疗原则:现在学习的是第84页，共91页肿瘤临床分期及治疗原则:现在学习的是第85页，共91页（一）常规检查评估（一）常规检查评估（一）常规检查评估（一）常规检查评估影像学检查（磁共振、影像学检查（

48、磁共振、影像学检查（磁共振、影像学检查（磁共振、CTCT、petCTpetCT、彩色多普勒等根据、彩色多普勒等根据、彩色多普勒等根据、彩色多普勒等根据实体瘤疗效评价标准进行评价实体瘤疗效评价标准进行评价实体瘤疗效评价标准进行评价实体瘤疗效评价标准进行评价肿瘤志物检测肿瘤志物检测肿瘤志物检测肿瘤志物检测病人体力状况（病人体力状况（病人体力状况（病人体力状况（WHOWHO、五分法、五分法、五分法、五分法、KPSKPS、百分法）、百分法）、百分法）、百分法）参考实体肿瘤疗效评估标准（参考实体肿瘤疗效评估标准（参考实体肿瘤疗效评估标准（参考实体肿瘤疗效评估标准（REIST1.1 REIST1.1 版标

49、准）版标准）免疫治疗后的疗效评估现在学习的是第86页，共91页免疫治疗后的疗效评估（二）细胞免疫功能监测（二）细胞免疫功能监测（二）细胞免疫功能监测（二）细胞免疫功能监测1、细胞免疫功能检查百分数和绝对值：CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+（绝对值为百分数 乘以淋巴细胞绝对数，血常规均有淋巴细胞绝对数）2、NK细胞亚群百分数和绝对值：CD3+CD16+CD56+；CD3-CD16+CD56+；CD3+CD16+CD56-3、T细胞、NKT细胞百分数和绝对值4、NK细胞毒测定（以K562细胞株为靶细胞）5、LAK细胞毒测定（以Daudi细胞株为靶细胞）现在学习的是第87页，共91页免疫

50、治疗后的疗效评估（二）细胞免疫功能监测（二）细胞免疫功能监测（二）细胞免疫功能监测（二）细胞免疫功能监测6、CD8+T细胞、T细胞的粒酶和穿孔素测定7、CD3+CD8+T细胞、CD3+CD4+T细胞、T细胞记 忆表型分析。如CD3+CD8+T细胞、CD3+CD4+T细 胞、T细胞的CD45RA（初始）和CD45RO（记 忆）8、CD3+CD4+Foxp3+T细胞9、激活性标志：CD3+HLA-DR、CD4+HLA-DR、CD8+HLA-DR10、通过ELISPOT、流式细胞仪和四聚体测抗原特异性 T细胞（CD4+、CD8+T细胞）含量。现在学习的是第88页，共91页（三）细胞因子监测（三）细胞