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1、关于还原糖蛋白质脂肪的鉴定现在学习的是第1页，共26页检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 1.实验原理现在学习的是第2页，共26页 斐林试剂斐林试剂苏丹苏丹橘黄色橘黄色红色红色砖红色沉淀砖红色沉淀紫色紫色苏丹苏丹 双缩脲试剂双缩脲试剂鉴定物质鉴定物质试剂试剂实验现象实验现象还原性糖还原性糖脂肪脂肪蛋白质蛋白质生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定l实验原理实验原理现在学习的是第3页，共26页方法步骤：方法步骤：1 1实验材料、仪器和试剂的选择实验材料、仪器和试剂的选择 2 2设计记录表格，记录预测结果设计记录表格，
2、记录预测结果 3 3检测的方法步骤检测的方法步骤 (1)(1)还原糖的检测和观察还原糖的检测和观察;(2)(2)脂肪的检测和观察脂肪的检测和观察;(3)(3)蛋白质的检测和观察蛋白质的检测和观察;现在学习的是第4页，共26页现在学习的是第5页，共26页现在学习的是第6页，共26页现在学习的是第7页，共26页选材：含糖量较高的选材：含糖量较高的白色或近于白色的植物组织白色或近于白色的植物组织(排除色素对排除色素对显色的干扰显色的干扰)，苹果、梨最好，苹果、梨最好。l实验流程实验流程(步骤步骤)1.可溶性还原糖可溶性还原糖 制备组织样液：制备组织样液：制浆：去皮、切块、研磨，制浆：去皮、切块、研磨
3、，过滤：（用单层纱布）过滤：（用单层纱布）取液：取液：（mL）显色反应显色反应 mL组织样液刚配制的斐林试剂mL现象：现象：(用前混匀用前混匀)5065.C水浴水浴加热加热2min现在学习的是第8页，共26页还原糖的检测和观察：还原糖的检测和观察：现在学习的是第9页，共26页还原糖的检测结果还原糖的检测结果还原糖的检测结果还原糖的检测结果现在学习的是第10页，共26页现在学习的是第11页，共26页现在学习的是第12页，共26页2.脂肪的鉴定脂肪的鉴定 取材：花生种子（浸泡取材：花生种子（浸泡h），去皮，将子叶削成薄片），去皮，将子叶削成薄片 制片：制片：选取最薄的薄片移至载玻片中央选取最薄的薄
4、片移至载玻片中央在薄片上滴加在薄片上滴加苏丹苏丹(或苏丹或苏丹)染液染液2 3滴，滴，染色染色min滴加体积分数为滴加体积分数为50%的酒精的酒精溶液溶液12滴，洗滴，洗去浮色去浮色(多余的苏丹多余的苏丹)吸去余液，滴吸去余液，滴1-2滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成临时装片临时装片显微观察：显微观察：先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察先在低倍镜下找到已着色的薄片，后用高倍镜观察现象：现象：有被染成有被染成橘黄色橘黄色(或红色或红色)的脂肪微粒的脂肪微粒脂肪微粒脂肪微粒现在学习的是第13页，共26页脂肪的检测结果脂肪的检测结果现在学习的是第14页，共26页现在学习
5、的是第15页，共26页3.蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定 选材与制备选材与制备组织样液：组织样液：黄豆组织样液（或鸡蛋蛋清稀释液）黄豆组织样液（或鸡蛋蛋清稀释液）黄豆浸泡黄豆浸泡 去皮去皮切片切片研磨研磨过滤过滤滤液滤液 显显色色反反应应mL组织样液双缩脲试剂mL现象：现象：无色无色双缩脲试剂滴紫色或紫红色紫色或紫红色(创设碱性条件创设碱性条件)(提供提供Cu2+)现在学习的是第16页，共26页蛋白质的检测结果蛋白质的检测结果现在学习的是第17页，共26页蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定-双缩脲试剂双缩脲试剂鸡蛋清溶液鸡蛋清溶液 NaOH 溶液溶液滴加滴加CuSO2 溶液溶液,每次滴加均需摇匀每次滴加均需摇
6、匀结果显示结果显示:紫色紫色现在学习的是第18页，共26页实验成功的关键与注意事项实验成功的关键与注意事项1.实验成功的关键在于实验材料的选择：实验成功的关键在于实验材料的选择：在做可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含在做可溶性还原糖的鉴定实验中，最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织糖量较高的生物组织(或器官或器官)，而且组织的颜色较浅，最好是白，而且组织的颜色较浅，最好是白色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变色或近于白色的植物组织，这样可以避免材料自身颜色对实验变化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、化颜色的掩盖。经实验比较，颜色反应的明显程
7、度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。梨、白色甘蓝叶、白萝卜。在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种在做脂肪的鉴定实验中，实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子子，且徒手切片要成功，要求实验技能较高，不妨改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。叶泥制作临时装片，易做，效果又好。在做糖和蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质的在做糖和蛋白质的实验时，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋，生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋，鉴定之前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色鉴定之
8、前需要留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色做比较，这样可增强说服力。做比较，这样可增强说服力。现在学习的是第19页，共26页问题探讨问题探讨:1、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出、在做还原糖、蛋白质鉴定的实验时，为什么要留出一部分样液？一部分样液？作对照作对照2、使用双缩脲试剂时为什么、使用双缩脲试剂时为什么B液只能加液只能加34滴而不能滴而不能过量？过量？过量的双缩脲试剂过量的双缩脲试剂B B会与试剂会与试剂A A反应，使溶液呈蓝色，而掩反应，使溶液呈蓝色，而掩盖生成的紫色。盖生成的紫色。3、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？时间
9、太长，时间太长，Cu(OH)Cu(OH)2 2悬浊液就沉淀在试管底部而无法参悬浊液就沉淀在试管底部而无法参与反应。与反应。l深化深化现在学习的是第20页，共26页2.注意事项：注意事项：A.可溶性还原糖可溶性还原糖 (1)斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液(0.1g/mL的的NaOH溶液溶液)和乙液和乙液(0.05g/mL的的CuSO溶溶液液)分别配制、储存，使用时，再临时配制，将分别配制、储存，使用时，再临时配制，将45滴乙液滴入滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。切勿将甲液和乙液分别加入组甲液中，配完后立即使用。切勿将甲液和乙液分别加入
10、组织样液中。织样液中。(2)鉴定可溶性还原糖，加热试管时，应该用试管夹夹鉴定可溶性还原糖，加热试管时，应该用试管夹夹住试管上部，放入盛开水的大烧杯加热；注意试管底部不接住试管上部，放入盛开水的大烧杯加热；注意试管底部不接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免溶液溢出。以提起试管夹，使试管与沸水接触面减少，以免溶液溢出。现在学习的是第21页，共26页B.脂肪的鉴定脂肪的鉴定 (1)在鉴定
11、脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必在鉴定脂肪的实验中，若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡须提前浸泡34小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。过长，则组织太软，切下的薄片不易成形，切片要尽可能的薄。(2)染色后一定要用染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色，染色的酒精溶液洗去浮色，染色和洗浮色时间不宜过长（否则酒精将脂肪溶解影响实验效和洗浮色时间不宜过长（否则酒精将脂肪溶解影响实验效果），观察时找最薄处最好只有果），观察时找最薄处最好只有12层细胞。层细胞。现在学习的是第22页，共26页C.
12、蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定 (1)在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋白质作实验材料，在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋白质作实验材料，必须稀释，如果稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后会粘必须稀释，如果稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷干净。固在试管内壁上，使反应不彻底，且试管不易洗刷干净。(2)双缩脲试剂的使用，应先双缩脲加试剂双缩脲试剂的使用，应先双缩脲加试剂A(0.1g/mL的的NaOH溶液溶液)，造成碱性的反应环境，再，造成碱性的反应环境，再加试剂加试剂B(0.01g/mL的的CuSO溶液溶液)。现在学习的是第23页，共26页4、斐林试剂与双缩脲试剂两者有何
13、不同？、斐林试剂与双缩脲试剂两者有何不同？新配制新配制的的Cu(OH)2溶液溶液在碱性在碱性环境下环境下的的Cu2+NaOH浓度为浓度为0.1g/mLCuS04浓度为浓度为0.05g/mLNaOH浓度为浓度为0.1g/mLCuS04浓度为浓度为0.01g/mL先把先把NaOH溶液和溶液和CuSO4溶液溶液混合混合，而后而后立即使用立即使用。先先加入加入Na0H1mL，然，然后后再加再加CuS044滴，摇匀。滴，摇匀。(不能过量不能过量)水浴水浴加热加热不不需需要要现在学习的是第24页，共26页5、实验的材料的选择和处理有什么要求？、实验的材料的选择和处理有什么要求？材料的选择材料的选择材料的处理材料的处理还原性糖的鉴定还原性糖的鉴定脂肪的鉴定脂肪的鉴定含糖高，颜色为含糖高，颜色为白色的植物组织，白色的植物组织，如苹果和梨如苹果和梨富含脂肪的种子富含脂肪的种子，如花生，如花生浸泡浸泡34小时小时/蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定富含蛋白质的富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清黄豆或鸡蛋清黄豆需浸泡黄豆需浸泡1-2天，鸡天，鸡蛋清要先稀释蛋清要先稀释现在学习的是第25页，共26页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第26页，共26页