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1、细胞培养设施和基本条件第1页，此课件共34页哦准备室：准备室：用于进行培养器皿的清洗、包装、培养物质的准备和消毒以及用于进行培养器皿的清洗、包装、培养物质的准备和消毒以及供应物品的保藏等。供应物品的保藏等。缓冲室：缓冲室：为减少外界污染源带入培养室，在培养室外间有一缓冲室，为减少外界污染源带入培养室，在培养室外间有一缓冲室，35m2既可，可作为更衣室既可，可作为更衣室,也可放置恒温培养箱或离心机。也可放置恒温培养箱或离心机。培养室：培养室：用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。其基本用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。其基本条件是：条件是：清洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线，应清
2、洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线，应尽量设法避免外界的污染。尽量设法避免外界的污染。培养室和缓冲室的天花板上均应装消毒用的紫外线灯。培养室和缓冲室的天花板上均应装消毒用的紫外线灯。第2页，此课件共34页哦41缓冲室缓冲室第3页，此课件共34页哦第4页，此课件共34页哦第5页，此课件共34页哦一、最常用的大型必备装置和仪器一、最常用的大型必备装置和仪器 净化工作台、净化工作台、COCO2 2培养箱、倒置显微镜、离心机、培养箱、倒置显微镜、离心机、冰箱、电热干燥箱、超纯水装置、消毒锅、超声波冰箱、电热干燥箱、超纯水装置、消毒锅、超声波 清洗器、恒温水浴箱、冷冻保存装置、天平等清洗器、恒温水
3、浴箱、冷冻保存装置、天平等二、最常用的培养器具二、最常用的培养器具 l.l.过滤除菌装置：不锈钢正压过滤器、一次性滤器过滤除菌装置：不锈钢正压过滤器、一次性滤器 2.2.手术器械手术器械 3.3.培养器皿：溶液瓶、培养瓶培养器皿：溶液瓶、培养瓶、培养皿、多孔培培养皿、多孔培 养板、移液管和吸管、离心管养板、移液管和吸管、离心管 第二节第二节 实验室设备实验室设备第6页，此课件共34页哦 外流式外流式（基本不用）（基本不用）侧流式侧流式 直流式直流式超净工作台：超净工作台：工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，埃颗粒，
4、使空气得到净化使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。台内构成无菌环境。第7页，此课件共34页哦 超净工作台结构和模式图超净工作台结构和模式图 第8页，此课件共34页哦COCO2 2培养箱：培养箱：维持适当温度、湿度与维持适当温度、湿度与pHpH培养箱设定的条件为培养箱设定的条件为37 37 ，5 5COCO2 2培养容器需与外界保持通气状态培养容器需与外界保持通气状态箱内空气应保持干净，定期消毒箱内空气应保持干净，定期消毒（紫外灯、酒精）（紫外灯、酒精）水槽水槽:使用蒸馏水，保持一定湿使用蒸馏水，保持一定湿度。度。第9页，此课件共3
5、4页哦电热干燥箱：电热干燥箱：烘干和干热消毒玻璃器皿烘干和干热消毒玻璃器皿鼓风与升温同时进行，鼓风与升温同时进行，100100度时可停止度时可停止鼓风鼓风禁止先升温后鼓风禁止先升温后鼓风100100度以下时再打开箱门度以下时再打开箱门金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒燥箱内消毒干热灭菌（干热灭菌（160160，2hr2hr）第10页，此课件共34页哦高压灭菌锅高压灭菌锅：用于湿热灭菌用于湿热灭菌液体、金属器械、塑料制品、橡液体、金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒胶等不能在干燥箱内消毒121121，20min20min第11页，此课件共34页
6、哦超纯水仪超纯水仪倒置显微镜倒置显微镜 离心机离心机 液氮罐液氮罐 第12页，此课件共34页哦手动移液器手动移液器电动移液器电动移液器第13页，此课件共34页哦精密精密PHPH计计微孔板震荡器微孔板震荡器 第14页，此课件共34页哦培养器皿培养器皿 玻璃瓶皿（用于储存各种液体）玻璃瓶皿（用于储存各种液体）玻璃瓶（玻璃瓶（500500毫升、毫升、250250毫升、毫升、100100毫升）毫升）吸管、离心管吸管、离心管多孔培养板多孔培养板4 4、6 6、2424、9696孔；培养皿孔；培养皿3030、6060、100100毫米；培养瓶毫米；培养瓶第15页，此课件共34页哦第三节第三节 清洗与消毒清
7、洗与消毒在组织细胞培养中清洗和消毒是一项极为重要的环节。在组织细胞培养中清洗和消毒是一项极为重要的环节。清洗的主要清洗的主要目的目的:清除杂质和微生物，使在器皿内不残留任何清除杂质和微生物，使在器皿内不残留任何影响细胞生长的成份。影响细胞生长的成份。细胞培养所用的器皿：细胞培养所用的器皿：细胞培养所用的器皿：细胞培养所用的器皿：玻璃类玻璃类玻璃类玻璃类塑料类塑料类塑料类塑料类金属类金属类第16页，此课件共34页哦一、清洗一、清洗一、清洗一、清洗在细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感在细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感在细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感在细胞培养中，
8、体外细胞对任何有害物质都非常敏感,均能影响均能影响均能影响均能影响培养细胞的生长培养细胞的生长培养细胞的生长培养细胞的生长微生物产品附带杂物微生物产品附带杂物微生物产品附带杂物微生物产品附带杂物上次细胞残留物上次细胞残留物上次细胞残留物上次细胞残留物非营养成分的化学物质非营养成分的化学物质非营养成分的化学物质非营养成分的化学物质需要清洗的培养用品需要清洗的培养用品需要清洗的培养用品需要清洗的培养用品玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗胶塞的清洗胶塞的清洗胶塞的清洗胶塞的清洗塑料制品的清洗塑料制品的清洗塑料制品的清洗塑料制品的清洗第17页，此课件共34页哦1.1.1.1.玻璃
9、器皿的清洗玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗浸泡浸泡浸泡浸泡刷洗刷洗刷洗刷洗(+(+(+(+烘干烘干烘干烘干)浸酸浸酸浸酸浸酸冲洗冲洗冲洗冲洗清洗后的玻璃器皿：干净透明无油迹清洗后的玻璃器皿：干净透明无油迹清洗后的玻璃器皿：干净透明无油迹清洗后的玻璃器皿：干净透明无油迹第18页，此课件共34页哦浸泡：浸泡：浸泡：浸泡：初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物（灰尘或其他有害物）软化或被溶掉。先用自
10、来水简单刷洗，然后用（灰尘或其他有害物）软化或被溶掉。先用自来水简单刷洗，然后用（灰尘或其他有害物）软化或被溶掉。先用自来水简单刷洗，然后用（灰尘或其他有害物）软化或被溶掉。先用自来水简单刷洗，然后用5 5 5 5稀盐酸稀盐酸稀盐酸稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的残留蛋白质，干固后再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的残留蛋白质，干固后再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的残留蛋白质，干固后再次使用的玻璃器皿则常附有大量刚使用过的残留蛋白质，
11、干固后不易洗掉，用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液不易洗掉，用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液不易洗掉，用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液不易洗掉，用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面上。面上。面上。面上。刷洗：刷洗：刷洗：刷洗：用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质，刷洗要适度，用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质，刷洗要适度，用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质，刷洗要适度，用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质，刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度。过度会损害器皿表面光泽度
12、。过度会损害器皿表面光泽度。过度会损害器皿表面光泽度。自然晾干自然晾干自然晾干自然晾干或或或或烘干烘干烘干烘干后泡酸。后泡酸。后泡酸。后泡酸。第19页，此课件共34页哦浸酸：浸酸：浸酸：浸酸：玻璃器皿浸泡到玻璃器皿浸泡到玻璃器皿浸泡到玻璃器皿浸泡到清洁液（洗液）清洁液（洗液）清洁液（洗液）清洁液（洗液）中中中中清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质的微量杂质的微量杂质的微量杂质浸泡时器皿要浸泡时器皿要
13、浸泡时器皿要浸泡时器皿要充满清洁液充满清洁液充满清洁液充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面，勿留气泡或器皿露出清洁液面，勿留气泡或器皿露出清洁液面，勿留气泡或器皿露出清洁液面浸泡时间：一般为过夜，不应少于浸泡时间：一般为过夜，不应少于浸泡时间：一般为过夜，不应少于浸泡时间：一般为过夜，不应少于6 6 6 6 小时小时小时小时第20页，此课件共34页哦清洁液清洁液清洁液清洁液 :重铬酸钾（重铬酸钾（重铬酸钾（重铬酸钾（g g g g）浓硫酸（）浓硫酸（）浓硫酸（）浓硫酸（mlmlmlml）蒸馏水（）蒸馏水（）蒸馏水（）蒸馏水（mlmlmlml）常用三种：常用三种：常用三种：常用三种：强强强强清
14、洁液清洁液清洁液清洁液 631000200 631000200 631000200 631000200 次强次强次强次强清洗液清洗液清洗液清洗液 120 2001000 120 2001000 120 2001000 120 2001000 弱弱弱弱清洁液清洁液清洁液清洁液 100 1001000100 1001000100 1001000100 1001000配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分。配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分。配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分。配制时应注意安全，须穿戴耐
15、酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分。配制过程中可配制过程中可配制过程中可配制过程中可使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸使重铬酸钾溶于水中，然后慢慢加浓硫酸。并不停的用玻璃棒。并不停的用玻璃棒。并不停的用玻璃棒。并不停的用玻璃棒搅拌，使产生的热量挥发，配制溶液应选择玻璃制品、耐酸塑料制品。配成搅拌，使产生的热量挥发，配制溶液应选择玻璃制品、耐酸塑料制品。配成搅拌，使产生的热量挥发，配制溶液应选择玻璃制品、耐酸塑料制品。配成搅拌，使产生的热量挥发，配制溶液应选择玻璃制品、耐酸塑料制品。配成后清洁液一般为后清洁液一般为
16、后清洁液一般为后清洁液一般为棕红色。棕红色。棕红色。棕红色。第21页，此课件共34页哦以配置以配置10000ml10000ml常用清洁液为例介绍如下：常用清洁液为例介绍如下：先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水8000ml8000ml，称取，称取1000g1000g重铬酸钾，用重铬酸钾，用玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶解），待重铬酸钾液冷却玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶解），待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入后，缓慢加入1000ml1000ml浓硫酸，边加边用玻璃棒搅动，浓硫酸，边加边用玻璃棒搅动，以混合液温度不以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。过快上升
17、和不出现重铬酸钾结晶为度。配好后倒入洗液缸中备用。新配制的清洁液呈配好后倒入洗液缸中备用。新配制的清洁液呈棕红色。棕红色。当使用时间过久，当使用时间过久，清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃去（深埋地下），配制新的。清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃去（深埋地下），配制新的。第22页，此课件共34页哦酸缸酸缸配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品。般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品。第23页，此课件共34页哦冲洗：冲洗：冲洗：冲洗：在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗在使用后，刷洗及浸泡后都必
18、须用水充分冲洗在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗,使之尽量不留污染或清洁液的使之尽量不留污染或清洁液的使之尽量不留污染或清洁液的使之尽量不留污染或清洁液的残迹。残迹。残迹。残迹。需流水冲洗需流水冲洗需流水冲洗需流水冲洗十次十次十次十次以上，每次水须灌满及倒干净，然后用以上，每次水须灌满及倒干净，然后用以上，每次水须灌满及倒干净，然后用以上，每次水须灌满及倒干净，然后用蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水清洗清洗清洗清洗3-5 3-5 3-5 3-5 次，晾次，晾次，晾次，晾干（或烘干）备用干（或烘干）备用干（或烘干）备用干（或烘干）备用第24页，此课件共34页
19、哦2.2.2.2.胶塞的清洗胶塞的清洗胶塞的清洗胶塞的清洗新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗，新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗，新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗，新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗，再做常规处理再做常规处理再做常规处理再做常规处理新胶塞新胶塞新胶塞新胶塞置入水中浸泡后，用置入水中浸泡后，用置入水中浸泡后，用置入水中浸泡后，用2%NaOH 2%NaOH 2%NaOH 2%NaOH 或洗衣粉煮沸或洗衣粉煮沸或洗衣粉煮沸或洗衣粉煮沸10-20 10-20 10-20 10-20 分钟，分钟，分钟，分钟，自来水冲洗后，
20、蒸馏水冲洗自来水冲洗后，蒸馏水冲洗自来水冲洗后，蒸馏水冲洗自来水冲洗后，蒸馏水冲洗2-32-32-32-3次，晾干备用。次，晾干备用。次，晾干备用。次，晾干备用。第25页，此课件共34页哦3.3.3.3.塑料制品的清洗塑料制品的清洗塑料制品的清洗塑料制品的清洗塑料制品现多是采用无毒并已经特殊处理的包装，打开包装即塑料制品现多是采用无毒并已经特殊处理的包装，打开包装即塑料制品现多是采用无毒并已经特殊处理的包装，打开包装即塑料制品现多是采用无毒并已经特殊处理的包装，打开包装即可用，多为一次性物品。可用，多为一次性物品。可用，多为一次性物品。可用，多为一次性物品。必要时用必要时用必要时用必要时用2%
21、NaOH 2%NaOH 2%NaOH 2%NaOH 浸泡过夜，用自来水充分冲洗，再用浸泡过夜，用自来水充分冲洗，再用浸泡过夜，用自来水充分冲洗，再用浸泡过夜，用自来水充分冲洗，再用5%5%5%5%盐盐盐盐酸溶液浸泡酸溶液浸泡酸溶液浸泡酸溶液浸泡30 30 30 30 分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗干净，晾分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗干净，晾分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗干净，晾分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗干净，晾干备用。干备用。干备用。干备用。第26页，此课件共34页哦新购置物品玻璃器皿清洗步骤新购置物品玻璃器皿清洗步骤清水浸泡半小时以上清水浸泡半小时以上简单刷洗简单刷洗5%5%的稀盐酸浸
22、泡过夜的稀盐酸浸泡过夜自来自来水冲洗水冲洗在洗涤剂中反复刷洗在洗涤剂中反复刷洗自来水中充分冲洗自来水中充分冲洗凉干凉干（或（或5050烤干）烤干）浸酸过夜浸酸过夜流水振荡冲洗流水振荡冲洗2020遍遍漓水漓水去去离子水冲洗离子水冲洗3 34 4次次三蒸水冲洗两次（或浸泡一次）三蒸水冲洗两次（或浸泡一次）5050烤烤干，待包装。干，待包装。第27页，此课件共34页哦用过的玻璃器皿清洗步骤用过的玻璃器皿清洗步骤带毒玻璃器材用后应立即浸入消毒水中，非带毒的玻璃器材带毒玻璃器材用后应立即浸入消毒水中，非带毒的玻璃器材需浸入清水中浸泡需浸入清水中浸泡刷洗刷洗自来水冲洗自来水冲洗凉干（凉干（5050烤干）烤
23、干）浸酸过夜浸酸过夜流水振荡冲洗流水振荡冲洗2020遍遍漓水漓水去离子水冲洗去离子水冲洗3 34 4次次三蒸水冲洗两次（或浸泡一次）三蒸水冲洗两次（或浸泡一次）5050烤干，待包装。烤干，待包装。第28页，此课件共34页哦橡皮帽和橡皮塞的清洗橡皮帽和橡皮塞的清洗新购置的橡胶制品（大小胶塞、橡皮胶头）的洗涤方法新购置的橡胶制品（大小胶塞、橡皮胶头）的洗涤方法:2%NaOH:2%NaOH煮沸煮沸1515分钟分钟流水冲洗流水冲洗2 25%5%稀稀HClHCl煮沸煮沸1515分钟分钟流水冲洗流水冲洗去离子水煮沸去离子水煮沸2020分钟（或去离子水浸泡过夜）分钟（或去离子水浸泡过夜）去离子水冲洗一次去离
24、子水冲洗一次三蒸水煮沸三蒸水煮沸2020分钟分钟三蒸水冲洗一次三蒸水冲洗一次5050烤干备用烤干备用第29页，此课件共34页哦不锈钢除菌滤器的清洗不锈钢除菌滤器的清洗先用洗涤剂刷洗滤器先用洗涤剂刷洗滤器流水冲洗流水冲洗1515分钟分钟去离子水冲洗去离子水冲洗2 23 3次次（去离子水浸泡（去离子水浸泡2424小时）小时）三蒸水冲洗三蒸水冲洗2 23 3次或浸泡次或浸泡2424小时小时干燥备用。干燥备用。镊子、剪刀镊子、剪刀 纱布擦去脏污纱布擦去脏污自来水洗净自来水洗净酒精棉球擦试。酒精棉球擦试。金属滤网金属滤网 自来水冲洗自来水冲洗蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗三蒸水冲洗三蒸水冲洗。第30页，此课件共3
25、4页哦二、消毒二、消毒细胞培养的最大危险是发生培养物的细菌、真菌和病毒等细胞培养的最大危险是发生培养物的细菌、真菌和病毒等微生物的污染微生物的污染常见原因：常见原因：操作间或周围空间的不洁操作间或周围空间的不洁培养器皿和培养液消毒不彻底培养器皿和培养液消毒不彻底由于有关培养的每个环节的失误均能导致培养失败，故细胞培养的由于有关培养的每个环节的失误均能导致培养失败，故细胞培养的每个环节都应严格遵守操作常规，防止发生污染每个环节都应严格遵守操作常规，防止发生污染第31页，此课件共34页哦物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法紫外线：紫外线：紫外线：紫外线：用于空气，操作台表面和不
26、能使用其它法进行消毒的培养器皿。用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿。用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿。用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿。消毒时间：消毒时间：消毒时间：消毒时间：30min30min30min30min（至少）（至少）（至少）（至少）紫外杀菌功能除了紫外杀菌功能除了紫外杀菌功能除了紫外杀菌功能除了紫外紫外紫外紫外本身以外，还可以由产生的本身以外，还可以由产生的本身以外，还可以由产生的本身以外，还可以由产生的臭氧臭氧臭氧臭氧来完来完来完来完成。紫外灭菌以后，最好过一个小时再进去。成。紫外灭菌以后，最好过一个小时再进去。
27、成。紫外灭菌以后，最好过一个小时再进去。成。紫外灭菌以后，最好过一个小时再进去。第32页，此课件共34页哦湿热（高压蒸气灭菌法）：湿热（高压蒸气灭菌法）：湿热（高压蒸气灭菌法）：湿热（高压蒸气灭菌法）：121 121 121 121，20min20min20min20min适用于：适用于：适用于：适用于：培养用液、橡胶制品培养用液、橡胶制品培养用液、橡胶制品培养用液、橡胶制品 布类、玻璃制品、金属器械等布类、玻璃制品、金属器械等布类、玻璃制品、金属器械等布类、玻璃制品、金属器械等 第33页，此课件共34页哦干烤：干烤：干烤：干烤：160,2 160,2 160,2 160,2 小时小时小时小时
28、（适用于玻璃器皿等）（适用于玻璃器皿等）（适用于玻璃器皿等）（适用于玻璃器皿等）注意：消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引注意：消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引注意：消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引注意：消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引起玻璃炸裂，影响消毒效果。起玻璃炸裂，影响消毒效果。起玻璃炸裂，影响消毒效果。起玻璃炸裂，影响消毒效果。过滤：过滤：过滤：过滤：0.220.220.220.22m m m m（适用于不适合高温的液体，如蔗糖溶液，胰酶消（适用于不适合高温的液体，如蔗糖溶液，胰酶消（适用于不适合高温的液体，如蔗糖溶液，胰酶消（适用于不适合高温的液体，如蔗糖溶液，胰酶消化液）化液）化液）化液）第34页，此课件共34页哦