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1、血小板抗原抗体检测现在学习的是第1页，共32页 目录血小板相关疾病血小板抗原血小板抗体抗体检测及交叉配血现在学习的是第2页，共32页血小板抗原v血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体,并能并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子.v血小板相关抗原血小板相关抗原:红细胞血型抗原：红细胞血型抗原：ABOABO、LewisLewis和和P P系统抗原系统抗原等等，无无RHRH抗原抗原 白细胞抗原：白细胞抗原：HLAHLA抗原抗原v血小板特异性抗原（血小板特异性抗原（human platelet antigenh
2、uman platelet antigen，HPAHPA）现在学习的是第3页，共32页血小板抗原血型抗原：血型抗原：ABOABO、LewisLewis和和P P系统抗原系统抗原等等，无无RHRH抗原抗原v来源：血小板表面的A、B抗原来源主要有两个：大部分是血小板本身所固有（从巨核细胞分化而来）；小部分是从血浆吸附而来。如体外将O型血小板和A或B型血清温育，血小板就会带上A或B抗原。v不同个体间血小板膜ABH抗原量存在差异;v同一个体的每一个血小板抗原量差别非常大，由此可以解释有些人输入ABH不相容血液后,一部分输入的血小板迅速被破坏,而另外的血小板其生命力不受影响.现在学习的是第4页，共32页
3、血小板抗原v白细胞抗原：白细胞抗原：HLAHLA抗原抗原v血小板存具有HLA-类抗原类抗原，主要是HLA-A和HLA-B位点的抗原（少量表达的HLA-C抗原）。vHLA-类分子为血小板的固有蛋白，少量从血浆中吸附。血小板HLA抗原的免疫原性比白细胞弱。现在学习的是第5页，共32页血小板抗原v血小板特异性抗原（血小板特异性抗原（human platelet antigenhuman platelet antigen，HPAHPA）v主要位于人血小板膜的一大类抗原,称之为血小板特异性抗原v高频率抗原以“a”表示，低频率抗原以“b”表示v人血小板同种抗原（HPA）自1959年被发现以来，迄今已经检出
4、24个抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4，-5，-6,-15被血小板命名委员会（PNC）列入抗原系统，包含14个对偶抗原，而HPA-7-14，-16,-17因为对偶抗原未检出而未达到系统命名标准。现在学习的是第6页，共32页血小板抗原现在学习的是第7页，共32页血小板抗原现在学习的是第8页，共32页血小板抗原v24个抗原主要分布在糖蛋白GPb，GPa，GPb，GPa以及CD109上；vGPa（CD61）携带9种HPA抗原，分别为HPA-1，HPA-4，HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw，HPA-14bw，HPA-16bw vGPb（CD41）
5、是跨膜蛋白，细胞外116 kD的重链，通过二硫键与22 kD的轻链共价结合。GPb上携带 HPA-3和HPA-9bw；现在学习的是第9页，共32页血小板抗体抗 体分 类疾 病HLA/HPA 抗抗 体体其其 它它 抗抗 体体同同 种种抗抗 体体格格兰兰茨曼血小板功茨曼血小板功能不全病能不全病抗抗GPb/aPb/a抗体抗体同同 种种 异异体体 抗抗 体体新生儿同种异体免新生儿同种异体免疫性血小板减少症疫性血小板减少症HPA1b(78%),HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw,Anti-CD36血小板血小板输输注无效症注无效症HLA-I抗体抗体5080%172
6、5%(日本人日本人为为HPA-2b),HPA-15,anti-CD36极少数极少数为为ABO抗体抗体血小板血小板输输血后紫癜血后紫癜HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15,anti-CD36少数少数为为抗抗GPIa/IIa抗抗体体被被动动同种异体免疫同种异体免疫性血小板减少症性血小板减少症HPA-1a,HPA-5b移植相关同种异体移植相关同种异体免疫性血小板减少免疫性血小板减少症症HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自自 身身抗抗 体体自自发发性血小板减少性血小板减少症症多数位于多数位于GPb/ab/aGPIb/IX/VIb/IX/V，少数位，少数
7、位于于GPIV/V IV/V 和和 GPIa/IIaGPIa/IIa继发继发于母体自于母体自发发性性血小板减少症血小板减少症同上同上药药物依物依赖赖性抗性抗体体奎宁奎宁/奎尼丁抗体奎尼丁抗体所致疾病所致疾病抗原位于抗原位于GPb/ab/a和和GPIb/IXIb/IX肝素抗体所致疾病肝素抗体所致疾病抗原表位是抗原表位是PF4现在学习的是第10页，共32页抗体检测及交叉配血采取采取预防和治防和治疗措施措施避免流避免流产、出血等、出血等血小板相容性血小板相容性检测抗原定型抗原定型抗体抗体检测建立血小板供者建立血小板供者库筛选基因型相容的供者基因型相容的供者避免血小板抗体的避免血小板抗体的产生生诊断血
8、小板免疫性疾病断血小板免疫性疾病交叉配型交叉配型筛查血小板相容性供者血小板相容性供者减少血小板减少血小板输注无效注无效避免紫癜、出血和死亡避免紫癜、出血和死亡现在学习的是第11页，共32页血小板抗原定型u血清学定型即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原缺点：特异性抗体来源困难 -人血清中血小板抗体通常为多特异性 -单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗，无其它HPA单抗。u基因定型限制性片段长度多态性分析（RFLP）序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15 a b
9、a b a b a b a b a b阳性对照条带等位基因条带 1bb 2ab 3bb 4aa 5aa 15aa现在学习的是第12页，共32页血小板抗体检测 血清学vELISA法(酶联免疫试验)v血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA)v固相血小板免疫血清学试验(SPISA)v简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA)v流式细胞仪v改良抗原俘获(ELISA)v免疫荧光试验现在学习的是第13页，共32页简易致敏红细胞血小板血清学试验简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSASEPSA血小板血小板谱细胞胞（三人份（三人份O型混合血小板）型混合血小板）反反应板板（已包被血小板（已包被血小板单抗）
10、抗）血小板血小板单层阳性反阳性反应阴性反阴性反应患者血清患者血清/血血浆抗人抗人IgG指示指示红细胞胞（人（人IgG致敏致敏红细胞）胞）50g,5min50g,5min离心离心洗洗涤3 3次次50l/孔孔洗洗涤5 5次次水浴水浴30min30min阳性阳性阴性阴性50l/孔孔各各50l/孔孔200g,5min200g,5min离心离心200g,5min200g,5min离心离心现在学习的是第14页，共32页简易致敏红细胞血小板血清学试验简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSASEPSA直接测定法 血小板表面结合血小板抗体的测定间接测定法 血清内抗血小板抗体的测定交叉配血试验 选择配合的血小板
11、供体质量控制阴阳性对照现在学习的是第15页，共32页ELISAELISA法法(酶联免疫试验酶联免疫试验)单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：该法先制备羊抗鼠IgG包被的多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体的血小板共同孵育，再将孵育后的复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最后加入酶联羊抗人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。现在学习的是第16页，共32页血小板相关疾病 临床上由于血小板血型抗原引起的血小板减少症主要有5种：1.血小板输注无效（PTR）2.输血后紫癜（PTP）3.新生儿同种免疫血小板减少症（FMAIT/NAIT）4.被动免疫血小板减少症（PAT）5.
12、移植相关的同种免疫血小板减少症（TAT)现在学习的是第17页，共32页血小板相关疾病血小板免疫性疾病血小板免疫性疾病v血小板输注无效症v新生儿血小板减少症v输血后紫癜v自身免疫性血小板减少症v药物引起的血小板减少症v移植相关的血小板减少症血小板抗原血小板抗原v 同种异体抗原 HLA-I,HPA,ABHv 同种抗原 GPb/a,CD36v 自身抗原 GPb/a,GPb/v 药物依赖性抗原 肝素、奎宁等v 非特异性抗原临床病症床病症v 淤点v 淤斑v 流产v（颅内）出血 v 死亡现在学习的是第18页，共32页血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）Platelet transfusion refr
13、actoriness,PTR:Platelet transfusion refractoriness,PTR:患者接受充足治疗剂量（患者接受充足治疗剂量（2.5x102.5x101111个个/次）次）的血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提高，临床出血表现未见明显改的血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提高，临床出血表现未见明显改善，处于血小板治疗不应状态。一般临床上认为善，处于血小板治疗不应状态。一般临床上认为至少有至少有2 2次及以上次及以上输注血小板效果输注血小板效果不佳才能做出不佳才能做出PTRPTR诊断。诊断。1.若输注后1小时 CCI 7500/L 12小时 CCI 6
14、000/L 24小时 CCI 4500/L 连续3次，可判断为血小板无效输注2.血小板恢复（回收率）百分率（PR%）若输注血小板24小时后，PR%20%，可判断为血小板无效输注由HLA抗体引起PTR约占80%，其次为HPA或ABO抗体。现由于临床广泛输注去白细胞的成分血治疗血液病，发病率已经大为下降现在学习的是第19页，共32页血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）非免疫学原因(67.3%)发热脾功能亢进感染药物作用DIC血小板的质量问题免疫学原因(17.5%)HLA抗体HPA抗体ABO血型不合血小板自身抗体药物预防1.白细胞过滤2.辐照3.HLA和HPA配型输注现在学习的是第20页，共32
15、页血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）Platelet transfusion refractoriness,PTR:Platelet transfusion refractoriness,PTR:患者接受充足治疗剂量（患者接受充足治疗剂量（2.5x10112.5x1011个个/次）的次）的血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提高，临床出血表现未见明显改善，血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提高，临床出血表现未见明显改善，处于血小板治疗不应状态。一般临床上认为处于血小板治疗不应状态。一般临床上认为至少有至少有2 2次及以上次及以上输注血小板效果不佳输注血小板效果不佳才能做出才
16、能做出PTRPTR诊断。诊断。1.若输注后1小时 CCI 7500/L 12小时 CCI 6000/L 24小时 CCI 4500/L 连续3次，可判断为血小板无效输注2.血小板恢复（回收率）百分率（PR%）若输注血小板24小时后，PR%20%，可判断为血小板无效输注由HLA抗体引起PTR约占80%，其次为HPA或ABO抗体。现由于临床广泛输注去白细胞的成分血治疗血液病，发病率已经大为下降现在学习的是第21页，共32页血小板相关疾病-输血后紫癜输血后紫癜v输血后血小板减少性紫癜(post-transfusion thrombocytopenic purpura，PTTP)，又称“输血后紫癜”,
17、Post-transfusion purpura,PTP:由于血小板输注后发生同种免疫反应所致，一般发病率低。v患者被输入不相容的血小板/全血或多次妊娠而产生血小板抗体，破坏输入的和自身血小板而导致急性和暂时性血小板减少。患者多见于（95%)有多次妊娠或输血史的老年女性。现在学习的是第22页，共32页血小板相关疾病-输血后紫癜输血后紫癜vHPA-1a是引起该病的主要抗原。我国绝大部分人为HPA-1a抗原阳性。v实验室检查：血小板计数降低、骨髓巨核细胞增生活跃、血清学检查血小板抗体存在但效价和病情无关。v本病输血小板无效，甚至有加重病情的危险，肾上腺皮质激素不能缩短病程，但是，有可能改善出血症状
18、。v主要治疗措施为血浆置换或换血，换血浆优于换全血。在输血后血小板显著减少和发生严重出血症状时，应立刻做血浆置换，一次交换65%85%的血浆量，平均在15天后出血症状减退，血小板数目上升。v尽可能避免或减少输注血小板及含血小板的血液制品。现在学习的是第23页，共32页血小板相关疾病-新生儿同种免疫血小板减少症新生儿同种免疫血小板减少症(FMAIT/NAIT)(FMAIT/NAIT)胎儿血小板胎儿血小板 怀孕或生产时进入母体循环怀孕或生产时进入母体循环 胎儿血小板刺激母体产生抗体胎儿血小板刺激母体产生抗体 母亲母亲IgGIgG抗体通过胎盘进入胎儿体内使胎儿血小板抗体通过胎盘进入胎儿体内使胎儿血小
19、板致敏致敏 血小板破坏增加血小板破坏增加 发生发生FAITFAIT现在学习的是第24页，共32页血小板相关疾病-新生儿同种免疫血小板减少新生儿同种免疫血小板减少症症(FMAIT/NAIT)(FMAIT/NAIT)v第一胎即可发病；v病死率约13%；v治疗：输入相合的血小板以提高患儿的血小板数，如找不到相合的血小板，可以输注经洗涤和辐射的母亲血小板，也可给患儿做放血治疗；v治疗前交叉配血：以母亲血清与供者血小板进行交叉配合试验；v预防：母亲在孕期可进行血浆置换现在学习的是第25页，共32页被动免疫血小板减少症及移植相关的同种免疫被动免疫血小板减少症及移植相关的同种免疫血小板减少症血小板减少症 P
20、assive alloimmune thrombocytopenia,PAT:患者输入含有血小板特异性抗体的血浆，在数个小时之内出现血小板减少症，约一周后缓解。v一旦发现献血员血浆、血清中含有血小板特异性抗体应立即停止献血，这类献血员多为有妊娠史。vTransplantation-associated alloimmune thrombocytopenia,TAT:器官接受者的淋巴细胞产生抗外来移植物（血小板）的特异性抗体；或供体器官中残留的淋巴细胞产生抗宿主血小板的抗体现在学习的是第26页，共32页特发性血小板减少性紫癜（特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic Idiopathic t
21、hrombocytopenia purpura,I T Pthrombocytopenia purpura,I T P）ITPITP发病机制一、抗血小板抗体 约75%ITP患者可测到血小板相关自身抗体（PAIg），后者多为IgG、IgA也可是IgM。抗体通过Fab片段与血小板膜糖蛋白（Gpb/a等）结合。带有抗体的血小板接触到单核-巨噬细胞表面的FC受体，易被吞噬破坏。另外，抗血小板抗体对巨核细胞分化也有抑制作用。二、血小板生成时间缩短v ITP血小板生存可缩短至23天或更短，ITP患者血小板易在脾脏被扣留。脾脏可产生抗血小板抗体，脾内的巨噬细胞参与破坏血小板过程，切脾对相当部分的患者有效。现
22、在学习的是第27页，共32页特发性血小板减少性紫癜（特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic Idiopathic thrombocytopenia purpura,I T Pthrombocytopenia purpura,I T P）ITPITPv急性型：儿童多见，初起有上感，主要为病毒细菌所致。可有寒热，全身皮肤粘膜出血(瘢点，紫癜或血肿)、内脏出血。1%患者颅内出血，危及生命，但大多数呈自限性，一般46周可自行缓解。v慢性型：主要见于40岁以下女青年，症状多在偶然中发现，也有皮肤粘膜的出血，内脏出血较少见，月经过多者可引起贫血。现在学习的是第28页，共32页特发性血小板减少性紫癜（
23、特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic Idiopathic thrombocytopenia purpura,I T Pthrombocytopenia purpura,I T P）ITPITP现在学习的是第29页，共32页特发性血小板减少性紫癜（特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic Idiopathic thrombocytopenia purpura,I T Pthrombocytopenia purpura,I T P）ITPITPv检测LIFECODES PAKAUTO试剂盒现在学习的是第30页，共32页特发性血小板减少性紫癜（特发性血小板减少性紫癜（Idiopathi
24、c Idiopathic thrombocytopenia purpura,I T Pthrombocytopenia purpura,I T P）ITPITP一、糖皮质激素二、脾切除三、免疫抑制剂四、高剂量免疫球蛋白和血浆置换现在学习的是第31页，共32页血栓性血栓性血小板减少性紫癜血小板减少性紫癜(Thrombotic(Thrombotic Thrombocytopenic PurpuraThrombocytopenic Purpura，TTP)TTP)vTTP是一种严重的弥散性血栓性微血管病，以微血管病性溶血性贫血、血小板聚集消耗性减少，以及微血栓形成造成器官损害（如肾脏、中枢神经系统等）为特征。之前TTP预后差，病程短，不及时治疗病死率8090%，随着血浆置换的临床应用，预后大大改观，病死率降至1020%。v临床的五大特征，即血小板减少性紫癜、微血管病性溶血、中枢神经系统症状、发热以及肾脏损害，并称之为TTP五联征，仅有前三大特征的称为三联征。多数TTP患者起病急骤，病情凶险，如不治疗死亡率高达90%。现在学习的是第32页，共32页