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1、选修微生物的修微生物的实验室培养室培养课件件现在学习的是第1页，共65页微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通常通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不不能进行光合作用能进行光合作用.原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基础知识微生物基础知识现在学习的是第2页，共65页细菌的外形与大小细菌的外形与大小细菌：细
2、菌：单细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞微小而透明微小而透明，通常用适当染料，通常用适当染料染染色色后显微镜观察后显微镜观察图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌现在学习的是第3页，共65页细菌细胞由外向里依次有鞭毛鞭毛、菌菌（纤）毛纤）毛纤）毛纤）毛、荚膜荚膜、细胞壁细胞壁、细胞膜、细胞膜、细胞质细胞质，细胞质中细胞质中细胞质中细胞质中又有液泡、储存性又有液泡、储存性又有液泡、储存性又有液泡、储存性颗粒、核质等颗粒、核质等颗粒、核质等颗粒、核质等。细菌的构造细菌的构造图图图图1-3 1-3 细菌的结构细菌
3、的结构细菌的结构细菌的结构现在学习的是第4页，共65页*细胞壁细胞壁n n结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性n细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？n 固定细胞外形；固定细胞外形；固定细胞外形；固定细胞外形；w w 保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；w w 阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞；使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素现在学习的是第5页，共65页 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做有些细菌在一定的条件
4、下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌以萌发，形成一个细菌.现在学习的是第6页，共65页菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具
5、有一定形态结就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。现在学习的是第7页，共65页菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 现在学习的是第8页，共65页放线菌放线菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）现在学习的是第9页，共65页链霉素、土霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生
6、的由放线菌产生的 应用应用:现在学习的是第10页，共65页病毒的结构病毒的结构现在学习的是第11页，共65页病毒病毒 现在学习的是第12页，共65页SARS病毒、病毒、禽流感病毒禽流感病毒现在学习的是第13页，共65页朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）现在学习的是第14页，共65页2、病毒的增殖：、病毒的增殖：现在学习的是第15页，共65页真菌真菌现在学习的是第16页，共65页如图是酵母菌电子显微镜如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构下的形态结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉现在学习的是第17页，共65页生殖生殖直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖现在学习的
7、是第18页，共65页细菌的营养类型细菌的营养类型 n根据细菌所利用的能源和碳源的不同，根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。n自养菌（自养菌（autotrophautotroph）n异养菌（异养菌（heterotrophheterotroph）n腐生菌腐生菌n寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌现在学习的是第19页，共65页现在学习的是第20页，共65页课题 1 微生物的实验室培养培养基1概念营养物质人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。现在学习的是第21页，共65页2营养构成碳源特殊营养物质(1)一般都含有水、_、氮源、无机
8、盐。(2)还要满足微生物生长对 pH、_以及 O2的要求。3分类(1)液体培养基：配制成的液体状态的基质。(2)固体培养基：配制成的固体状态的基质，在液体培养基中加入凝固剂，如琼脂，制成琼脂固体培养基。现在学习的是第22页，共65页无菌技术1消毒温和巴氏(1)特点：使用较为_的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。(2)常用方法：煮沸消毒法、_消毒法、化学药剂消毒法。2灭菌强烈灼烧(1)特点：使用_的理化因素杀死物体内外所有的微生物。(2)常用方法：_灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。现在学习的是第23页，共65页微生物培养的基本技术1配制培养基称量混合溶化调 pH
9、分装包扎2灭菌加水加培养基密封排冷气维持压力取出倒平板(或搁置斜面)现在学习的是第24页，共65页3接种稀释涂布平板(1)接种过程：洗净双手点燃酒精灯接种贴标签。(2)接种工具：包括_、涂布器。接种环(3)接种方法：平板划线法、_法。(4)注意事项：整个操作过程要在_旁完成。4培养酒精灯火焰接种后的培养皿放入恒温箱内培养。现在学习的是第25页，共65页菌种保藏1临时保藏固体斜面4(1)操作：采用_培养基，菌落长成后，放入_冰箱中保藏，以后每 36 个月，转移一次新的培养基。(2)缺点：保存时间不长，菌种易被污染或产生变异。2长期保存法甘油管藏采用_法，放入20 的冷冻箱中保存。现在学习的是第2
10、6页，共65页营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质合成生物体的细胞物质和一些代谢产物；有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3 等。有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐。有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等微生物的营养要素1微生物的营养物质及功能现在学习的是第27页，共65页 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：一、课题目标：掌握掌握培养基的制备培养基的制
11、备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板平板划线法划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：现在学习的是第28页，共65页一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培养固体培养基基和和
12、液体培养基液体培养基。其中固体培养基用于菌种分。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。离、鉴定菌落等。（2 2）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别培鉴别培养基养基。（3 3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成培合成培养基养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途现在学习的是第29页，共65页 2.2.不同的微生物往往需要采用不同的不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方培养基配方(参考教材附录内容参考教材附录内容)3.3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳碳源源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等
13、等营养物质，另外营养物质，另外还需要满足微生物生长对还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物特殊营养物质质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自身即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等等的要求。的要求。现在学习的是第30页，共65页选择培养基选择培养基加入加入青霉素青霉素的培养基的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入加入高浓度食盐高浓度食盐的培养基的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加不加氮源氮源的无氮培养基的无氮培
14、养基:分离固氮菌分离固氮菌不加不加含碳含碳有机物的无碳培养基有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入加入青霉素青霉素等抗生素的培养基等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基核苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞现在学习的是第31页，共65页 根据细胞生存所需物质的种类和数根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助素、碳水化合物、
15、无机盐和其它一些辅助物质。物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相对标准化生产，组分和含量相对固定固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满足缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。体外细胞生长需要。合成培养基合成培养基:现在学习的是第32页，共65页 天然培养基有血清、血浆、和组织天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分复杂，影响对某些成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析实验产物的提取和实验结果的分析;易发易发生支原体污
16、染生支原体污染;天然培养基：天然培养基：现在学习的是第33页，共65页血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子；激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。析球蛋白、胶原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。现在学习的是第34页，共65页液体培养基：液体培养基：表面生
17、长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长现在学习的是第35页，共65页固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔现在学习的是第36页，共65页半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动是否运动)现在学习的是第37页，共65页4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌液体培养基：增菌固体培养基：纯化，增菌固体培养基：纯化，增菌半固体培养基：动力检测，保种半固体培养基：动力检测，保种现在学习的是第38页，共65页（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所在培养微生物的操作中，
18、所有防止杂菌污染的方法。有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学无论是随后将要学到的到的倒平板倒平板、平板划线平板划线操作，还是操作，还是平板稀释平板稀释涂布法涂布法，其操作中的每一步都需要做到，其操作中的每一步都需要做到“无菌无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。无菌操作，才可能成功地培养微生物。现在学习的是第39页，共65页（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为病微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒（High-level Disinfe
19、ctionHigh-level Disinfection）、）、中程度消毒中程度消毒（Intermediate-level DisinfectionIntermediate-level Disinfection）、）、低低程度消毒程度消毒（Low-level DisinfectionLow-level Disinfection）三）三种方式。种方式。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 现在学习的是第40页，共65页（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微生微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌物，包括所有细菌的繁
20、殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。中最普通也是最重要的技术。现在学习的是第41页，共65页1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒紫外线消毒(1)消毒的方法
21、：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法现在学习的是第42页，共65页1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-160-170 170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.(2)灭菌的方法：灭菌的方法：现在学习的是第43页，共65页 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养
22、基的营养成分不被破坏。可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了防止。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。是专为
23、防止空气中微生物的污染而设计的。现在学习的是第44页，共65页分类定义方法灭菌法杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微波、等离子体化学法：醛类、烷化剂高效消毒法杀灭一切致病微生物紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等中效消毒法杀灭除芽孢外的致病微生物超声波、碘类、醇类、酚类低效消毒法杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子无菌技术无菌技术现在学习的是第45页，共65页3.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6
24、、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存现在学习的是第46页，共65页1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身答：无菌技术还能有
25、效避免操作者自身被微生物感染。被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。现在学习的是第47页，共65页三、实验操作三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）现在学习的是第48页，共65页1 1计算计算、称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养基沾分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶染
26、。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤现在学习的是第49页，共65页 8 8灭菌灭菌:将将5050mlml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将将培养培养皿皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2 2h h。9 9倒平板倒平板:待培
27、养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）倒平板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平板，无后观察平板，无杂菌污染才可用来接种杂菌污染才可用来接种.10 10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培养的温室中培养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。现在学习的是第50页，共65页倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术现在学习的是第51页，共65页 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计
28、培养基的温才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。现在学习的是第52页，共65页3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖在倒平板的过程中，如果不小心将培
29、养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。养基上滋生，因此最好不要用这
30、个平板培养微生物。现在学习的是第53页，共65页2 2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就这就是菌落是菌落.微生物的接种技术微生物的接种技术现在学习的是第54页，共65页现在学习的是第55页，共65页现在学习
31、的是第56页，共65页 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的
32、末端，从而通过划线次数的增加，使每次划次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。现在学习的是第57页，共65页 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作
33、时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。到由单个细菌繁殖而来的菌落。现在学习的是第58页，共65页现在学习的是第59页，共65页现在学习的是第60页，共65页 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要行。结合平板划线
34、与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第求，想一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。精灯火焰周围等等。现在学习的是第61页，共65页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养现在学习的是第62页，共65页微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养现在学习的是第63页，共65页菌种的保存菌
35、种的保存菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：接种、临时保藏：接种到固体斜面培养基，到固体斜面培养基，菌落长成后置于菌落长成后置于44冰冰箱保存。箱保存。2 2、长期保存：甘、长期保存：甘油冷冻管藏法油冷冻管藏法现在学习的是第64页，共65页四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养
36、基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。科学态度与习惯。现在学习的是第65页，共65页