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1、试验流程第1页/共44页第2页/共44页课堂提问每人2-3个问题；权重：30%总结报告PPT，5人一组，10分钟；权重：30%实验报告权重：40%要求：标准的论文格式：中、英文标题和摘要；前言；材料与方法；结果；讨论；参考文献。考核形式PPT：照片、视频展示个性，潮！第3页/共44页Day 0:准备实验材料Day 1:GFP表达质粒的提取；Top 10感受态细胞的制备；GFP表达质粒转化Top 10。Day 2:GFP表达菌株扩大培养；GFP的诱导表达。时间安排第4页/共44页Day 3:表达菌株的收集、破碎；硫酸铵沉淀所用浓度的确定；硫酸铵沉淀GFP；疏水层析。Day 4:离子交换层析；透析
2、；凝胶过滤层析。Day 5:SDS-PAGE；染色；脱色，观察结果。记得带照相机！第5页/共44页鸣谢：生命学院生物科学104班邹兵 周嘉 赵琅李运彰 汪源无菌操作第6页/共44页第7页/共44页第8页/共44页第9页/共44页第10页/共44页第11页/共44页原核：真核：Yeast Insect mammals蛋白质表达第12页/共44页第13页/共44页第14页/共44页Vector:pET series,pGEX series,gateway series,pMAL,pTWIN I,pETDuet,et.al.原核表达系统第15页/共44页第16页/共44页第17页/共44页第18页/
3、共44页第19页/共44页BL21(DE3),BL21(DE3,pLysS),Origami,Rosetta,Rosetta-gamiTop10,HB101,C41/C43 host 第20页/共44页能否用BL21(DE3)表达pGLO？能否用Top10表达pET32a？思考：第21页/共44页，加入诱导剂；，收获菌体；诱导剂用量 IPTG:0.2mM;0.5mM;1mM诱导温度 20；25/28；37 Culture conditions第22页/共44页第23页/共44页第24页/共44页如何留样能在一张SDS-PAGE胶图中(10-12 wells)体现诱导的效果、(NH4)2SO4粗分离效果、疏水层析纯化效果、离子交换层析纯化效果、凝胶过滤层析纯化效果？留样set control第25页/共44页第26页/共44页HIC第27页/共44页第28页/共44页第29页/共44页第30页/共44页第31页/共44页第32页/共44页第33页/共44页IEC第34页/共44页第35页/共44页第36页/共44页第37页/共44页GFC第38页/共44页第39页/共44页第40页/共44页样品体积对分辨率的影响第41页/共44页第42页/共44页第43页/共44页感谢您的观看！第44页/共44页