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1、动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体技术核移植动物细胞工程常用技术胚胎移植技术第1页/共37页动物组织细胞间隙中含有一定量的蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。传代培养动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶（分解弹性纤维）10代细胞原代培养50代细胞细胞株无限传代细胞系遗传物质未改变遗传物质改变一、动物细胞培养讨论:细胞株与细胞系的特点有何不同?第2页/共37页1、动物细胞的培养过程 幼龄动物幼龄动物取动物器官取动物器官和组织和组织剪碎组织剪碎组织胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理细胞培细胞培养单个细胞单个细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础是其
2、他动物细胞工程技术的基础(1)请据图简述动物细胞的培养过程(2)思考:动物细胞培养有哪些方面 的应用?第3页/共37页2、有关概念原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。第4页/共37页2、有关概念细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到4050代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，
3、这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。第5页/共37页3、动物细胞培养 的条件(1)无菌无毒的环境(2)营养(3)温度和pH(4)气体环境 比较：植物的组织培养的条件第6页/共37页4.动物细胞培养的应用()大规模生产有重要价值的蛋白质生物制品。()解决为大面积烧伤病人移植皮肤问题。（利用贴壁生长和接触抑制原理）()检测有关物质毒性。()培养正常或病变细胞，用于科研。如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体第7页/共37页植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培养原理原理细胞的
4、全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 动物血清动物血清培养结果培养结果植物体植物体细胞株、细胞系细胞株、细胞系培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞获得细胞或细胞分泌蛋白分泌蛋白第8页/共37页思考：2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主
5、要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体第9页/共37页多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程1、谁是“多莉”的母亲？2、“多莉羊”是雄还是雌？3、是否符合孟德尔遗传？问问题题卵细胞C母绵羊子宫母绵羊母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵细胞细胞拆合技术妊娠第10页/共37页第11页/共37页第12页/共37页第13页/共37页细胞A细胞B杂种细胞灭
6、活的病毒物理法化学法仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒 一、动物细胞融合 2、过程：1、概念：“2个或多个动物细胞”“1”、“杂交单核细胞”第14页/共37页用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核病毒颗粒细胞核思考讨论：思考讨论：为什么细胞融合过程为什么细胞融合过程中使用的病毒需要中使用的病毒需要灭活？灭活？第15页/共37页二、单克隆抗体二、单克隆抗体1、什么是抗体？其本质是什么？2、传统的抗体生产方法及缺陷是什么？抗体是从何来的？B淋巴细胞产生抗体。3、B淋巴细胞有什么特点？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。第16页/共37页B淋巴细胞与抗体B淋巴细
7、胞受抗原刺激后，可以产生抗体。动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。第17页/共37页单克隆抗体 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。特点：特异性强、灵敏度高 第18页/共37页如何大量生产单克隆抗体？利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞第19页/共37页 单克隆抗体制备过程 注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细
8、胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体第20页/共37页思考：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体第21页/共37页（1 1）为为什什么么选选用用小小鼠鼠骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞与与B B淋淋巴巴细细胞融合胞融合?（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，增殖，B B淋巴细胞能够产
9、生抗体，细胞的同源性淋巴细胞能够产生抗体，细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）越近，融合形成的杂种细胞越易成活。）（2 2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗）骨髓瘤细胞是癌细胞吗?（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触（有无限增殖能力（失去凋亡机制，失去接触抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力抑制等）的细胞是肿瘤细胞，而具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不的肿瘤细胞，称为癌细胞，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。）能等于癌细胞。）第22页/共37页（3 3）整个制备过程为何要经过两次筛选）整个制备过程为何要经过两次筛选?（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），（第一次筛选得到杂交
10、瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由再筛选出能产生特异性抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆单克隆确确有有单个细胞单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不克隆的含义，只不过克隆的不是是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。）。）第23页/
11、共37页单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。应用主要有：1、临床诊断2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。生物导弹：单克隆抗体作为载体分子，同抗癌药物相结合，将他们运载到肿瘤部位，杀死癌细胞，这种抗体药物结合物称之为生物导弹。它能定向杀灭癌细胞，避免或减少对正
12、常细胞的伤害，大大减轻了抗癌药物的副作用。第24页/共37页第25页/共37页第26页/共37页第27页/共37页第28页/共37页1.动物细胞工程技术的基础是：（）A动物细胞融合B胚胎移植C动物细胞培养D核移植教学目标巩固教学目标巩固第29页/共37页在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同教学目标巩固教学目标巩固第30页/共37页.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂
13、交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞A BC D C教学目标巩固教学目标巩固第31页/共37页第32页/共37页小结小结一种诱导细胞融合的新方法-灭活的病毒一种新细胞-杂交瘤细胞一种优势-单克隆抗体特异性强、灵敏度高第33页/共37页动物细胞工程动物细胞工程第34页/共37页第35页/共37页 一、动物细胞融合 1、过程：细胞A细胞B杂种细胞物理法、化学法灭活的病毒仙台病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒2、用途：制备单克隆抗体小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞杂交瘤细胞筛选（特定的选择性培养基）增殖单克隆抗体体外培养注射到小鼠腹腔第36页/共37页感谢您的观看！第37页/共37页