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1、真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联考点一基因工程考点一基因工程1.(2016全全国国课课标标卷卷，40)某某一一质质粒粒载载体体如如图图所所示示，外外源源DNA插插入入到到Ampr或或Tetr中中会会导导致致相相应应的的基基因因失失活活(Ampr表表示示氨氨苄苄青青霉霉素素抗抗性性基基因因，Tetr表表示示四四环环素素抗抗性性基基因因)。有有人人将将此此质质粒粒载载体体用用BamH酶酶切切后后，与与用用BamH酶酶切切获获得得的的目目的的基基因因混混合合，加加入入DNA连连接接酶酶进进行行连连接接反反应应，用用得得到到的的混混合合物物直直接接转转化化大大肠肠杆杆菌
2、菌，结结果果大大肠肠杆杆菌菌有有的的未未被被转转化化，有有的的被被转转化化。被被转转化化的的大大肠肠杆杆菌菌有有三三种种，分分别别是是含含有有环环状状目目的的基基因因、含含有有质质粒粒载载体体、含含有有插插入入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：第1页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(1)质质粒粒载载体体作作为为基基因因工工程程的的工工具具，应应具具备备的的基基本本条条件件有有_(答答出出两两点点即即可可)，而而作作为为基基因因表表达达载载体体，除除满满足足上上述述基基本条件外，还需具有启动子和终
3、止子。本条件外，还需具有启动子和终止子。(2)如如果果用用含含有有氨氨苄苄青青霉霉素素的的培培养养基基进进行行筛筛选选，在在上上述述四四种种大大肠肠杆杆菌菌细细胞胞中中，未未被被转转化化的的和和仅仅含含环环状状目目的的基基因因的的细细胞胞是是不不能能区区分分的的，其其原原因因是是_；并并且且_和和 _的的 细细 胞胞 也也 是是 不不 能能 区区 分分 的的，其其 原原 因因 是是_。在在上上述述筛筛选选的的基基础础上上，若若要要筛筛选选含含有有插插入入了了目目的的基基因因的的重重组组质质粒粒的的大大肠肠杆杆菌菌的的单单菌菌落落，还还需需使用含有使用含有_的固体培养基。的固体培养基。第2页/共
4、61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(3)基基因因工工程程中中，某某些些噬噬菌菌体体经经改改造造后后可可以以作作为为载载体体，其其DNA复复制所需的原料来自于制所需的原料来自于_。答案答案(1)能自我复制、具有标记基因能自我复制、具有标记基因(2)二二者者均均不不含含有有氨氨芐芐青青霉霉素素抗抗性性基基因因，在在该该培培养养基基上上均均不不生生长长含含有有质质粒粒载载体体含含有有插插入入了了目目的的基基因因的的重重组组质质粒粒(或或答答含含有有重重组组质质粒粒)二二者者均均含含有有氨氨芐芐青青霉霉素素抗抗性性基基因因，在在该该培培养养基基上上均均能能生生长四环
5、素长四环素(3)受体细胞受体细胞第3页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联2.(2015课课标标卷卷，40)已已知知生生物物体体内内有有一一种种蛋蛋白白质质(P)，该该蛋蛋白白质质是是一一种种转转运运蛋蛋白白，由由305个个氨氨基基酸酸组组成成。如如果果将将P分分子子中中158位位的的丝丝氨氨酸酸变变成成亮亮氨氨酸酸，240位位的的谷谷氨氨酰酰胺胺变变成成苯苯丙丙氨氨酸酸，改改变变后后的的蛋蛋白白质质(P1)不不但但保保留留P的的功功能能，而而且且具具有有了了酶酶的的催催化化活活性性。回答下列问题：回答下列问题：(1)从从上上述述资资料料可可知知，若若要要
6、改改变变蛋蛋白白质质的的功功能能，可可以以考考虑虑对对蛋蛋白白质的质的_进行改造。进行改造。(2)以以P基基因因序序列列为为基基础础，获获得得P1基基因因的的途途径径有有修修饰饰_基基因因或或合合成成_基基因因，所所获获得得的的基基因因表表达达时时是是遵遵循循中中心心法法则则的的，中中心心法法则则的的全全部部内内容容包包括括_的的复复制制，以以及及遗遗传传信信息息在在不不同同分分子子之之间间的的流流动动，即即：_。第4页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(3)蛋蛋白白质质工工程程也也被被称称为为第第二二代代基基因因工工程程，其其基基本本途途径径是是从从预
7、预期期蛋蛋白白质质功功能能出出发发，通通过过_和和_，进进而而确确定定相相对对应应的的脱脱氧氧核核苷苷酸酸序序列列，据据此此获获得得基基因因，再再经经表表达达、纯纯化化获获得得蛋蛋白白质质，之之后还需要对蛋白质的生物后还需要对蛋白质的生物_进行鉴定。进行鉴定。解解析析对对蛋蛋白白质质的的氨氨基基酸酸序序列列(或或结结构构)进进行行改改造造，可可达达到到改改变变蛋蛋白白质质的的功功能能的的目目的的。(2)以以P基基因因序序列列为为基基础础，获获得得P1基基因因，可可以以对对P基基因因进进行行修修饰饰改改造造，也也可可以以用用人人工工方方法法合合成成P1基基因因；中中心心法法则则的的全全部部内内容
8、容包包括括，即即：DNA与与RNA的的复复制制、DNARNA、RNADNA、RNA蛋蛋白白质质(或或转转录录、逆逆转转录录、翻翻译译)。(3)蛋蛋白白质质工工程程的的基基本本途途径径是是从从预预期期蛋蛋白白质质功功能能出出发发，通通过过设设计计蛋蛋白白质质结结构构和和推推测测氨氨基基酸酸序序列列，推推测测相相应应的的核核苷苷酸酸序序列列，并并获取基因。经表获取基因。经表达达的蛋白质，要对其进行生物功能鉴定。的蛋白质，要对其进行生物功能鉴定。第5页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联答案答案(1)氨基酸序列氨基酸序列(或结构或结构)(其他答案合理也给分其他答
9、案合理也给分)(2)P P1 DNA和和 RNA(或或 遗遗 传传 物物 质质)DNARNA、RNADNA、RNA蛋白质蛋白质(或转录、逆转录、翻译或转录、逆转录、翻译)(3)设计蛋白质的结构推测氨基酸序列功能设计蛋白质的结构推测氨基酸序列功能第6页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联3.(2014全全国国课课标标，40)植植物物甲甲具具有有极极强强的的耐耐旱旱性性,其其耐耐旱旱性性与与某某个个基基因因有有关关。若若从从该该植植物物中中获获得得该该耐耐旱旱基基因因，并并将将其其转转移移到到耐耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题：旱性低的
10、植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题：(1)理理论论上上，基基因因组组文文库库含含有有生生物物的的_基基因因；而而cDNA文文库中含有生物的库中含有生物的_基因。基因。(2)若若要要从从植植物物甲甲中中获获得得耐耐旱旱基基因因，可可首首先先建建立立该该植植物物的的基基因因组组文库，再从中文库，再从中_出所需的耐旱基因。出所需的耐旱基因。(3)将将耐耐旱旱基基因因导导入入农农杆杆菌菌，并并通通过过农农杆杆菌菌转转化化法法将将其其导导入入植植物物_的的体体细细胞胞中中，经经过过一一系系列列的的过过程程得得到到再再生生植植株株。要要确确认认该该耐耐旱旱基基因因是是否否在在再再生生植植株株中
11、中正正确确表表达达，应应检检测测此此再再生生植植株株中中该该基基因因的的_，如如果果检检测测结结果果呈呈阳阳性性，再再在在田田间间试试验验中中检测植株的检测植株的_是否得到提高。是否得到提高。第7页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(4)假假如如用用得得到到的的二二倍倍体体转转基基因因耐耐旱旱植植株株自自交交，子子代代中中耐耐旱旱与与不不耐耐旱旱植植株株的的数数量量比比为为31时时，则则可可推推测测该该耐耐旱旱基基因因整整合合到到了了_(填填“同同源源染染色色体体的的一一条条上上”或或“同同源源染染色色体体的的两条上两条上”)。答案答案(1)全部部分全部
12、部分(2)筛选筛选(3)乙表达产物乙表达产物耐旱性耐旱性(4)同源染色体的一条上同源染色体的一条上第8页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联从从近近五五年年高高考考统统计计看看，课课标标卷卷对对基基因因工工程程考考查查明明显显多多于于其其他他工工程程技技术术，考考查查角角度度侧侧重重于于基基因因工工程程工工具具及及特特点点，基基因因工工程程操操作作程程序序尤其是基因表达载体的构建与目的基因检测、鉴定。尤其是基因表达载体的构建与目的基因检测、鉴定。第9页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联提分必记的关键点提分必记的关键点
13、1.基因工程常考的基因工程常考的3种基本工具种基本工具(1)限限制制性性内内切切酶酶：识识别别特特定定核核苷苷酸酸序序列列，并并在在特特定定位位点点上上切割切割DNA分子。分子。(2)DNA连连接接酶酶：EcoliDNA连连接接酶酶只只能能连连接接黏黏性性末末端端；T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。连接酶能连接黏性末端和平末端。(3)运运载载体体：能能在在宿宿主主细细胞胞内内稳稳定定存存在在并并大大量量复复制制；有有一一个个至至多多个个限限制制酶酶切切割割位位点点；具具有有特特殊殊的的标标记记基基因因以便对含目的基因的受体细胞筛选。以便对含目的基因的受体细胞筛选。第10页/共61页真题领
14、悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联2.基因工程的基因工程的4大操作程序大操作程序(1)目的基因的获取目的基因的获取(三种方法三种方法)：从基因文库中获取。从基因文库中获取。利利用用_技技术术扩扩增增：其其实实质质是是在在体体外外对对目目的的基基因因进进行行大大量复制。量复制。用化学方法人工合成。用化学方法人工合成。(2)基因表达载体的构建基因表达载体的构建(此为此为“核心步骤核心步骤”)：基基因因表表达达载载体体的的组组成成：目目的的基基因因启启动动子子终终止止子子_复制原点。复制原点。PCR标记基因标记基因第11页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识
15、主线思维串联思维串联基因表达载体的构建过程基因表达载体的构建过程(3)将目的基因导入受体细胞的将目的基因导入受体细胞的“3大方法大方法”：导导入入植植物物细细胞胞农农杆杆菌菌转转化化法法(花花粉粉管管通通道道法法、基基因因枪枪法法)。导入动物细胞导入动物细胞显微注射法显微注射法(导入受精卵导入受精卵)。导入微生物细胞导入微生物细胞使用使用Ca2处理细胞。处理细胞。同一种限制酶切割同一种限制酶切割DNA连接酶连接酶第12页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(4)理清目的基因的检测与鉴定：理清目的基因的检测与鉴定：导入检测：导入检测：_杂交技术杂交技术(使用
16、使用DNA探针探针)。个个体体生生物物学学水水平平鉴鉴定定：如如对对转转基基因因作作物物进进行行抗抗虫虫或或抗抗病病等等的的接接种实验。种实验。DNA分子分子分子杂交分子杂交抗原抗原抗体抗体第13页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(1)基基因因表表达达载载体体中中的的胰胰岛岛素素基基因因可可通通过过人人肝肝细细胞胞mRNA反反转转录录获获得得(2015重庆卷，重庆卷，6A)()(2)基基因因表表达达载载体体的的复复制制和和胰胰岛岛素素基基因因的的表表达达均均启启动动于于复复制制原原(起起)点点(2015重庆卷，重庆卷，6B)()(3)借借助助抗抗生生素
17、素抗抗性性基基因因可可将将含含胰胰岛岛素素基基因因的的受受体体细细胞胞筛筛选选出出来来(2015重庆卷，重庆卷，6C)()(4)启启动动子子和和终终止止密密码码子子均均在在胰胰岛岛素素基基因因的的转转录录中中起起作作用用(2015重重庆卷，庆卷，6D)()(5)转转基基因因抗抗虫虫棉棉植植株株抗抗虫虫效效果果的的鉴鉴定定必必须须通通过过分分子子检检测测(2014天天津卷，津卷，4C)()第14页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(6)重重组组质质粒粒与与探探针针能能进进行行分分子子杂杂交交是是因因为为DNA分分子子脱脱氧氧核核糖糖和和磷酸交替连接磷酸交替
18、连接(2013安徽，安徽，6C)()(7)应应用用DNA探探针针技技术术，可可以以检检测测转转基基因因抗抗冻冻番番茄茄植植株株中中目目的的基基因的存在及其完全表达因的存在及其完全表达(2011四川，四川，5D)()(8)每每个个重重组组质质粒粒至至少少含含一一个个限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶识识别别位位点点(2011浙浙江，江，6B)()答案答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)第15页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联提提示示(1)人人肝肝细细胞胞不不能能合合成成胰胰岛岛素素，则则人人肝肝细细胞胞中中不不含含有有胰胰岛岛素素的的mRN
19、A，不不能能通通过过反反转转录录获获得得人人胰胰岛岛素素基基因因；(2)表表达达载载体体的的复复制制启启动动于于复复制制起起点点，胰胰岛岛素素基基因因的的表表达达启启动动于于启启动动子子；(4)启启动动子子在在转转录录过过程程中中起起作作用用，终终止止密密码码子子在在翻翻译译过过程程中中起起作作用用；(5)抗抗虫虫效效果果需需个个体体生生物物学学水水平平的的鉴鉴定定；(6)核核酸酸分分子子之之间间能能进进行行分分子子杂杂交交的的原原理理是是“碱碱基基互互补补配配对对原原则则”；(7)欲欲检检测测目的基因的完目的基因的完全全表表达达，还，还必必须须进行进行抗抗原原抗抗体杂体杂交交实验。实验。第1
20、6页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联1.(2016江江苏苏卷卷，33)下下表表是是几几种种限限制制酶酶识识别别序序列列及及其其切切割割位位点点，图图1、图图2中中标标注注了了相相关关限限制制酶酶的的酶酶切切位位点点，其其中中切切割割位位点点相相同同的酶不重复标注。请回答下列问题：的酶不重复标注。请回答下列问题：基因工程的工具及操作程序基因工程的工具及操作程序第17页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(1)用用图图中中质质粒粒和和目目的的基基因因构构建建重重组组质质粒粒，应应选选用用_两两种种限限制制酶酶切切割割，
21、酶酶切切后后的的载载体体和和目目的的基基因因片片段段，通通过过_酶酶作作用用后后获获得得重重组组质质粒粒。为为了了扩扩增增重重组组质质粒粒，需需将将其其转转入入处处于于_态的大肠杆菌。态的大肠杆菌。(2)为为了了筛筛选选出出转转入入了了重重组组质质粒粒的的大大肠肠杆杆菌菌，应应在在筛筛选选平平板板培培养养基基中中添添加加_，平平板板上上长长出出的的菌菌落落，常常用用PCR鉴鉴定定，所所用用的的引引物组成为图物组成为图2中中_。第18页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(3)若若BamH酶酶切切的的DNA末末端端与与Bcl酶酶切切的的DNA末末端端连连接接
22、，连连接接部部位位的的6个个碱碱基基对对序序列列为为_，对对于于该该部部位位，这这两两种种酶酶_(填填“都能都能”、“都不能都不能”或或“只有一种能只有一种能”)切开。切开。(4)若若用用Sau3A切切图图1质质粒粒最最多多可可能能获获得得_种种大大小小不不同同的的DNA片段。片段。第19页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联第20页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联与与两两种种酶酶的的酶酶切切位位点点均均不不同同。(4)根根据据BamH、Bcl和和Sau3A的的酶酶切切位位点点，Sau3A在在质质粒粒上上有有三三个
23、个酶酶切切位位点点，完完全全酶酶切切可可得得到到记记为为A、B、C三三种种片片段段，若若部部分分位位点点被被切切开开，可可得得到到AB、AC、BC、ABC四四种种片片段段，所所以以用用Sau3A切切图图1质质粒粒最最多多可可能能获获得得7种种大大小小不同的不同的DNA片段。片段。第21页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联2.为为增增加加油油菜菜种种子子的的含含油油量量，研研究究人人员员尝尝试试将将从从陆陆地地棉棉基基因因库库中中获获取取的的酶酶D基基因因与与位位于于拟拟南南芥芥叶叶绿绿体体膜膜上上的的转转运运肽肽基基因因相相连连，导导入入油油菜菜细细胞胞
24、并并获获得得转转基基因因油油菜菜品品种种。酶酶D基基因因、转转运运肽肽基基因因所所含含三三种种限限制制酶酶(Cla、Sac、Xba)的的切切点点如如图图所所示示。请请回回答答下列问题。下列问题。(1)用用限限制制酶酶_和和_酶酶处处理理两两个个基基因因后后，可可得得到到A、D端相连的目的基因。端相连的目的基因。第22页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(2)将将上上述述目目的的基基因因插插入入如如图图所所示示质质粒粒的的_中中，构构建建_，然后将其导入农杆菌中。，然后将其导入农杆菌中。(3)利利用用_法法将将目目的的基基因因导导入入油油菜菜叶叶片片中中，
25、并并通通过过筛筛选选获获得得转基因油菜细胞，通过转基因油菜细胞，通过_技术可培育成转基因油菜植株。技术可培育成转基因油菜植株。(4)用用_法法可可检检测测转转基基因因油油菜菜的的染染色色体体DNA上上是是否否插插入入了了目目的的基基因因，用用_法法可可检检测测转转基基因因油油菜菜植植株株中中的的目目的的基基因因是是否翻译成蛋白质。否翻译成蛋白质。第23页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联解解析析(1)用用限限制制酶酶ClaI和和DNA连连接接酶酶处处理理两两个个基基因因后后，就就能能得得到到A、D端端相相连连的的目目的的基基因因。(2)将将上上述述目目的
26、的基基因因插插入入题题图图所所示示质质粒粒的的TDNA中中，构构建建基基因因表表达达载载体体，并并导导入入农农杆杆菌菌中中。(3)采采用用农农杆杆菌菌转转化化法法将将目目的的基基因因导导入入油油菜菜体体细细胞胞中中。获获得得转转基基因因油油菜菜细细胞胞后后，可可通通过过植植物物组组织织培培养养技技术术将将其其培培育育成成转转基基因因油油菜菜植植株株。(4)用用DNA分分子子杂杂交交法法可可检检测测转转基基因因油油菜菜的的染染色色体体DNA上上是是否否插插入入了了目目的的基基因因，用用抗抗原原抗抗体体杂杂交交法法可可检检测测转转基基因因油油菜菜植植株株中的目的基因是中的目的基因是否否成功表成功表
27、达达出相关的蛋白质。出相关的蛋白质。答答案案(1)ClaIDNA连连接接(2)TDNA基基因因表表达达载载体体(3)农农杆菌转化植物组织培养杆菌转化植物组织培养(4)DNA分子杂交抗原抗体杂交分子杂交抗原抗体杂交第24页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联1.使用限制酶的注意点使用限制酶的注意点(1)一般用同种限制酶切割载体和目的基因。一般用同种限制酶切割载体和目的基因。(2)不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。2.DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶DNA连连接接酶酶连连接接两两个个DNA片片段段，而而DNA聚聚合
28、合酶酶只只能能将将单单个个脱脱氧氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。核苷酸添加到脱氧核苷酸链上。3.限制酶限制酶DNA酶酶解旋酶解旋酶限限制制酶酶是是切切割割某某种种特特定定的的脱脱氧氧核核苷苷酸酸序序列列，并并使使两两条条链链在在特特定定的的位位置置断断开开；DNA酶酶是是将将DNA水水解解为为组组成成单单位位；解解旋旋酶酶是是将将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。的两条链间的氢键打开形成两条单链。第25页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联4.启动子、终止子启动子、终止子(1)启动子启动子(DNA片段片段)起始密码子起始密码子(RNA)。(2)终止子终
29、止子(DNA片段片段)终止密码子终止密码子(RNA)。5.根据受体种类确定基因工程的受体细胞根据受体种类确定基因工程的受体细胞(1)植植物物：植植物物体体细细胞胞或或受受精精卵卵导导入入方方法法常常用用农农杆杆菌菌转转化化法法、花粉管通道法、基因枪法花粉管通道法、基因枪法(本法针对单子叶植物本法针对单子叶植物)(2)动物：受精卵或体细胞动物：受精卵或体细胞导入方法为导入方法为“显微注射法显微注射法”(3)微生物：细菌微生物：细菌导入方法为导入方法为“感受态法感受态法”(4)农农杆杆菌菌转转化化法法原原理理：农农杆杆菌菌易易感感染染植植物物细细胞胞，并并将将其其Ti质质粒粒上上的的TDNA转移并
30、整合到受体细胞染色体转移并整合到受体细胞染色体DNA上。上。第26页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联1.(2016天天津津卷卷，7)人人血血清清白白蛋蛋白白(HSA)具具有有重重要要的的医医用用价价值值，只只能能从从血血浆浆中中制制备备。下下图图是是以以基基因因工工程程技技术术获获取取重重组组HSA(rHSA)的两条途径。的两条途径。基因工程的应用及蛋白质工程基因工程的应用及蛋白质工程(1)为为获获取取HSA基基因因，首首先先需需采采集集人人的的血血液液，提提取取_合合成成总总cDNA，然然后后以以cDNA为为模模板板，采采用用PCR技技术术扩扩增增H
31、SA基基因因。下下图图中中箭箭头头表表示示一一条条引引物物结结合合模模板板的的位位置置及及扩扩增增方方向向，请请用用箭箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。第27页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(2)启启动动子子通通常常具具有有物物种种及及组组织织特特异异性性，构构建建在在水水稻稻胚胚乳乳细细胞胞内内特特异异表表达达rHSA的的载载体体，需需要要选选择择的的启启动动子子是是_(填填写写字字母母，单选单选)。A.人血细胞启动子人血细胞启动子B.水稻胚乳细胞启动子水稻胚乳细胞启动子C.大肠杆菌启动子大肠杆菌
32、启动子D.农杆菌启动子农杆菌启动子(3)利利用用农农杆杆菌菌转转化化水水稻稻受受体体细细胞胞的的过过程程中中，需需添添加加酚酚类类物物质质，其其目的是目的是_。第28页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(4)人人体体合合成成的的初初始始HSA多多肽肽，需需要要经经过过膜膜系系统统加加工工形形成成正正确确的的空空间间结结构构才才能能有有活活性性。与与途途径径相相比比，选选择择途途径径获获取取rHSA的的优优势是势是_。(5)为为证证明明rHSA具具有有医医用用价价值值，须须确确认认rHSA与与_的的生生物物学学功能一致。功能一致。解解析析(1)总总cDNA
33、是是由由细细胞胞内内mRNA经经逆逆转转录录获获得得。DNA两两条条链链是是反反向向平平行行的的，另另一一条条引引物物扩扩增增方方向向应应向向左左。(2)据据题题意意，启启动动子子具具有有物物种种特特异异性性，它它应应与与受受体体细细胞胞启启动动子子一一致致，应应选选B。(3)在在农农杆杆菌菌转转化化时时，加加入入某某物物质质，其其目目的的应应为为“促促进进”或或“有有利利于于”转转化化，推推测测酚酚类类物物质质可可吸吸引引农农杆杆菌菌侵侵染染水水稻稻受受体体细细胞胞。(4)水水稻稻是是真真核核细细胞胞，具具有有对对分分泌泌蛋蛋白白加加工工的的内内质质网网和和高高尔尔基基体体。途途径径受受体体
34、为为大大肠肠杆杆菌菌，没没有有上上述述细细胞胞器器。(5)制制备备的的rHSA应应具具有有与与HSA相相同的生物学功能才具有同的生物学功能才具有医医用用价价值值。第29页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联答案答案(1)总总RNA(或或mRNA)(2)B(3)吸吸引引农农杆杆菌菌移移向向水水稻稻受受体体细细胞胞，有有利利于于目目的的基基因因成成功功转转化化(4)水水稻稻是是真真核核生生物物，具具有有膜膜系系统统，能能对对初初始始rHSA多多肽肽进进行行高效加工高效加工(5)HSA第30页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维
35、串联2.(2016甘甘肃肃河河西西五五校校联联考考)图图示示方方案案为为人人们们获获得得生生物物新新品品种种的的过过程，请回答下列问题：程，请回答下列问题：(1)基基因因工工程程的的核核心心步步骤骤是是_。方方案案1中中，将将抗抗冻冻蛋蛋白白基基因因导导入入烟烟草草受受体体细细胞胞常常用用的的方方法法是是_。从从分分子子水水平平检检测测抗抗冻冻烟烟草草是是否否培培育育成成功功的的方方法法是是：_。第31页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(2)推推测测方方案案中中A基基因因所所起起的的作作用用是是_。在在方方案案中中单克隆抗体制备过程中，还应用了细胞工程
36、中的单克隆抗体制备过程中，还应用了细胞工程中的_技术。技术。(3)方方案案中中的的转转基基因因牛牛可可以以通通过过分分泌泌乳乳汁汁来来生生产产人人的的生生长长激激素素。人人的的生生长长激激素素基基因因在在导导入入受受体体细细胞胞前前，基基因因的的首首段段必必须须含含有有使使其其仅能在山羊仅能在山羊_细胞中特异性表达的细胞中特异性表达的_。(4)方方案案中中的的早早期期胚胚胎胎在在移移植植入入受受体体母母羊羊子子宫宫之之前前，必必须须对对胚胚胎胎进进行行_鉴鉴定定，一一般般是是取取处处于于_时时期期的的_细细胞胞进行检测。进行检测。答答案案(1)基基因因表表达达载载体体的的构构建建农农杆杆菌菌转
37、转化化法法抗抗原原抗抗体体杂杂交交(2)使使细细胞胞无无限限增增殖殖(或或调调控控细细胞胞无无限限增增殖殖)动动物物细细胞胞培培养养(3)乳乳腺启动子腺启动子(4)性别囊胚滋养层性别囊胚滋养层第32页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联1.界定基因治疗与基因诊断界定基因治疗与基因诊断(1)基因治疗基因治疗将将正正常常基基因因导导入入有有基基因因缺缺陷陷的的细细胞胞中中，使使该该基基因因的的表表达达产产物物发发挥挥功功能能，以以达达到到治治疗疗的的目目的的其其原原理理为为“基基因因重重组组”及及“基基因因表表达达”。(2)基因诊断基因诊断制制作作特特定定DN
38、A探探针针与与病病人人样样品品DNA混混合合，分分析析杂杂交交带带情情况况其原理为其原理为“DNA分子杂交分子杂交”第33页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联2.界定基因工程与蛋白质工程界定基因工程与蛋白质工程蛋白质工程蛋白质工程基因工程基因工程基因基因人为改造的基因人为改造的基因天然外源基因天然外源基因实质实质定向改造或生产人类所需定向改造或生产人类所需蛋白质蛋白质定向改造生物的遗传特性，以获得定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品人类所需的生物类型或生物产品(基基因的异体表达因的异体表达)结果结果生产自然界中没有的蛋白生产自然界中
39、没有的蛋白质质生产自然界中已有的蛋白质生产自然界中已有的蛋白质注注：对对现现有有蛋蛋白白质质的的改改造造或或制制造造新新的的蛋蛋白白质质，必必须须通通过过基基因因修修饰饰或基因合成实现或基因合成实现第34页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联考点二细胞工程考点二细胞工程1.(2016全全国国课课标标卷卷，40)下下图图表表示示通通过过核核移移植植等等技技术术获获得得某某种种克隆哺乳动物克隆哺乳动物(二倍体二倍体)的流程。的流程。回答下列问题：回答下列问题：(1)图图中中A表表示示正正常常细细胞胞核核，染染色色体体数数为为2n，则则其其性性染染色色体体的的组
40、组成成可可为为_。过过程程表表示示去去除除细细胞胞核核，该该过过程程一一般般要要在在卵卵母母细细胞胞培培养养至至适适当当时时期期再再进进行行，去去核核时时常常采采用用_的的方方法法。代表的过程是代表的过程是_。第35页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联(2)经经过过多多次次传传代代后后，供供体体细细胞胞中中_的的稳稳定定性性会会降降低低。因因此此，选材时必须关注传代次数。选材时必须关注传代次数。(3)若若获获得得的的克克隆隆动动物物与与供供体体动动物物性性状状不不完完全全相相同同，从从遗遗传传物物质质的的角度分析其原因是角度分析其原因是_。(4)与与克克
41、隆隆羊羊“多多莉莉(利利)”培培养养成成功功一一样样，其其他他克克隆隆动动物物的的成成功功获获得得也证明了也证明了_。第36页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联解解析析(1)提提供供体体细细胞胞的的供供体体可可能能为为雌雌性性，也也可可能能为为雄雄性性，因因此此图图中中A(正正常常细细胞胞核核)的的性性染染色色体体组组成成为为XX或或XY。常常采采用用显显微微操操作作去去核核法法来来去去除除卵卵母母细细胞胞的的细细胞胞核核。过过程程表表示示将将早早期期胚胚胎胎移移入入受受体体，其其过过程程为为胚胚胎胎移移植植。(2)取取供供体体动动物物的的体体细细胞胞培
42、培养养，一一般般选选用用传传代代10代代以以内内的的细细胞胞，因因为为10代代以以内内的的细细胞胞一一般般能能保保持持正正常常的的二二倍倍体体核核型型，保保证证了了供供体体细细胞胞正正常常的的遗遗传传基基础础。超超过过10代代继继续续培培养养，则则其其遗遗传传物物质质(或或核核型型)的的稳稳定定性性会会降降低低。(3)克克隆隆动动物物的的细细胞胞核核基基因因来来自自供供体体，因因此此大大部部分分性性状状与与供供体体相相同同，但但细细胞胞质质基基因因来来源源于于受受体体(或或提提供供卵卵母母细细胞胞的的个个体体)，即即卵卵母母细细胞胞的的细细胞胞质质中中的的遗遗传传物物质质会会对对克克隆隆动动物
43、物的的性性状状产产生生影影响响，这这就就决决定定了了克克隆隆动动物物的的性性状状与与供供体体不不完完全全相相同同。(4)克克隆隆动动物物的的培培育育采采用用的的是是核核移移植植技技术术，核核移移植植技技术的原理是：已经分化的动物体细胞核具有术的原理是：已经分化的动物体细胞核具有全全能性。能性。第37页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联答答案案(1)XX或或XY显显微微操操作作(去去核核法法)胚胚胎胎移移植植(2)遗遗传传物物质质(3)卵卵母母细细胞胞的的细细胞胞质质中中的的遗遗传传物物质质会会对对克克隆隆动动物物的的性性状状产产生生影影响响(4)已经分化
44、的动物体细胞核具有全能性已经分化的动物体细胞核具有全能性第38页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联2.(2014全全国国课课标标，40)某某研研究究者者用用抗抗原原(A)分分别别免免疫疫3只只同同种种小小鼠鼠(X、Y和和Z)，每每只只小小鼠鼠免免疫疫5次次，每每次次免免疫疫一一周周后后测测定定各各小小鼠鼠血血清清抗抗体体的的效效价价(能能检检测测出出抗抗原原抗抗体体反反应应的的血血清清最最大大稀稀释释倍倍数数)，结果如下图所示。，结果如下图所示。若若要要制制备备杂杂交交瘤瘤细细胞胞，需需取取免免疫疫后后小小鼠鼠的的B淋淋巴巴细细胞胞(染染色色体体数数目目
45、40条条)，并并将将该该细细胞胞与与体体外外培培养养的的小小鼠鼠骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞(染染色色体体数数目目60条条)按按一一定定比比例例加加入入试试管管中中，再再加加入入聚聚乙乙二二醇醇诱诱导导细细胞胞融融合合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。第39页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联回答下列问题。回答下列问题。(1)制制备备融融合合所所需需的的B淋淋巴巴细细胞胞时时，所所用用免免疫疫小小鼠鼠的的血血清清抗抗体体效效价价需需达达到到16000以以上上，则则小小鼠鼠最最少少需需要
46、要经经过过_次次免免疫疫后后才才能能有有符符合合要要求求的的。达达到到要要求求后后的的X、Y、Z这这3只只免免疫疫小小鼠鼠中中，最最适适合用于制备合用于制备B淋巴细胞的是淋巴细胞的是_小鼠，理由是小鼠，理由是_。(2)细细胞胞融融合合实实验验完完成成后后，融融合合体体系系中中除除含含有有未未融融合合的的细细胞胞和和杂杂交交瘤瘤细细胞胞外外，可可能能还还有有_，体体系系中中出出现多种类型细胞的原因是现多种类型细胞的原因是_。(3)杂杂交交瘤瘤细细胞胞中中有有_个个细细胞胞核核，染染色色体体数数目目最最多多是是_条。条。(4)未未融融合合的的B淋淋巴巴细细胞胞经经多多次次传传代代培培养养后后都都不
47、不能能存存活活，原原因因是是_。第40页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联解解析析(1)据据图图分分析析，第第4次次免免疫疫后后X、Y、Z小小鼠鼠的的血血清清抗抗体体效效价价均均达达到到16000以以上上，小小鼠鼠Y的的B淋淋巴巴细细胞胞产产生生抗抗体体效效价价最最高高，最最适适合合用用于于制制备备单单克克隆隆抗抗体体。(2)融融合合体体系系中中除除了了未未融融合合的的细细胞胞和和杂杂交交瘤瘤细细胞胞之之外外，还还有有骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞和和B淋淋巴巴细细胞胞的的自自身身融融合合产产物物，由由于于细细胞胞膜膜具具有有流流动动性性，且且诱诱导导之之后后的的
48、细细胞胞融融合合不不具具有有特特异异性性，故故体体系系中中会会出出现现多多种种类类型型的的细细胞胞。(3)杂杂交交瘤瘤细细胞胞形形成成后后，小小鼠鼠的的B淋淋巴巴细细胞胞核核与与骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞核核会会融融合合形形成成一一个个细细胞胞核核。小小鼠鼠的的B淋淋巴巴细细胞胞(染染色色体体数数目目40条条)和和骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞(染染色色体体数数目目60条条)因因融融合合时时可可发发生生染染色色体体丢丢失失现现象象，故故融融合合后后，染染色色体体数数目目最最多多为为100条条。(4)未未融融合合的的B淋淋巴巴细细胞胞经经多多次次传传代代培培养养后后，仍仍然然不不是是能能无无限限增增殖殖的细胞，
49、同时正常细胞的分裂次数是有的细胞，同时正常细胞的分裂次数是有限限的。的。第41页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联答案答案(1)4YY小鼠的抗体效价最高小鼠的抗体效价最高(2)B淋淋巴巴细细胞胞相相互互融融合合形形成成的的细细胞胞，骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞相相互互融融合合形形成成的的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到100%(3)1100(4)B淋巴细胞高度分化，不能无限增殖淋巴细胞高度分化，不能无限增殖第42页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联课课标标卷卷对对细细胞胞工工程程的的
50、考考查查仅仅次次于于基基因因工工程程，考考查查内内容容多多涉涉及及动动物物细细胞胞培培养养与与融融合合技技术术，体体细细胞胞核核移移植植技技术术(常常渗渗透透考考查查胚胚胎胎工工程程技技术术)及及植植物物组组织织培培养养和和体体细细胞胞杂杂交交技技术术，答答题题关关键键语语句句均均源源自自教材，故精准记忆教材相关内容是解题关键。教材，故精准记忆教材相关内容是解题关键。第43页/共61页真题领悟真题领悟融会贯通融会贯通知识主线知识主线思维串联思维串联1.高考必记关键点高考必记关键点(1)植物组织培养的植物组织培养的2个关键个关键(2)植物激素的使用植物激素的使用_比比例例较较高高，促促进进芽芽分