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1、书 书 书中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准犌犅 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 发布 实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布书 书 书犌犅 前言本标准代替 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定。本标准与 相比，主要变化如下：增加了附录；修改了设备和材料；修改了培养基和试剂；修改了检验程序；修改了操作步骤；修改了附录。犌犅 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定范围本标准规定了食品中菌落总数（）的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。术语和定义 菌落总数犪 犲 狉 狅 犫 犻 犮狆 犾 犪 狋 犲犮 狅 狌 狀
2、 狋食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每（）检样中形成的微生物菌落总数。设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：）恒温培养箱：，。）冰箱：。）恒温装置：。）天平：感量为。）均质器。）振荡器。）无菌吸管：（具 刻度）、（具 刻度）或微量移液器及吸头。）无菌锥形瓶：容量 、。）无菌培养皿：直径。）计或比色管或精密试纸。）放大镜或和菌落计数器。培养基和试剂 平板计数琼脂培养基：见。菌落总数测试片：应符合 中平板计数琼脂培养基质量控制要求，且主要营养成分与平板计数琼脂培养基配方一致。无菌磷酸盐缓冲液：见。无菌生理盐水：见。检验程序菌落
3、总数的检验程序见图。犌犅 图菌落总数的检验程序操作步骤 样品的稀释 固体和半固体样品：称取 样品置于盛有 无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌均质杯内，均质 ，或放入盛有 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 ，制成 的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取 样品置于盛有 无菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，或放入盛有 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 ，制成 的样品匀液。当结果要求为每样品中菌落总数时，按 操作。犌犅 用无菌吸管或微量移液器吸取 样品匀液，沿管壁缓慢注于盛有稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），
4、在振荡器上振荡混匀，制成 的样品匀液。按 操作，制备 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用次无菌吸管或吸头。根据对样品污染状况的估计，选择个个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），吸取样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。同时，分别吸取空白稀释液加入两个无菌培养皿内作空白对照。及时将 冷却至 的平板计数琼脂培养基（可放置于 恒温装置中保温）倾注培养皿，并转动培养皿使其混合均匀。培养 水平放置待琼脂凝固后，将平板翻转，培养。水产品 培养。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面蔓延生长的菌落，可在凝固后的琼脂培养基表面覆盖一薄层平板计数琼脂培养基（约），凝固后翻转平板，进行培养。如
5、使用菌落总数测试片，应按照测试片所提供的相关技术规程操作。菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（，）表示。选取菌落数在 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 的平板记录具体菌落数，大于 的可记录为多不可计。其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无较大片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，可计算半个平板后乘以，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。结果与报告 菌落总数的计算方法 若只有一个稀释度平
6、板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每（）样品中菌落总数结果，示例见。若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（）计算，示例见。犖犆（狀 狀）犱（）式中：犖 样品中菌落数；犆 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；狀 第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；狀 第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；犱 稀释因子（第一稀释度）。若所有稀释度的平板上菌落数均大于 ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算，示例见。犌犅 若所有稀释度的平板菌落数均小于，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀
7、释倍数计算，示例见。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于乘以最低稀释倍数计算，示例见。若所有稀释度的平板菌落数均不在 之间，其中一部分小于 或大于 时，则以最接近 或 的平均菌落数乘以稀释倍数计算，示例见。菌落总数的报告 菌落总数小于 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。菌落总数大于或等于 时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字，后面用代替位数；也可用 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。若空白对照上有菌落生长，则此次检验结果无效。称重取样以为单位报告，体积取样以为单位报告。犌犅 附录犃培养基和试剂犃 平板计数琼脂（狆 犾
8、 犪 狋 犲犮 狅 狌 狀 狋犪 犵 犲 狉，犘犆犃）培养基犃 成分胰蛋白胨（主要营养成分）酵母浸膏（主要营养成分）葡萄糖（主要营养成分）琼脂 蒸馏水 犃 制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节至 。分装于适宜容器，高压灭菌 。犃 无菌磷酸盐缓冲液犃 成分磷酸二氢钾（）蒸馏水 犃 制法贮存液：称取 的磷酸二氢钾溶于 蒸馏水中，用大约 的 氢氧化钠溶液调节至，用蒸馏水稀释至 后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液 ，用蒸馏水稀释至 ，分装于适宜容器中，高压灭菌 。犃 无菌生理盐水犃 成分氯化钠 蒸馏水 犃 制法称取 氯化钠溶于 蒸馏水中，高压灭菌 。犌犅 附录犅示例犅 示例稀释度 计算结果菌落数多不可计，多不可计 ，上述数据按 数字修约后，表示为 或 。犅 示例稀释度 （第一稀释度）（第二稀释度）计算结果菌落数 ，上述数据按 数字修约后，表示为 或 。犅 示例稀释度 计算结果菌落数多不可计，多不可计多不可计，多不可计 ，上述数据按 数字修约后，表示为 或 。犅 示例稀释度 计算结果菌落数，上述数据按 数字修约后，表示为 或 。犅 示例稀释度 计算结果菌落数，上述数据表示为。犌犅 犅 示例稀释度 计算结果菌落数 ，上述数据按 数字修约后，表示为 或 。