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1、DPPH自由基去除法李熙灿/Xican Li广州中医药大学）文献Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal 2022; 6（1）:140.原理DPPH （l,l-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-苦基月井基自由基。分子中，由于存在 多个吸电子的-NCh和苯环的大五键，所以，氮自由基能稳定存在
2、。Q 02KNN-（y-NO2。5N当DPPH自由基被去除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。DPPH这种稳定的自由基 为去除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。实验步骤DPPH测试液的配制取DPPH 1 mg溶于约20mL溶剂（乙醇、95乙醇或甲醇）中，超声5min,充分振摇，务使上下各局部 均匀。取1mL该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A= 121.3之间最正确。该DPPH溶液最好避光保 存，3.5小时内用完。1.1 样品液的配制样品用适宜的溶剂溶解，为便于计算，可配成Img/mL浓度。溶剂根据样品的极性进行选择，首选95 乙醇或无水乙醇，如不溶可用DM
3、SOo预试取DPPH溶液2mL,往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色 情况，当溶液颜色根本褪去时，记下样品的加样量。此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的根底上，往前设置5个用量，使之成等差数列。【如】在预试过程中，发现加样到200“ L时，DPPH溶液颜色根本褪去，那么100UL为该样品液的 最大用量。其用量梯度宜设为40、80、 120、160、200 UL。1.2 测量Ao值的测量：取DPPH溶液2 mL参加到小试管（或玻璃瓶）中，加95乙醇（或无水乙醇）1mL,充 分混合，测A值（519nm）,此A值为Ao （Ao多在之间）。A值的测量：取DPPH
4、溶液2mL参加到小试管（或玻璃瓶）中，加样品液xuL 5是根据1.3预试 结果确定样品液的用量），再加U000 -x） UL95乙醇（或无水乙醇），混合，静置30分钟后，测A值 （519nm）。如：某样品的用量梯度为40、80、120、160、200 uL,那么加样表如下：表1加样表样品液95乙醇（或无水乙醇）DPPH测试液总体积40 UL960 uL2 mL3mL80 uL920 uL2 niL3niL1200uL880 uL2 mL3mL160 uL840 uL2 mL3 mL200 HL800 uL2 mL3mL1.3 正式测量广州陶粒，广州陶粒厂:/110878J6RCRDk223NV方法大致与1.4相同，只不过，每测一个用量需要测三个平行数据。而且在每测一个用量的三个平行 数据后，都要重测一次Ao.实验结果去除率（抑制率）的计算公式：Inhibition % = x 100%4实例厚朴酚magnolol的DPPH去除率曲线：（图中Trolox和BHT为阳性对照组）% uosqsUI Hddd