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1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。兽医分子生物学复习大纲-兽医分子生物学复习大纲名词解释：选10个，每个2分反义疗法：引入与目的mRNA相补的RNA（反义RNA），用于阻遏或降低某个基因的表达，达到治疗目的。元基因组（Metagenome)：指的是自然环境中全部微生物的基因组，包含了可培养和未培养的微生物基因组。生物信息学：对DNA和蛋白质序列资料中各种类型信息进行识别、存储、分析、模拟和传输的科学。PCR（PolymeraseChainReaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起
2、点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。Tm：热变性使DNA分子双链解开所需温度称为熔解温度(meltingtemperature，简写Tm)。DNA的变性：在理化因素作用下，DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链（双链单链），从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变的现象。退火：热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性,此过程称之为“退火”(annealing)。复性：指变性DNA在适当条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象（单链双链），它是变性的一种逆转过程。分子杂交(简称杂交，hybridization)：是核酸研究中一项最基
3、本的实验技术。其基本原理就是应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA或RNA片段（标记的DNA或RNA分子与待检测的靶DNA或RNA分子），按碱基互补关系形成杂交双链分子。通过检测标记分子的标记信号，即可检测靶分子的存在。核酸探针（prob）：是指带有某些标记物(如放射性同位素32P，荧光物质异硫氰酸荧光素等)的特异性核酸序列片段。在分子杂交中，通过标记后与靶分子结合，并检测靶分子的存在。基因：DNA分子中含有特定遗传信息的核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。或指合成有功能的多肽链或RNA所必需的全部核酸序列（通常是DNA序列）。重叠基因：核苷酸序列彼此重叠的2个基因为重叠基因，或
4、称嵌套基因。卫星DNA(satelliteDNA)：是一类高度重复序列，这类重复顺序的重复单位一般由2-10bp组成，成串排列。由于这类序列的碱基组成不同于其他部份（一般富含A/T片断，浮密度较小），可用等密度梯度离心法将其与主体DNA分开，因而称为卫星DNA或随体DNA。基因家族genefamily：在真核生物基因组中来源相同、结构相似、功能相关的一组成串排列在一起的基因，称为基因家族（genefamily）。一些基因彼此靠近，成串地排列在一起，这种基因排列结构叫基因簇（genecluster）。在基因家族结构中经常会看到基因簇结构。管家基因（housekeepinggene）-在一个生物个
5、体的几乎所有细胞中持续表达的基因。奢侈基因（luxurygene）只在特定的细胞类型中表达的基因。组成性基因表达：无论表达水平高低，管家基因较少受环境因素影响，而是在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。区别于其他基因，这类基因表达被视为组成性基因表达(constitutivegeneexpression)。可诱导基因：在特定环境信号刺激下，相应的基因被激活，基因表达产物增加，这种基因称为可诱导基因。可阻遏基因：如果基因对环境信号应答是被抑制，这种基因是可阻遏基因。协调表达：在一定机制控制下，功能上相关的一组基因，无论其为何种表达方式，均需协调一致、共同表达，即为协调表
6、达(coordinateexpression)，这种调节称为协调调节(coordinateregulation)。弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列，称为弱化子。增色效应或高色效应(hyperchromiceffect)：指变性后DNA溶液的紫外吸收作用增强的效应。外显子extron：成熟的mRNA或蛋白质中存在的序列。（在DNA或mRNA中都存在的序列）内含子intron：在DNA上存在，而在mRNA（或cDNA）中不存在的序列，初级转录产物加工成成熟mRNA时被切除的间隔序列。转位因子：能够进行复制并将一个拷贝插入新位点的DNA序列。（能在基因组中移动的DNA
7、序列叫转位因子），由于它可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置,甚至在不同的染色体之间跃迁所以又称跳跃基因（jump-gene）。操纵子（operon）：原核生物中几个功能相关的结构基因成簇串联排列组成的一个基因表达的协同单位（DNA序列）。操纵子是一种完整的具有特定功能的细菌基因表达和调节的单位，包括结构基因，启动序列，操纵序列，调节基因，组成一个控制单元。感受态细胞：指容易接受外源DNA进入，从而获的特异生物学性状的细胞。融合基因：通常是指通过自发突变事件形成的、或是应用DNA重组技术构建的、一类具有来自两个或两个以上不同基因的核苷酸序列的新型基因。融合蛋白质：由克隆在一起的两个或
8、数个不同基因的编码序列组成的融合基因，转译产生的单一的多肽序列。它们的功能往往是异常的，或者是已经发生了变化。单顺反子（monocistron）：即一个基因编码一条多肽链或RNA链，每个基因转录有各自的调节元件，一个启动子后仅具有一个编码序列。多顺反子mRNA:在原核细胞中，通常是几种不同的mRNA连在一起，相互之问由一段短的不编码蛋白质的间隔序列所隔开，这种mRNA叫做多顺反子mRNA。可编码两条或两条以上蛋白质分子的mRNA的分子。转化：质粒或其它基因工程载体进入原核宿主细胞的过程。单位限制性内切酶：在最佳缓冲系统和20l体积中反应1小时，完全水解1gDNA所需的限制性内切酶量。质粒(Pl
9、asmids)：是存在于细菌细胞质中独立于染色体而自主复制的共价、封闭、环状双链DNA分子（CovalentlyclosedCircularDNA,cccDNA），并不是细菌生长所必需的，但可以赋予细菌某些抵御外界环境因素不利影响的能力。载体：外源DNA片段要进入细胞(受体细胞)，并在其中进行复制与表达，必须有一个适当的运载工具将其带入细胞内并载着外源DNA一起进行复制与表达。这种运载工具称为载体(vector)。肽核酸(PNA,peptidenucleicacid)：90年代丹麦科学家发明的一种全新的DNA类似物，以N-(2-氨基乙基)甘氨酸肽键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架，能特异性地
10、识别与DNA、RNA所形成的杂交体。限制性内切酶多态性分析（RFLPRestrictionFragmentLengthPolymorphisms）：每一限制性核酸内切酶在切割DNA分子时都有固定的切点序列，DNA分子中核苷酸排列顺序的变化有可能使该切点丢失或增加。由于不同生物群体的DNA序列千差万别，因而用同一限制性内切酶消化后，所得DNA片段的长度分布也是千变万化的。因此，其可用于临床遗传性疾病的基因诊断、生物群体的遗传分析。单链构象多态性分析（SSCPSinglestrandconformationpolymorphism）：单链DNA片段呈复杂的空间折叠构象，这种立体结构主要是由其内部碱
11、基配对等分子内相互作用力来维持的，当有一个碱基发生改变时，会或多或少地影响其空间构象，使构象发生改变，空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中迁移率不同。问答题（选8个题，取其中的6个回答，共50-60分）1、分子生物学的基本含义与基本原理是什么？（一）分子生物学是研究生物大分子结构与功能的一门学科，即从分子水平阐明生命现象和生物学规律的科学。广义的讲，一切从分子水平研究生命奥秘的研究工作都是分子生物学。（二）分子生物学的基本原理分子生物学的三大原则：第一：构成生物体的有机大分子的单体在不同生物体内都是相同的：共同的核酸语言，共同的蛋白质语言。第二：生物体内一切有机大分子的构建都遵循共
12、同的规律；或者说：生物遗传信息表达的中心法则相同。第三：某一特定生物体所拥有的核酸及蛋白质决定了生物的属性。生物大分子单体的排列（核苷酸、氨基酸）是不同的。2、DNA的变性的含义是什么，变性会引起DNA哪些理化性质的变化？（一）概念：在理化因素作用下，DNA双螺旋的两条互补链松散而分开成为单链（双链单链），从而导致DNA的理化性质及生物学性质发生改变的现象。（二）理化性质的变化（1）溶液粘度降低n DNA双螺旋是紧密的“刚性”结构，变性后代之以“柔软”而松散的无规则单股线性结构，DNA粘度因此而明显下降。（2）沉降速度变慢；由于变为单链后，密度下降，导致沉降速度变慢。（3）溶液旋光性发生改变变
13、性后整个DNA分子的对称性及分子局部的构性改变，使DNA溶液的旋光性发生变化。（4）增色效应或高色效应原因：DNA分子具有吸收250280nm波长的紫外光的特性，其吸收峰值在260nm。DNA分子中碱基间电子的相互作用是紫外吸收的结构基础，但双螺旋结构有序堆积的碱基又“束缚”了这种作用。变性DNA的双链解开，碱基中电子的相互作用更有利于紫外吸收，故而产生增色效应。3、影响DNA变性的因素有哪些？（1） 温度：温度越高，越有利于核酸变性。（2）碱基组成G/C含量越高，变性温度越高。均质DNA变性温度范围小，异质DNA变性温度范围大。（3）离子强度：高盐利于稳定，低盐利于变性。离子强度高，Tm值高
14、，变性温度范围较窄；离子强度低，Tm值低，变性温度范围较宽。（4）强酸强碱：极端的pH有利于核酸变性。（5）变性剂：变性剂如甲醇、乙醇、甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键，妨碍碱基堆积，破坏双螺旋结构引起核酸分子变性，使Tm下降。（6）DNA的长度DNA长度越大，变性时需要持续的时间越长。4、简述病毒基因组的结构特点。1.基因组较小，大小差异较大；2.化学组成多样DNA病毒、RNA病毒；单链、双链；线状、环状；分节段、不分节段。3.基因重叠现象普遍存在实质：两个基因虽共用一段核苷酸序列，但其读码结构互不相同，编码不同的蛋白质。意义：使DNA的利用率提高，是基因表达调控的方式之一。4.结构简练大部分可
15、编码蛋白质,只有非常小的一部份不编码蛋白质(通常是基因表达的控制序列）（非编码序列较少）；5.基因组中功能基因丛集成一个或几个特定区域，形成一个功能单位或转录单元，即形成多顺反子结构。6.除反转录病毒外，病毒基因组只有一个拷贝；7.有的病毒基因组中具有宿主细胞基因组的结构特点。5、细菌基因组的结构特点有哪些？1.拟核（类核）结构；2.存在多顺反子结构；3.除RNA基因外，基本是单拷贝的：利于核糖体的快速组装，短时间内合成大量核糖体。4.非编码序列相对较少；（相对于真核生物）5.基因多是连续的；6.存在不同的功能识别区：复制起始区、复制终止区等。6、真核生物核基因组特点有哪些？1.基因组较大；低
16、等真核生物：107-108bp，较原核生物大10倍；高等真核生物：5X108-1010bp，某些植物和两栖生物可达1011bp；哺乳类生物大于2X109它们可编码100万个基因。2.真核生物核DNA与蛋白质结合，形成核小体，再缠绕成染色质（染色体）；3.基因组一般为双倍体（diploid）；4.基因为单顺反子。单顺反子：一个基因单独转录，一个基因一条mRNA，翻译成一条多肽链；5.存在大量重复序列，重复次数可高达百万倍；6.基因组中非编码序列多于编码序列，有大量的冗余DNA；7.大部分基因有内含子，因此基因不连续；8.具有多个复制起点，而每个复制子的长度较小。7、基因内含子的特点有哪些？1.内
17、含子是真核生物独有的，但并不是所有真核基因一定有内含子；（组蛋白基因家族）2.内含子的数量和长度对不同的基因不同，一般基因越长，内含子越多；3.在同一基因家族中，编码序列在进化过程中一直比较保守，而内含子变化迅速，差异较大；（内含子变异较外显子大）4.内含子与外显子间的连接处有特殊的序列（序列GTAG）。5.一个基因的内含子可以是另一个基因的外显子。（阅读框和剪切方式不同）8、DNA克隆用载体必须具备哪些条件？在受体细胞中，载体可以独立地进行复制。（拷贝数越高越好）所以，载体本身必须是一个复制单位，称复制子(replicon)，具有复制起点。而且插入外源DNA后不会影响载体本身复制的能力。具有
18、合适的选择性标记，易于鉴定、筛选。也就是说，容易将带有外源DNA的重组体与不带外源DNA的载体区别开来。易于引入受体细胞，具有对受体细胞的可转移性。在原核生物的DNA重组中常用的载体是质粒和噬菌体。酵母和动物病毒等常用作真核生物克隆的载体。从安全角度考虑，要求载体不能随便转移，仅限于在某些实验室内特殊菌种内才可复制等等。具有多种单一的酶切位点（多克隆位点，MCS），便于基因工程操作。长度尽可能小，载装能力强，便于运载大的外源基因。9、质粒的基本特性有哪些？（一）自主复制性质粒DNA携带有自己的复制起始区（ori）以及一个控制质粒拷贝数的基因，因此它能独立于宿主细胞的染色体DNA而自主复制。不同
19、的质粒在宿主细胞内的拷贝数也不同，少则几个多则几百个不等，当然由于质粒上并没有复制酶的基因，所以其复制需要使用宿主细胞复制染色体DNA的多种酶群。（二）不相容性利用同一复制系统的不同质粒（RNAIRNAIIRop因子）如果被导入同一细胞中，它们在复制及随后分配到子细胞的过程中，就会彼此竞争，它们在单细胞中的拷贝数也会有差异，拷贝多的复制更快，结果在细菌繁殖几代之后，细菌的子细胞中绝大多数都含有占优势的质粒，因而这两种质粒中只能有一种长期稳定地留在细胞中，这就是所谓的质粒不相容性。（三）可扩增性质粒能自主地进行复制，这样它才能随着细菌细胞的分裂而稳定地遗传。质粒就其复制方式而言分为两类：松弛型复
20、制及严谨型复制。松弛型复制：拷贝数高，一个细胞中可达上千个拷贝；严谨型复制：拷贝数低，一个细胞中一般低于5个拷贝（1个几个）。（四）可转移性在天然条件下，很多天然质粒都可以通过细菌接合作用从一种宿主细胞内转移到另外一种宿主内，这种转移依赖于质粒上的tra基因产物。10、转化的基本原理是什么？为了提高转化效率，实验中要考虑以下几个重要因素？（一）转化原理：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是细菌处于0，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42短时间热
21、击处理，促进细胞吸收DNA复合物。（二）为了提高转化效率，实验中要考虑以下几个重要因素：1.细胞生长状态和密度：不要用经过多次转接或储于的培养菌，最好从-70或-20甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600来控制。DH5菌株的OD600为0.5时，细胞密度在5107个/ml左右(不同的菌株情况有所不同)，这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。2.质粒的质量和浓度:用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态DNA(cccDNA)。转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时，转
22、化效率就会降低。1ng的cccDNA即可使50l的感受态细胞达到饱和。一般情况下，DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5。3.试剂的质量:所用的试剂，如CaCl2等均需是最高纯度的(GR.或AR.)，并用超纯水配制，最好分装保存于干燥的冷暗处。4.防止杂菌和杂DNA的污染：整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管，tip头等最好是新的，并经高压灭菌处理，所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其它试剂、DNA酶或杂DNA所污染，否则均会影响转化效率或杂DNA的转入，为以后的筛选、鉴定带来不必要的麻烦。11、大肠杆菌表达体系的优越性：1.对大肠杆菌的背景知识，特别是基因表达调控的分子机理
23、有深刻的了解；2.是一种安全的基因工程实验体系，拥有各类适用的寄主菌株和不同类型的载体；3.许多克隆的真核基因都可以在大肠杆菌细胞中实现有效、高水平的表达；4.大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，易用于批量生产。12、大肠杆菌中表达真核生物的蛋白质时存在哪些不足？1、真核基因在大肠杆菌中很难表达出天然蛋白质。1）E.coli不能加工成正确的重组蛋白。细菌和高等生物的加工过程是不同的。特别是一些动物的蛋白要进行糖基化。糖基化在E.coli中是非常罕见的，在E.coli中合成的蛋白不能正确的糖基化。2）E.coli不能正确的折叠蛋白，形成无活性蛋白。如果蛋白不能进行正确的折叠，其三级结构往往是不
24、溶的，在细菌中形成包涵体。这样在细菌中提取蛋白不存在问题，但将蛋白转化为正确的折叠方式是比较困难的甚至是不可能的。2、E.coli可能降解重组蛋白。细菌的蛋白酶，能够识别外来的真核基因所表达的蛋白质分子，并把它们降解掉。重组蛋白降解的问题可以使用一个或多个蛋白酶突变E.coli来解决。3、真核基因在大肠杆菌中的表达受限1）真核基因可能含有内元，E.coli缺乏切除内元的机制。2）真核基因的转录信号同原核的不同。细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；外源基因可能含有具大肠杆菌转录终止信号功能的核苷酸序列。3）基因的密码子可能不适合于E.coli中翻译。总体上讲，所有的生物都共用相同的密码子，但
25、每一种生物都有偏爱的密码子，表现在tRNA识别不同密码子的效率不同。4）真核基因mRNA的分子结构同细菌的有所差异，影响真核基因mRNA稳定性。13、外源蛋白质在大肠杆菌细胞中的表达部位有哪些？表达蛋白形成包涵体后有哪些优缺点？表达部位有：细胞质中表达；周质中表达；胞外表达。形成包涵体的优点：a.蛋白质易于以高纯度和高浓度方式分离；b.蛋白质受保护而免受胞内酶的降解作用；c.蛋白质没有活性，因此不会使寄主细胞受伤害。形成包涵体的缺点：a.蛋白质折叠了，再折叠的蛋白质可能无法恢复其生物学活性；b.蛋白质的终产量偏低；c.蛋白质的生产成本比较昂贵。14、影响克隆基因在大肠杆菌中的表达效率因素有哪些
26、？1.5-UTR对克隆基因表达效率的影响a.启动子结构对表达效率的影响大肠杆菌启动子的保守序35区（5TTGACA）和10(5TATAAT)区;它们之间的距离(17bp)。b.启动子与克隆基因的间隔距离对表达效率的影响当mRNA分子5末端与SD序列之间的长度小于15bp时，转译效率下降。2.质粒载体的生物学特性对基因表达效率的影响a.质粒载体点的拷贝数对表达效率的影响；b.质粒载体的不稳定性对表达效率的影响；3.mRNA转录本的分子特性对基因表达效率的影响a.转译起始序列对表达效率的影响b.mRNA的稳定性对表达效率的影响4.遗传密码子的使用对基因表达效率的影响a.密码子使用的偏爱性现象的规律
27、性几乎在所有的简并密码子家族中，都有一个或两个是优先使用的偏爱性密码子；高表达活性的基因比低表达活性的基因，呈现出较高程度的密码子偏爱性。b.密码子使用偏爱性对基因表达效率的影响富含大肠杆菌罕用密码子的外源真核基因，很难在大肠杆菌转化子细胞中得到有效的表达。5.寄主细胞的生理状态对基因表达效率的影响培养基营养成分的选择、细胞培养方式、培养温度等环境因素能影响大肠杆菌生理状态。15、人工构建的质粒根据其功能及用途分为哪几类？1.多拷贝质粒复制子经过人工突变，除去控制拷贝数负调节基因，使质粒拷贝数达到每个细胞数千，用于扩增外源基因。实验室常用质粒均属于此。2.测序质粒PCR产物直接用于克隆测序的载
28、体，称为T载体。3.整合质粒装有整合促进基因及整合特异序列，便于外源基因准确重组整合入受体细胞的染色体上。4.穿梭质粒含有原核和真核两个不同的复制子，能在原核和真核两种不同的受体细胞中复制。5.表达质粒装有强的启动基因，合适的顺序以及有效的终止子，以便任何外源基因在受体细胞内的高效表达。6.探针质粒筛选克隆或寻找基因元件，通常装有一个可以定量测定其表达的标记基因，如抗性基因。筛选启动基因、终止子等。7、细菌人工染色体质粒细菌人工染色体质粒是一个能插入更长的DNA片段的质粒，简称BACs(bacterialartificialchromosomes)。16、基因表达调控的四个基本的调控点是什么？
29、（1）基因结构的活化。DNA暴露碱基后RNA聚合酶才能有效结合。（2）转录起始。最有效的调节环节，通过DNA元件与调控蛋白相互作用来调控基因表达。（3）转录后加工及转运。RNA编辑、剪接、转运。（4）翻译及翻译后加工。翻译水平可通过特异的蛋白因子阻断mRNA翻译翻译后对蛋白的加工、修饰也是基本调控环节。17、常见的几种核酸杂交方法有哪几种，分别有哪些应用？1. Southern杂交：DNADNA检测信息：用于检测基因组DNA。（DNA水平）例如：转基因后目的基因是否转入；是否存在靶分子；是否有突变。2.Northern杂交：DNA/RNARNA检测信息：基因在mRNA水平上有无表达；表达强弱；
30、分子大小。3.Western杂交（ProteinProtein）检测信息：基因在蛋白质水平上的表达（有无、强弱）；蛋白质的分子量（大小）。4.斑点杂交Dot-blodingDNA：不同物种、不同个体间的比较；RNA：表达的强弱。5.原位菌落杂交主要用于文库筛选，寻找目的基因。6.原位组织杂交检测样本中有无某种病原微生物；可检测基因在不同时期、不同组织、不同部位的表达情况基因表达的组织、细胞特异性。7.基因芯片技术是指将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过杂交信号的强弱判断靶分子的数量。用该技术可将大量的探针同时固定于支持物上，所以一次可对大量核酸分子进行检测分析，从而解决
31、了传统核酸印迹杂交技术操作复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低等不足。它能在同一时间内分析大量的基因，使人们准确高效地破译遗传密码。18、PCR反应的基本步骤：第一步变性(denaturation)：通过加热使模板DNA的双链之间的氢键断裂，双链分开而成单链的过程。第二步退火(annealling)：当温度降低时，引物与模板DNA中互补区域结合成杂交分子，引物附着到模板DNA两侧；第三步延伸(extension)：在dNTPs、Mg2+存在下，DNA聚合酶在适当的反应温度下催化引物按53方向延伸，促使核苷酸依次按与模板碱基互补配对原则，在引物3端一个个地连接上去，合成出与模板DNA链
32、互补的DNA子链。以上述三个步骤为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2n的形式增加。19、简述PCR技术在生产中的应用1.遗传性疾病的基因诊断2.传染病的诊断(肝炎病毒)3.癌基因检测4.法医学(亲子鉴定)上的应用5.DNA测序6.基因克隆7.引入基因点突变,基因融合等20、目前生产中常见的PCR技术的种类包括哪些？普通PCR、锚定PCR、不对称PCR、反向PCR、多重PCR、原位PCR、逆转录PCR(RT-PCR)、差别PCR、荧光定量PCR、套式PCR等。21、简述DNA重组技术的基本过程（一）材料的准备：目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）
33、的准备。（二）用限制性内切酶分别将外源DNA和载体分子切开。（三）目的基因与载体DNA的体外重组，形成重组DNA分子。（四）重组的DNA分子引入受体细胞，通过筛选并建立起无性繁殖系。（五）筛选出所需要的无性繁殖系，并保证外源基因在受体细胞中稳定遗传、正确表达。22、根据你所掌握的知识谈一谈二十一世纪分子生物学发展的趋势1.功能基因组学functionalgenomics依附于对DNA序列的了解，应用基因组学的知识和工具去了解影响发育和整个生物体的特征序列表达谱。2.蛋白质组学proteome以蛋白质组为研究对象，研究细胞内所有蛋白质及其动态变化规律的科学。功能蛋白质组学functionalpr
34、oteome：在特定时间、特定环境和实验条件下基因活跃表达的蛋白质。（细胞内与某种功能有关的或在某种条件下的一群蛋白质）。3.生物信息学Bioinformatics定义：对DNA和蛋白质序列资料中各种类型信息进行识别、存储、分析、模拟和传输。由数据库、计算机网络、应用软件三大部分组成。可进行DNA分析、RNA分析、多序列比较、同源序列检索、蛋白质结构预测等分析。23、影响DNA复性的因素有哪些？复性的基本条件是什么？影响复性的因素：分子组成；DNA的浓度；DNA的长度；温度与时间；阳离子浓度；变性剂。复性的条件：足够高的温度；足够高的离子强度；足够长的时间。24、常见的杂交方法诱哪几种？1So
35、uthern杂交：利用DNADNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。2Northern杂交：对RNA的印迹分析称为Northern印迹法。3Western杂交：对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法。4Eastern杂交对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。5斑点杂交：Dot-bloding6原位菌落杂交：主要用于文库筛选，寻找目的基因。7原位组织杂交：检测样本中组织、细胞特异性（基因在细胞、组织中真实的表达情况）。8基因芯片技术：是指将大量探针分子固定于支持物上，然后与标记的样品进行杂交，通过杂交信号的强弱判断靶分子的数量。-