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1、激光共聚焦扫描显微镜Laser scanning confocal microscope基本内容1.典型产品2.基本组成3.优点4.共聚焦的原理5.扫描模式6.整体结构7.应用1.典型产品Nikon的 Eclipse C1 Plus2.基本组成一、基本组成（一）激光器激光器:多线氩离子(458 nm,488 nm,514 nm)、氦氖绿(543nm)、氦氖红(633 nm)（二）扫描器描器(内装有针孔光栏、分光镜、发射荧光单色器及检测器)（三）光学装置：光学装置：根据样品中荧光信号的强弱、大小及分布，调节激光能量、检测孔光栏、光电倍增管（PMT）的检测范围、物镜和电子放大倍数（zoom），以利
2、于采集各种荧光信号。（四）计算机算机图像存像存储与与处理及控制系理及控制系统：实现了图像的优化、三维重建，实现了全自动程序化控制采集（检测）样品荧光图像的时间和空间，并和同时采集样品中多重荧光信号的分解及合成图像，对其进行定量测定。3.优点一一.分辨率分辨率（0.1 8m）二二.可重构可重构样品的三品的三维结构构三三.无无损伤、连续光学切片光学切片四四.光光谱扫描描（分辨由光源波长，物镜参数和针孔直径等决定，如60X，NA1.4的物镜水平分辨率约为0.2 m，垂直分辨率约为0.5m。）（细菌细胞1-2 m，原核生物细胞1-10 m）优点4.共聚焦原理利用照明针孔和探测针孔实现点照明和探测，并且
3、被探测点位于焦平面。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即共焦点。共聚焦原理1.点照明（为作图方便已将光线发散角放大）共聚焦原理消除衍射影响消除背景杂光共聚焦原理焦平面上的像是最清晰的，从上面的图可以看出，非焦平面点所成 的像的光像被探测针孔挡住，不会进入光探头，所以焦平面点成像使像更清晰。共聚焦原理所以共聚焦成像方式可以很大的所以共聚焦成像方式可以很大的提高分辨率和成像提高分辨率和成像质量。量。5.扫描模式一.XY轴扫描二.Z轴扫描XY轴扫描（1）单光束扫描模式其中最常见的扫描安排结合了两个独立的扫描镜，具有中继光学系统。移动的垂直轴的反射镜即在试样上产生XY平面
4、的扫描。但中间需要增加高级别的像差校正光学系统，导致发光效率降低。XY轴扫描（1）单光束扫描模式XY轴扫描（2）多光束扫描XY 轴扫描奥林巴斯Fluo View300 激光共聚焦扫描系统Z轴扫描通常的方法是通过计算机控制的马达以预先设定的步距移动显微镜的镜台然后采集图像。（当然也有通过改变焦平面位置的方法）光学切片 通过精细平面光切，形成生物样品不同平通过精细平面光切，形成生物样品不同平面的精细图象，将一个连续的光切图象面的精细图象，将一个连续的光切图象Z Z轴轴重叠就可形成一个完整的三维图象重叠就可形成一个完整的三维图象6.整体结构7.应用激光扫描共聚焦显微镜的应用范围广泛，主要在于生物领域，包括多种神经解剖学和神经生理学的研究，广泛的细胞和组织的形态学研究，共振能量转移技术，干细胞研究，光漂白研究，荧光寿命成像，多光子显微镜，全内反射，DNA杂交，膜和离子探针，生物发光蛋白和抗原标记。说明每项功能有多种技术可以实现，只举出其中一种。原理只是简单介绍，实际远为复杂