《罗氏实时荧光定量PCR仪分解优秀PPT.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《罗氏实时荧光定量PCR仪分解优秀PPT.ppt（45页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、实时荧光定量PCR仪一、实时荧光定量一、实时荧光定量PCR的原理的原理荧光定量荧光定量 PCR通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对结果进行分析，计算待测样品的初始模板量。荧光定量荧光定量 PCR仪仪荧光定量PCR仪是一种带有激发光源和荧光信号检测系统的PCR仪，通常配有电脑系统及相应的分析软件。定量定量PCRPCR技术的产生技术的产生19921992年由年由HiguchiHiguchi等人第一次报告：运用等人第一次报告：运用EBEB内插染料内插染料法插至双链法插至双链DNADNA，经改装的带有冷，经改装的带有冷CCDCCD的
2、的PCRPCR仪仪检测样品的荧光强度检测样品的荧光强度PCRPCR循环循环=双链双链DNA=DNA=染料染料=荧光荧光后来用与双链后来用与双链DNADNA有更强结合力的有更强结合力的SYBR Green ISYBR Green I取取代代EBEB 荧光定量实时荧光定量实时PCR与一般与一般PCR的比较的比较实时在线监控实时在线监控 对样品扩增的整个过程进行实时监控，能对样品扩增的整个过程进行实时监控，能够实时地视察到产物的增加，直观地看到够实时地视察到产物的增加，直观地看到反应的对数期反应的对数期降低反应的非特异性降低反应的非特异性 运用引物和荧光探针同时与模板特异性结运用引物和荧光探针同时与
3、模板特异性结合，提高了合，提高了PCR反应的特异性反应的特异性增加定量的精确性增加定量的精确性 全程监控，精确的算法进行定量全程监控，精确的算法进行定量结果分析更加快捷便利，无需跑胶结果分析更加快捷便利，无需跑胶 罗氏产品介绍以及与同类产品之间的对比一、一、LC1.5和和LC2.0LightCycler荧光定量荧光定量PCR系统系统 LC1.5LC2.0Lightcycler 1.5 结构分析结构分析以空气加热及冷却快速变更温度带有极高表面积/容量比例的密封20l毛细管加热线圈可容纳32个样品的卡盘将荧光仪定位的分档器发动机将样品置于光学仪上的分档器发动机热室风扇滤器免维护的LED光源光学倍增
4、管Lightcycler 2.0 结构分析结构分析空气加热系统空气加热系统LED激发光源激发光源PMT检检测测系系统统光光纤纤热力学结构热力学结构特点：特点：1 1、空气加热、空气加热 2 2、毛细管反应体系、毛细管反应体系优点优点:1 1、升降温速度快（、升降温速度快（0.05 0.05 -20-20/秒），秒），2 2、体系均一，不存在边缘现象、体系均一，不存在边缘现象 3 3、把反应体系缩小到、把反应体系缩小到0-20ul0-20ul，节约试剂成本，节约试剂成本 实现快速实现快速PCRPCR光学结构特点：特点：1 1、免维护的、免维护的LEDLED冷光源，寿命长达冷光源，寿命长达2 2万
5、小时以上万小时以上2 2、光学倍增管（、光学倍增管（Rodenstock Rodenstock）3 3、多达、多达6 6通道（通道（LC2.0LC2.0）和）和3 3通道（通道（LC1.5LC1.5）实时检）实时检 测测优点：优点：1 1、毛细管光学特性将光线散射、衍射降至最低，、毛细管光学特性将光线散射、衍射降至最低，避开避开LED LED 功率低的问题功率低的问题2 2、免维护，带自动检验功能、免维护，带自动检验功能3 3、轻易实现内标、内比照及多重、轻易实现内标、内比照及多重PCRPCRLightCycler 结构分析结构分析激发光源激发光源激发光源激发光源 Rodenstock-Rod
6、enstock-LEDLED（发光二极（发光二极（发光二极（发光二极管）管）管）管）冷光源，免维护，开机可以马上进行操作。冷光源，免维护，开机可以马上进行操作。冷光源，免维护，开机可以马上进行操作。冷光源，免维护，开机可以马上进行操作。检测系统检测系统检测系统检测系统光学倍增管光学倍增管光学倍增管光学倍增管 (PMT)(PMT)灵敏度高，宽检验范围灵敏度高，宽检验范围灵敏度高，宽检验范围灵敏度高，宽检验范围,背景低，无边缘效应背景低，无边缘效应背景低，无边缘效应背景低，无边缘效应 加热方式加热方式加热方式加热方式空气加热空气加热空气加热空气加热管间差小，热传导速率管间差小，热传导速率管间差小，
7、热传导速率管间差小，热传导速率2020/秒，温控变化准确秒，温控变化准确秒，温控变化准确秒，温控变化准确（0.05-200.05-20/秒）。秒）。秒）。秒）。反应体系反应体系反应体系反应体系 两种石英玻璃毛两种石英玻璃毛两种石英玻璃毛两种石英玻璃毛细管体系细管体系细管体系细管体系(20ul (20ul 和和和和100ul)100ul)光学性好，反应体系小，节约试剂成本光学性好，反应体系小，节约试剂成本光学性好，反应体系小，节约试剂成本光学性好，反应体系小，节约试剂成本,适合多适合多适合多适合多种用途。种用途。种用途。种用途。检测光路范围检测光路范围检测光路范围检测光路范围 530nm,530
8、nm,555nm,555nm,610nm,610nm,640nm,640nm,670nm,710nm.670nm,710nm.六个波长，并解决相关荧光素荧光干扰问题六个波长，并解决相关荧光素荧光干扰问题六个波长，并解决相关荧光素荧光干扰问题六个波长，并解决相关荧光素荧光干扰问题 LightCycler 软件软件 4.0l l 更先进的自动定量方法更先进的自动定量方法l l全新的相对定量软件全新的相对定量软件l l全自动熔点曲线分组全自动熔点曲线分组l l全自动熔点温度提示全自动熔点温度提示l l简化数据和用户管理简化数据和用户管理PCRPCR领域最聪慧的革新领域最聪慧的革新领域最聪慧的革新领域
9、最聪慧的革新 LightCycler LightCycler荧光定量荧光定量荧光定量荧光定量PCRPCR系统系统系统系统l l超高速超高速 30 30至至4040分钟完成分钟完成PCRPCR过程过程l l实时在线监测实时在线监测 收集每一循环的数据并马上显示于联机电脑收集每一循环的数据并马上显示于联机电脑上上l l高灵敏高灵敏 在一个基因组当量中可检测出单基因在一个基因组当量中可检测出单基因拷贝拷贝l l范围广范围广 可检测可检测101010101010拷贝线性范围，无需拷贝线性范围，无需稀释样品稀释样品l l开放性开放性 全开放，成为国内外试剂厂家的首选全开放，成为国内外试剂厂家的首选开发平
10、台开发平台l l六个荧光通道六个荧光通道 轻易实现内标、内比照或多重轻易实现内标、内比照或多重PCRPCRl l最小化最小化 定量反应体积降至定量反应体积降至101020ul20ul，费用低，费用低廉廉l l敏捷性敏捷性 支持水解探针、杂交探针及支持水解探针、杂交探针及 SYBR SYBR Green IGreen Il l闭管分析闭管分析 消退污染风险消退污染风险Lightcycler 的分析模式适用于全部的通用探针及染料分析模式：适用于全部的通用探针及染料分析模式：适用于全部的通用探针及染料分析模式：适用于全部的通用探针及染料分析模式：SYBR Green I SYBR Green I（荧
11、光染料）（荧光染料）（荧光染料）（荧光染料）TaqManTaqMan（水解探针）（水解探针）（水解探针）（水解探针）Molecular beaconMolecular beacon（分子信标）（分子信标）（分子信标）（分子信标）LightcyclerLightcycler上开发独有的分析模式：上开发独有的分析模式：上开发独有的分析模式：上开发独有的分析模式：Hybridization Probe FormatHybridization Probe Format（杂交探针）（杂交探针）（杂交探针）（杂交探针）SimpleProbe SimpleProbe（单探针）（单探针）（单探针）（单探针）S
12、YBR-Green I 检测模式检测模式 SYBR Green I能选择性地与双链能选择性地与双链DNA结合，在外界光源激发下产生猛烈结合，在外界光源激发下产生猛烈荧光。在荧光。在PCR过程中，过程中，SYBR Green I可可与新合成地双链与新合成地双链DNA结合，产生地荧光结合，产生地荧光信号强度与双链信号强度与双链DNA含量成正比，荧光含量成正比，荧光检测在每一循环的延期后进行。检测在每一循环的延期后进行。SYBR Green I与非特异性双链与非特异性双链DNA（如引物二（如引物二聚体）结合产生的干扰可通过融解曲线聚体）结合产生的干扰可通过融解曲线分析而得到解决。分析而得到解决。水解
13、探针（水解探针（Taqman）检测模式）检测模式 同时标记有荧光发光分子和荧光淬灭分子同时标记有荧光发光分子和荧光淬灭分子的一条探针在激发光作用下，发光分子所产生的一条探针在激发光作用下，发光分子所产生的荧光可被淬灭分子吸取，因而检测不到荧光。的荧光可被淬灭分子吸取，因而检测不到荧光。在在PCR延长时，因延长时，因Taq酶具有的酶具有的5，3，核酸，核酸外切酶活性，可降解荧光探针，使荧光发光分外切酶活性，可降解荧光探针，使荧光发光分子与荧光淬灭分子分开，在外界光源激发下即子与荧光淬灭分子分开，在外界光源激发下即可发出荧光，荧光强度与可发出荧光，荧光强度与PCR扩增产物量有关。扩增产物量有关。分
14、子信标（分子信标（Molecular Beacon Probe）独特的颈环结构，由非特异的独特的颈环结构，由非特异的颈和特异的环组成，探针的颈和特异的环组成，探针的5端标端标记荧光分子，记荧光分子，3端端 标记一个吸取或标记一个吸取或淬灭荧光的分子淬灭荧光的分子。自身环化时仪。自身环化时仪器检测不到荧光，在器检测不到荧光，在PCR反应的退反应的退火阶段，探针因与模板链杂交而打火阶段，探针因与模板链杂交而打开，使开，使5端荧光分子与端荧光分子与3端吸取或端吸取或淬灭荧光的分子分开，仪器就会检淬灭荧光的分子分开，仪器就会检测到荧光信号。每一个循环，随着测到荧光信号。每一个循环，随着PCR扩增产物的
15、增加，荧光信号会扩增产物的增加，荧光信号会增加，从而依据荧光信号的增加来增加，从而依据荧光信号的增加来计算计算PCR扩增产物的增加量。扩增产物的增加量。杂交探针（HybProbe）检测模式 设计与检测区互补的分别带有不同染料标记的一对寡核苷酸（既杂交探针），在与扩增的DNA片断杂交时，两种染料相互接近。其中供体荧光染料受外来光源激发后，将能量传递给旁边的受体染料，既发生荧光共振能量转移（FRET），从而释放出受体染料分子的放射波长荧光信号。荧光信号的强度和DNA的产量成正比。其他非特异性产物由于不会与探针杂交，因而不产生信号干扰。AnnealingElongationEnd of Elonga
16、tionDenaturationFluoresceinLC Redfor sequence specific detection of DNA杂交探针检测罗氏专利性技术杂交探针检测罗氏专利性技术Template:Plasmid;Target:CycA;Detection Format:Hybridization ProbesStandard Calculated concentration9.522E+91.024E+99.433E+71.127E+71.029E+69.902E+41.021E+49.217E+29.276E+11.085E+1H2O1.0E+101.0E+91.0E+81.
17、0E+71.0E+61.0E+51.0E+41.0E+31.0E+21.0E+1H2O杂交探针的优点：杂交探针的优点：1.灵敏度高灵敏度高2.宽动力学范围宽动力学范围3.特异性高特异性高4.可用于突变分析可用于突变分析Monitoring of PCR with the LightCyclerUsing Hybridization Probes 专用于SNP基因分型和突变检测的 SimpleProbe SimpleProbe作为一种独特的杂交探针只含有一条寡核苷酸探针，能够特异性的与目的基因上含有SNP位点的靶序列结合。探针与靶序列结合后，释放出能够被检测到的荧光信号，通过对熔点曲线分析中探针
18、释放的荧光信号强度的分析，可以得到对目的基因的多态位点的精确分析结果。Denaturation phaseDenaturation phase:SimpleProbe free in solution;emission of reporter dye is quenchedSimpleProbe free in solution;emission of reporter dye is quenchedAnnealing phaseAnnealing phase:Fluorescence from reporter dye increases when probe is annealed to
19、its Fluorescence from reporter dye increases when probe is annealed to its complementary targetcomplementary target553-p3-pQ QR R3355primerprimer553-p3-pQ QR RNew Probe Format:SimpleProbe FormatNew Probe Format:SimpleProbe Format-高效低成本的新型探针高效低成本的新型探针R=Reporter(Fluorescein)Q=Quencher荧光定量PCR仪的部分应用l l医
20、学相关探讨医学相关探讨医学相关探讨医学相关探讨 l l疾病的临床早期诊断疾病的临床早期诊断疾病的临床早期诊断疾病的临床早期诊断l l病原体的含量检测病原体的含量检测病原体的含量检测病原体的含量检测l l合理用药分子水平的疗效探讨合理用药分子水平的疗效探讨合理用药分子水平的疗效探讨合理用药分子水平的疗效探讨 l l疾病的发病监控探讨疾病的发病监控探讨疾病的发病监控探讨疾病的发病监控探讨 l l肿瘤相关基因肿瘤、耐药基因的检测肿瘤相关基因肿瘤、耐药基因的检测肿瘤相关基因肿瘤、耐药基因的检测肿瘤相关基因肿瘤、耐药基因的检测l l探讨组织或培育细胞中探讨组织或培育细胞中探讨组织或培育细胞中探讨组织或培
21、育细胞中mRNAmRNA的表达水平的表达水平的表达水平的表达水平l l 各种处理对细胞各种处理对细胞各种处理对细胞各种处理对细胞mRNAmRNA含量变更的影响含量变更的影响含量变更的影响含量变更的影响l l 比较染病组织与正常组织中各种比较染病组织与正常组织中各种比较染病组织与正常组织中各种比较染病组织与正常组织中各种mRNAmRNA含量差异含量差异含量差异含量差异l lDNADNA或或或或RNARNA的转染量与试验结果关系的探讨的转染量与试验结果关系的探讨的转染量与试验结果关系的探讨的转染量与试验结果关系的探讨l l基因分型及基因分型及基因分型及基因分型及SNPSNP分析分析分析分析l l转
22、基因动物及植物探讨转基因动物及植物探讨转基因动物及植物探讨转基因动物及植物探讨重点问题说明重点问题说明 超高速的热循环超高速的热循环 由于接受空气快速变更温由于接受空气快速变更温度，以及利用有高表面积度，以及利用有高表面积/体积比的光学玻璃毛体积比的光学玻璃毛细管模式，使升降温速度最高可达细管模式，使升降温速度最高可达2020/秒，温秒，温控控 0.2 0.2 ，每每20203030分钟便能完成分钟便能完成30304040个个循环。循环。升降温数率唯一可调升降温数率唯一可调可以依据试验的须要可以依据试验的须要调整升降温速率的系统调整升降温速率的系统0.0520 0.0520 /秒，优化试秒，优
23、化试验。验。配套功能强大的分析软件：配套功能强大的分析软件：（1 1）确定定量（具）确定定量（具“单点定标单点定标”功能）功能）（2 2）相对定量（可进行效率校正）相对定量（可进行效率校正）（3 3）自动基因分型（）自动基因分型（SNPSNP）（4 4）颜色干扰校正颜色干扰校正 独特的熔点曲线分析功能，可进一步作独特的熔点曲线分析功能，可进一步作PCRPCR后分析：后分析：-检测非特异扩增并作矫正检测非特异扩增并作矫正 -鉴别基因型而又无需接受测序凝胶鉴别基因型而又无需接受测序凝胶 -检测点突变，并可利用双色检测及颜色补偿软检测点突变，并可利用双色检测及颜色补偿软 件在同件在同 一反应中分析较
24、困难的突变一反应中分析较困难的突变 为什么运用为什么运用DNase-Free&RNase-Free DNase-Free&RNase-Free 的光学玻璃的光学玻璃 毛细管毛细管?玻璃反应管可加快热传导速率玻璃反应管可加快热传导速率.毛细管增加表面积毛细管增加表面积/体积比，确保空气和反应成分之间的体积比，确保空气和反应成分之间的 温度快速平衡，温度均一温度快速平衡，温度均一.缩短了缩短了PCRPCR反应时间，特殊是荧光激发的时间，保证了反应时间，特殊是荧光激发的时间，保证了 反应成分的稳定性，尤其是荧光染料的稳定性。反应成分的稳定性，尤其是荧光染料的稳定性。缩小反应体系，缩小反应体系，降低检
25、测成本。降低检测成本。光学玻璃毛细管的材料适合荧光讯号的测定，类似光纤光学玻璃毛细管的材料适合荧光讯号的测定，类似光纤 的形态，保证荧光讯号的精确捕获。没有边缘效应的形态，保证荧光讯号的精确捕获。没有边缘效应.LightCycler/毛细管/试剂的成本核算 仪器的维护费用 LightCycler是免维护的仪器,接受的光源是一般的发光二极管，寿命长达20000小时以上，特别稳定，价格低廉。而卤素灯光源，寿命2000020000小时小时。卤素灯。寿命短，卤素灯。寿命短，需预热，寿命需预热，寿命20002000小时。小时。LEDLED（发光二极管）（发光二极管）,每一个孔位一个独每一个孔位一个独立的
26、激发光源和检立的激发光源和检测装置测装置 。LightCyclerLightCycler光源无需定期光源无需定期更换，稳定方便，光路相更换，稳定方便，光路相同，样本误差最小，节约同，样本误差最小，节约成本。成本。加热方式加热方式 空气加热，温控变化准确空气加热，温控变化准确（0.40.4）半导体加热制冷半导体加热制冷（温控（温控0.50.5）半导体加热制冷半导体加热制冷（温控（温控0.50.5）LightCyclerLightCycler变温速度快，变温速度快，温控精确温控精确 。升降温速升降温速度度热传导速率热传导速率2020/秒，秒，（0.05-200.05-20/秒秒)热传导速率热传导速
27、率2.52.5/秒秒 热传导速率热传导速率2.52.5/秒秒 LightCyclerLightCycler升降温速度快，升降温速度快，并可调节并可调节 运行时间运行时间 30304040分钟分钟 2 23 3小时小时 1.51.52.52.5小时小时 LightCyclerLightCycler检测时间短，检测时间短，快速出结果，应用最灵活快速出结果，应用最灵活 单点定标单点定标功能功能软件可支持单点定标功能软件可支持单点定标功能 无无 无无 LightCyclerLightCycler每次实验节约每次实验节约反应管和反应试剂反应管和反应试剂4 45 5份，份，且单点拟合确保实验结果且单点拟合
28、确保实验结果 反应管反应管反应体系反应体系(定量定量)石英玻璃毛细管石英玻璃毛细管10-20ul10-20ul薄壁塑料管薄壁塑料管50ul50ul100 ul100 ul专用薄壁塑料管专用薄壁塑料管50ul50ul100 ul100 ul石英玻璃管荧光检测灵敏石英玻璃管荧光检测灵敏度好，导热快度好，导热快,试剂用量省试剂用量省 项项项项 目目目目 ROCHE ROCHE LightCycler 1.5LightCycler 1.5 ABI ABI ABI 7300 ABI 7300 MJ MJ OPTICON I OPTICON I 备备备备 注注注注 光路波长光路波长及荧光接及荧光接收模式收
29、模式530nm,640nm,710nm.530nm,640nm,710nm.并并解决相关荧光素荧光干解决相关荧光素荧光干扰问题，光电杂合模式扰问题，光电杂合模式 4 4通道，无颜色补偿功通道，无颜色补偿功能能,CCD,CCD镜头模式镜头模式(需使需使用用RoxRox染料进行校正染料进行校正,占占用一个通道用一个通道,实际只有实际只有3 3个通道可用个通道可用)1 1通道，无颜色补通道，无颜色补偿功能偿功能,96,96个个LEDLED光光源分别检测源分别检测LightCyclerLightCycler检测波长经过检测波长经过优化，检测范围广泛，优化，检测范围广泛，通道间相距较远，干扰通道间相距较
30、远，干扰最小，而且通过颜色补最小，而且通过颜色补偿功能可将干扰降偿功能可将干扰降到最低程度到最低程度检测方式检测方式 实时检测实时检测在线观测（每一循环光在线观测（每一循环光强度变化，温度变化，强度变化，温度变化，反应时间均可观测）反应时间均可观测）实时检测实时检测在线观测在线观测实时检测实时检测在线观测在线观测LightCyclerLightCycler可实时检测整可实时检测整个个PCRPCR过程，也能在过程，也能在PCRPCR运行中根据试验需要进运行中根据试验需要进行实验条件的调节行实验条件的调节,使用使用灵活灵活.试剂定量试剂定量方法方法Hybridizationprobes(Hybri
31、dizationprobes(杂杂交探针交探针):():(定量和熔点定量和熔点曲曲线分析，扩增范围线分析，扩增范围100-100-1000bp1000bp）TaqMan TaqMan 探针探针SYBRGREEN ISYBRGREEN I 分子航标分子航标TaqManTaqMan探针（定量，探针（定量，解链曲线分析解链曲线分析,扩增范扩增范围围50-150bp50-150bpSYBRGREEN ISYBRGREEN I 分子航标分子航标TaqManTaqMan探针（定探针（定量，解链曲线分析量，解链曲线分析,扩增范围扩增范围50-150bp50-150bpSYBRGREEN ISYBRGREEN
32、 I 分子航标分子航标LightCyclerLightCycler使用的荧光检使用的荧光检测模式最多，对于各种测模式最多，对于各种临床检测和科研实验，临床检测和科研实验，应用最为广泛应用最为广泛 动力学范动力学范围围10X 10X 7X 7X 7X 7X LightCyclerLightCycler检测线性范围检测线性范围广泛，无需特别处理样广泛，无需特别处理样本本 LC2.0与同质产品的对比项项项项 目目目目 ROCHE ROCHE LightCycler 2.0LightCycler 2.0 ABI ABI ABI 7500 ABI 7500 MJ MJ OPTICON OPTICON 备
33、备备备 注注注注 反应管反应管反应体系反应体系(定量定量)石英玻璃毛细管石英玻璃毛细管10-100ul10-100ul薄壁塑料管薄壁塑料管50ul50ul100 ul100 ul专用薄壁塑料管专用薄壁塑料管50ul50ul100 ul100 ul石英玻璃管荧光检测灵敏度石英玻璃管荧光检测灵敏度好，导热快好，导热快,试剂用量省试剂用量省 光路波长光路波长及荧光接及荧光接收模式收模式六通道，六通道，530nm,560nm,530nm,560nm,610nm,640nm,670nm,610nm,640nm,670nm,710nm.710nm.并解决相关荧光并解决相关荧光素荧光干扰问题，光电素荧光干扰
34、问题，光电杂合模式杂合模式五通道，无颜色补五通道，无颜色补偿功能偿功能,CCD,CCD镜头模镜头模式式(使用的探针染料使用的探针染料增加增加)2 2通道，无颜色补通道，无颜色补偿功能偿功能,96,96个个LEDLED光源分别检测光源分别检测LightCyclerLightCycler检测波长经过优检测波长经过优化，检测范围广泛，通道间化，检测范围广泛，通道间相距较远，干扰最小，而且相距较远，干扰最小，而且通过颜色补偿功能可将干扰通过颜色补偿功能可将干扰降到最低程度降到最低程度二、二、LC480LightCycler480实时荧光定量PCR系统 高灵敏高灵敏 可检测单拷贝基因可检测单拷贝基因动力
35、学范围广动力学范围广 可检测可检测101010个拷贝个拷贝高重复性高重复性 重复性高，重复性高，CV0.3高辨别率高辨别率 轻松区分轻松区分1000拷贝以下拷贝以下2倍浓度差异倍浓度差异高速高速 40分钟完成分钟完成40个个PCR循环循环技术创新技术创新 接受接受Therma-BaseTM热循环专利技术热循环专利技术 和先进的光学检测系和先进的光学检测系 统，彻底消退边缘效应，保持稳定优异的检测结果。统，彻底消退边缘效应，保持稳定优异的检测结果。敏捷敏捷 分析模式多样，确定定量，相对定量，融解曲线分析等几乎分析模式多样，确定定量，相对定量，融解曲线分析等几乎 适用全部的检测模式（适用全部的检测
36、模式（SYBR Green，Taqman Probe，Hybprobe，SimpleProbe等）等）模块化模块化 可互换的可互换的96孔，孔，384孔加热模块，用户可以自助更换模块，孔加热模块，用户可以自助更换模块，不须要工程师到场不须要工程师到场自动化平台自动化平台 配以配以LIMS系统及自动进样机械臂，可实现远程操作及全系统及自动进样机械臂，可实现远程操作及全 自动化运作自动化运作用户界面友好用户界面友好 软件直观简洁，易操作软件直观简洁，易操作LightCycler480系统主要特点系统主要特点LightCycler480系统主要参数温度控制温度控制373795 95 最大升温速率最大
37、升温速率4.8 4.8 最大降温速率最大降温速率2.5 2.5 激发光源激发光源标准氙灯标准氙灯检测装置检测装置冷冷CCDCCD滤镜滤镜激发波长（激发波长（nmnm）：）：450450，483483，523523，558558，615 615 发射波长（发射波长（nmnm）：）：500500，533533，568568，610610，640640，670670软件功能软件功能绝对定量、绝对定量、Tm callingTm calling、含效率校正的相对定量、基因分型、含效率校正的相对定量、基因分型、产物鉴定等。产物鉴定等。创新的创新的PCR热循环模块设计热循环模块设计Therma-BaseTM
38、 是一个内壁布满灯芯状毛细管结构的腔体，通过一系列的冷凝合蒸发，Therma-BaseTM 高效地传递热量，从而实现整板最大的温度均一性。Therma-BaseTM核心优势核心优势 优异的空间温度均一性优异的空间温度均一性 快速、精确的温度调控快速、精确的温度调控 40个循环个循环40分钟分钟(384孔板孔板)先进独特的光学系统先进独特的光学系统 LC480 LC480系统运用宽光谱、高强度的氙灯作为光源。激发光经过多次反射后形成与系统运用宽光谱、高强度的氙灯作为光源。激发光经过多次反射后形成与孔板大小相同、光强均一的光柱，有效消退边缘效应。激发波长和放射波长的随意孔板大小相同、光强均一的光柱
39、，有效消退边缘效应。激发波长和放射波长的随意组合，使得多种荧光染料和检测模式可用于目前全部的实时荧光定量组合，使得多种荧光染料和检测模式可用于目前全部的实时荧光定量PCRPCR试验。试验。LC480 LC480光学系统的核心优势：光学系统的核心优势：最敏捷地选择荧光染料及检测模式最敏捷地选择荧光染料及检测模式 整板数据的精确捕获整板数据的精确捕获 强大的多重强大的多重PCRPCR实力实力 多检测通道支持全部的检测模式多检测通道支持全部的检测模式 LightCycler 480系统支持目前全部检测系统支持目前全部检测模式的运用，包括杂交探针、模式的运用，包括杂交探针、SYBR Green I D
40、NA结合染色、单探针、水解探结合染色、单探针、水解探针和分子信标等等。多色荧光检针和分子信标等等。多色荧光检测系统，供应五色激发通道（测系统，供应五色激发通道（450 nm,483 nm,523 nm,558 nm,615 nm）和六色荧）和六色荧光检测通道（光检测通道（500 nm,533 nm,568 nm,610 nm,640 nm,670 nm）,并具有颜色补偿并具有颜色补偿功能；可自由选择，轻松实现多重或多色功能；可自由选择，轻松实现多重或多色PCR。公认的性能独特的软件公认的性能独特的软件 基于用户公认的基于用户公认的LC480LC480软件，新的软件，新的LC480LC480软件
41、接受罗氏独特的算法来软件接受罗氏独特的算法来进行高度精确、自动化的数据分析。而且，新软件还供应了很多新的的进行高度精确、自动化的数据分析。而且，新软件还供应了很多新的的特性，让用户能够轻松、省时地处理高通量的试验数据。特性，让用户能够轻松、省时地处理高通量的试验数据。LC480 LC480软件设计宗旨是为了用户需求量身定做。支持确定定量、融解软件设计宗旨是为了用户需求量身定做。支持确定定量、融解曲线分析、相对定量和自动基因分型等功能。曲线分析、相对定量和自动基因分型等功能。LC480 LC480软件的核心优势：软件的核心优势：接受公认的优秀算法来分析数据接受公认的优秀算法来分析数据友好的用户界
42、面，简洁的快捷方式，便于进行高通量样品编辑及数据处理。友好的用户界面，简洁的快捷方式，便于进行高通量样品编辑及数据处理。软件模块化，用户可依据自己的探讨状况选择性安装。软件模块化，用户可依据自己的探讨状况选择性安装。模块系统概念 LightCycler 480 LightCycler 480在系统初始配置的基础上，还可在系统初始配置的基础上，还可依据客户的特殊要求，通过在系统中添加各种先依据客户的特殊要求，通过在系统中添加各种先进的软件分析模块进行系统升级，满足用户不同进的软件分析模块进行系统升级，满足用户不同阶段的探讨需求。目前可供应的系统模块包括：阶段的探讨需求。目前可供应的系统模块包括：
43、定性检测定性检测 确定定量分析确定定量分析 相对定量分析相对定量分析 统计分析工具统计分析工具 基因分型探讨基因分型探讨良好的兼容性 LightCycler 480可顺当实现与现有试验室系统联结，包括LIMS或是与自动装载微孔板的工作站联用实现全流程的自动化操作。LightCycler 480系统增加流程管理及数据管理的实力：实现真正的自动化流程现代化的软件设计思路，可与LIMS连接兼容性符合数据管理要求（21 CFR-11条款）LightCycler 480系统自动扮装板过程 LightCycler480 与与ABI 7900 HT 对比对比LightCycler480LightCycler
44、480ABI 7900 HTABI 7900 HTPCRPCR专利专利 RocheRoche拥有临床和科研领域拥有临床和科研领域PCRPCR专利专利 ABIABI从从RocheRoche仅获得科研领域仅获得科研领域PCRPCR使用授权使用授权 光源光源 氙光源，光源发光波长更广范，强度更强，使氙光源，光源发光波长更广范，强度更强，使得灵敏度达到最大化，通过折叠光路系统，激得灵敏度达到最大化，通过折叠光路系统，激发光垂直射入每个反应孔位，使各孔位光强均发光垂直射入每个反应孔位，使各孔位光强均一化，解决边缘效应。一化，解决边缘效应。氩离子激光光源，顶部激发光，各孔位有氩离子激光光源，顶部激发光，各
45、孔位有光程差，具有边缘效应，需加入校正试剂光程差，具有边缘效应，需加入校正试剂光路波长光路波长 450nm450nm、483nm483nm、523nm523nm、558nm558nm、615nm615nm五色五色荧光荧光488nm488nm（单一激发光波长，对很多荧光素不（单一激发光波长，对很多荧光素不适用）适用）检测系统检测系统 CCDCCD成像系统，成像系统，500nm500nm、533nm533nm、568 nm568 nm、610nm610nm、640nm640nm、670nm670nm六个检测通道，具有颜六个检测通道，具有颜色补偿功能，解决荧光素干扰问题。色补偿功能，解决荧光素干扰问
46、题。CCD CCD 成像系统，通过光栅在成像系统，通过光栅在500500660nm660nm连连续检测。无颜色补偿功能。（采用普通续检测。无颜色补偿功能。（采用普通TaqManTaqMan探针技术只能进行双色或三色实验）探针技术只能进行双色或三色实验）加热方式加热方式 采用采用therma-basetherma-base专利技术的半导体加热，解决专利技术的半导体加热，解决模块加热的边缘效应，保证每个孔位受热的均模块加热的边缘效应，保证每个孔位受热的均一性。一性。半导体加热，热传导最高速率半导体加热，热传导最高速率3 3/秒，加热秒，加热模块具有边缘效应，中心与周边孔位受热模块具有边缘效应，中心
47、与周边孔位受热不均一不均一加热模式加热模式 *96*96孔孔/384/384孔模块式加热。孔模块式加热。*加热模块更换简便，样本加热模块与相应加热模块更换简便，样本加热模块与相应 热盖成套更换，温控效果更佳，无需进行荧热盖成套更换，温控效果更佳，无需进行荧 光素校正。光素校正。*384*384孔模块升孔模块升(降降)温最高速率温最高速率6.3(3.5)6.3(3.5)/s/s*96*96孔模块升孔模块升(降降)温最高速率温最高速率4.8(2.5)4.8(2.5)/s/s*标准模块标准模块(96/384)(96/384)和快速模块和快速模块(96)(96)。*96/384*96/384模块更换时
48、只更换样本模块，使用模块更换时只更换样本模块，使用 同一热盖，更换模块后需要对各种荧光同一热盖，更换模块后需要对各种荧光 素进行校正。素进行校正。*标准模式升降温最高速率标准模式升降温最高速率1.61.6/s/s*快速反应模式升降温最高速率快速反应模式升降温最高速率3.53.5/s/s*9600*9600模式升温模式升温0.80.8/s/s，降温，降温1.61.6/s/s 运行时间运行时间 60min(96 well-plate)60min(96 well-plate)，40min(384 well-plate)40min(384 well-plate)(3steps(3steps，40cyc
49、les)40cycles)标准模式标准模式(2steps(2steps，40cycles)40cycles)：120min 120min 9696孔快速模式孔快速模式(2steps(2steps，40cycles)40cycles)：35min35min(需减小反应体积、专用的反应管耗材和试需减小反应体积、专用的反应管耗材和试剂剂)反应体系反应体系 9696孔板孔板/384/384孔板，封样膜光学透性好。孔板，封样膜光学透性好。5-5-20uL(38420uL(384孔孔)，20-100uL(9620-100uL(96孔孔)薄壁塑料薄壁塑料PCRPCR反应管，反应管，20-100ul 20-1
50、00ul 标本数量及检标本数量及检测能力测能力384384个个/PCR/PCR，1111次次/天最多检测天最多检测42244224个标本个标本 9696个个/PCR/PCR，1111次次/天（快速模式）最多检天（快速模式）最多检测测10561056个标本个标本384384个个/PCR/PCR，3 3次次/天最多检测天最多检测11521152个标本个标本试剂定量方法试剂定量方法 Hybridization probes(Hybridization probes(杂交探针杂交探针):():(定量和定量和熔点曲线分析）、熔点曲线分析）、TaqMan TaqMan 探针、探针、SYBR SYBR GR