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1、 股份公司生产技术部股份公司生产技术部2006-10-9试验室操作1、试验室的设计、试验室的设计2、卫生、卫生3、规范操作、规范操作一、试验室的设计一、试验室的设计看看以下儿张图片，有一个简洁、直观的映象看看以下儿张图片，有一个简洁、直观的映象二、卫生二、卫生1、仪器的清洗、仪器的清洗2、室内卫生、室内卫生3、室外卫生、室外卫生仪器的清洗 仪器清洗是否干净干脆关系到试验室各项工作的顺当进行。如玻片没洗干净，精检时，精液中杂质增加、死精增加，活力下降、从而误认为公猪出现问题。从反面来说，当公猪精检突然出现问题时，作为试验室人员，先查查蒸馏水是不是换了；清洗仪器的水有没有不正常的现象；清洗仪器的人
2、是不是换了新手等。当试验室内全部的可能都解除了以后，再反映到公猪舍，近段时间有没有实行什么措施。室内卫生室内要求：室内要求：每天一小扫，每天一小扫，每周一大扫每周一大扫。室外卫生室外卫生 室外要求每月清扫、消毒一室外要求每月清扫、消毒一次，消毒需在精液都放入冰箱或次，消毒需在精液都放入冰箱或是都发出去以后才进行，因为大是都发出去以后才进行，因为大部分的消毒药对精子有很强的杀部分的消毒药对精子有很强的杀伤力。伤力。规范操作1、采精杯的制作、保温；-37度2、精检3、1：1稀释；-尽快稀释，避开降温打击4、分阶段稀释；-避开高倍稀释打击5、分装；-稳定后再分装，防震6、保存；-避开精子聚积7、运输
3、。-防震、保温。规范操作规范操作 采精杯的制作采精杯的制作1、采精杯的制备：先在保温杯内衬一、采精杯的制备：先在保温杯内衬一只一次性食品袋，再在杯口覆一层过滤只一次性食品袋，再在杯口覆一层过滤纸，用橡皮筋固定，要松一些，使其能纸，用橡皮筋固定，要松一些，使其能沉入沉入2cm左右。制好后放在左右。制好后放在37C恒温箱恒温箱备用。备用。2、冬天温度较低，为了保证采精杯内、冬天温度较低，为了保证采精杯内温度达到温度达到37度，采精杯盖与杯分开放置，度，采精杯盖与杯分开放置，采精时，盖好再发出公猪舍。采精时，盖好再发出公猪舍。规范操作规范操作 精检精检1、精检包括：采精量、密度、活力、颜色、精检包括
4、：采精量、密度、活力、颜色、气味、畸型率等。气味、畸型率等。2、精液量、精液量：后备公猪的射精量一般为：后备公猪的射精量一般为150200毫升，成年公猪为毫升，成年公猪为200600毫升，称重量毫升，称重量算体积，算体积，1克计为克计为1毫升。毫升。3、颜色：正常精液的颜色为乳白色或灰白色。、颜色：正常精液的颜色为乳白色或灰白色。假如精液颜色有异样，则说明精液不纯或公假如精液颜色有异样，则说明精液不纯或公猪有生殖道病变，凡发觉颜色有异样的精液，猪有生殖道病变，凡发觉颜色有异样的精液，均应弃去不用。同时，对公猪进行检查，然均应弃去不用。同时，对公猪进行检查，然后对症处理、治疗。（有爱好可以做一下
5、保后对症处理、治疗。（有爱好可以做一下保存）存）规范操作规范操作 精检精检4、气味：、气味：正常的公猪精液具有其特有的微腥正常的公猪精液具有其特有的微腥味，无腐败恶臭气味。有特殊臭味的精液一般味，无腐败恶臭气味。有特殊臭味的精液一般混有尿液或其它异物，一旦发觉，不应留用。混有尿液或其它异物，一旦发觉，不应留用。并检查采精时是否有失误，以便下次订正做法。并检查采精时是否有失误，以便下次订正做法。5、密度、密度 指每毫升精液中含有的精子数，它是指每毫升精液中含有的精子数，它是用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪的精子密度为的精子密度为2.03.0亿毫升，
6、有的高达亿毫升，有的高达5.0亿个精子亿个精子/毫升。检查精子密度的方法常用以毫升。检查精子密度的方法常用以下两种：密度仪测量，用计数板测量。下两种：密度仪测量，用计数板测量。规范操作规范操作 计数板计算密度计数板计算密度红细胞计数法：该法最精确，但速度慢，其具红细胞计数法：该法最精确，但速度慢，其具体操作步骤为：体操作步骤为：用不同的微量取样器分别取具有代表性的原精用不同的微量取样器分别取具有代表性的原精100微升和微升和3%的的KCl溶液溶液900微升，混匀。在微升，混匀。在计数板的计数室上放一盖玻片，取少量上述混计数板的计数室上放一盖玻片，取少量上述混合精液放入计数板槽中。在高倍显微下计
7、数合精液放入计数板槽中。在高倍显微下计数5个中方格内精子的总数，将该数乘以个中方格内精子的总数，将该数乘以50万即得万即得原精液的精子密度。原精液的精子密度。规范操作规范操作-精检精检 50万的来由万的来由在计数板上会标有“1/400”的字样，这是表示一个小方格的面积S1=1/400mm2；计数板的高度为H1=0.1mm；从以上两项则得出：一个计数室的体积为：V1=1/400 mm216（一个中方格有16个小方格）25（一个计数室有25个中方格）0.1mm=0.1mm3；假定我们数5个中方格的总精子数为n个；则一个计数室的总精数为5n；1ml=1cm3=（10mm）3=103mm3=104V1
8、；则V1=10-4 ml我们现在计算出1：10稀释后的密度（即1 ml内有多少个精子）：C1=5n个/10-4 ml=5n104个；原精的密度C=10C1（原精通过1：10稀释做成计数板）=5n105个 =50万n=0.005亿n所以我们1：10稀释做计数板，则数出5个中方格的总精数乘以0.005则得出该份精液原精的密度。假如我们是1：20倍稀释则应乘以0.01，似此类推。规范操作规范操作 精检精检6、精子活力、精子活力 精子活力的凹凸与受配母猪的受胎率精子活力的凹凸与受配母猪的受胎率和产仔数有较大的关系。因此，每次采精后及运用和产仔数有较大的关系。因此，每次采精后及运用精液前，都要进行活力的
9、检查，检查精子活力前必精液前，都要进行活力的检查，检查精子活力前必需运用需运用37左右的保温板预热：一般先将载玻片放左右的保温板预热：一般先将载玻片放在在38保温板上预热保温板上预热2至至3分钟，再滴上分钟，再滴上1小滴精液，小滴精液，盖上盖玻片，然后在显微镜下进行视察。精子活力盖上盖玻片，然后在显微镜下进行视察。精子活力一般接受一般接受10级制，即在显微镜下视察一个视野内作级制，即在显微镜下视察一个视野内作直线运动的精子数，若有直线运动的精子数，若有90%的精子呈直线运动则的精子呈直线运动则其活力为其活力为0.9；有；有80%呈直线运动，则活力为呈直线运动，则活力为0.8；依次类推。簇新精液
10、的精子活力以高于依次类推。簇新精液的精子活力以高于0.7为正常，为正常，稀释后的精液；当活力低于稀释后的精液；当活力低于0.65时，则弃去不用。时，则弃去不用。规范操作规范操作 精检精检 7、畸型率：畸形精子包括巨型、短小、断尾、断头、顶体脱落、有原生质滴、大头、双头、双尾、折尾等精子。它们一般不能作直线运动，受精实力差，但不影响精子的密度。公猪的畸形精子率一般不能超过18%，否则应弃去。采精公猪要求每两周检查一次畸形率。规范操作规范操作 精检精检 畸型精子图畸型精子图精子形态精子形态规范操作规范操作 稀释稀释 精液稀释的目的精液稀释的目的1、扩大精液的体积：经稀释后一次采得的精液可、扩大精液
11、的体积：经稀释后一次采得的精液可供供1030头母猪配种。头母猪配种。2、供应精子生存所需的养分物质：精子一旦形成，、供应精子生存所需的养分物质：精子一旦形成，只能消耗四周介质中的养分物质来维持其活动。只能消耗四周介质中的养分物质来维持其活动。3、使精子休眠，延长其存活时间和受精实力：弱、使精子休眠，延长其存活时间和受精实力：弱酸性的环境能抑制其活动，弱碱性的环境则促进酸性的环境能抑制其活动，弱碱性的环境则促进精子的活动，所以稀释液要求呈弱酸性以抑制其精子的活动，所以稀释液要求呈弱酸性以抑制其运动，延长其寿命。运动，延长其寿命。4、抑制精液中有害微生物的活动和繁殖，削减母、抑制精液中有害微生物的
12、活动和繁殖，削减母猪因配种感染疾病的机会。如精液稀释液中常用猪因配种感染疾病的机会。如精液稀释液中常用抗生素有青霉素与链霉素。抗生素有青霉素与链霉素。5、便于精子的保存和运输。、便于精子的保存和运输。规范操作规范操作 稀释稀释 稀释液的配制稀释液的配制 1、配制稀释剂要用精密电子天平，不得、配制稀释剂要用精密电子天平，不得更改稀释液的配方或将不同的稀释液随更改稀释液的配方或将不同的稀释液随意混合。配制好后应先放置意混合。配制好后应先放置1小时以上才小时以上才用于稀释精液，液态稀释液在用于稀释精液，液态稀释液在4冰箱中冰箱中保存不超过保存不超过24小时，超过贮存期的稀释小时，超过贮存期的稀释液应
13、废弃。抗生素的添加，应在稀释精液应废弃。抗生素的添加，应在稀释精液前加入到稀释液里，太早易失去效果。液前加入到稀释液里，太早易失去效果。规范操作规范操作 稀释稀释 稀释液的配制稀释液的配制2、所用药品要求选用分析纯，对含有结晶水的试、所用药品要求选用分析纯，对含有结晶水的试剂按摩尔浓度进行换算。剂按摩尔浓度进行换算。3、按稀释液配方，用称量纸和电子天平按、按稀释液配方，用称量纸和电子天平按1000ml和和2000ml剂量精确称取所需药品，称好剂量精确称取所需药品，称好后装于密闭袋中。后装于密闭袋中。4、运用、运用1小时前将称好的稀释剂溶于定量的双蒸小时前将称好的稀释剂溶于定量的双蒸水中，用磁力
14、搅拌器加速其溶解。水中，用磁力搅拌器加速其溶解。5、如有杂质须要用滤纸过滤。、如有杂质须要用滤纸过滤。6、稀释液配好后刚好贴上标签，标明品名、配制、稀释液配好后刚好贴上标签，标明品名、配制时间和经手人等。时间和经手人等。7、放在水浴锅内进行预热，以备运用、放在水浴锅内进行预热，以备运用8、细致检查配好的稀释液，发觉问题刚好订正。、细致检查配好的稀释液，发觉问题刚好订正。规范操作规范操作-稀释稀释 稀释时留意事项稀释时留意事项1、稀释精液必需在恒温环境中进行，避开精液温度的急剧下降。2、稀释时，严禁太阳光直射精液，阳光对精子有极强的杀伤力。3、稀释液应在采精前准备好，并预热。且保持有两至三个温度
15、剃度，以便采集后能尽快稀释。4、尽快1：1稀释。5、备用两根温度，一根测精液温度，一根测稀释液温度，且应校正好。6、避开高倍打击。7、等温稀释时，必需以精液的温度为标准来调整稀释液的温度，不行逆操作。规范操作规范操作-稀释稀释 稀释稀释1、精液采集过来后，称采精量，测密度，视、精液采集过来后，称采精量，测密度，视察颜色、气味，检查活力，做好记录，察颜色、气味，检查活力，做好记录，1：1稀稀释。释。2、精液一拿过来，就应把温度计放入精液中，、精液一拿过来，就应把温度计放入精液中，以最快的速度测出精液的温度。以最快的速度测出精液的温度。3、由于用计数板计算密度比较慢，则可以依、由于用计数板计算密度
16、比较慢，则可以依据精液的颜色与显微镜下视察到精液的密度先据精液的颜色与显微镜下视察到精液的密度先作或许稀释（作或许稀释（80%稀释稀释）。当密度计算出来后，）。当密度计算出来后，再稀释到最终。再稀释到最终。4、逐步稀释到最终。、逐步稀释到最终。规范操作规范操作 分分 装装以前没运用过的精液瓶和输精管，应先检查以前没运用过的精液瓶和输精管，应先检查其对精子的毒害作用如何。运用的瓶子和管其对精子的毒害作用如何。运用的瓶子和管子必需为对精子无毒害作用的塑料制品。子必需为对精子无毒害作用的塑料制品。稀释好精液后，先检查精子的活力，活力无稀释好精液后，先检查精子的活力，活力无明显下降则可进行分装。明显下
17、降则可进行分装。按每头份按每头份60-80ml进行分装。假如精液须要运进行分装。假如精液须要运输，在用瓶子分装时，应排掉瓶子里的空气，输，在用瓶子分装时，应排掉瓶子里的空气，以削减运输中震荡对精子的应激。以削减运输中震荡对精子的应激。分装后的精液，将精液瓶加盖密封，贴上标分装后的精液，将精液瓶加盖密封，贴上标签。签。规范操作规范操作 保存保存需保存的精液应先在需保存的精液应先在22左右室温下放置左右室温下放置12小时后放入小时后放入17（变动范围（变动范围1618）冰箱中，或用几层干毛巾包好）冰箱中，或用几层干毛巾包好干脆放在干脆放在17冰箱中。冰箱中必需放有灵敏温度计，随冰箱中。冰箱中必需放
18、有灵敏温度计，随时检查其温度。分装精液放入冰箱时，不同品种精液应时检查其温度。分装精液放入冰箱时，不同品种精液应分开放置，以免拿错精液。精液应平放，可叠放。分开放置，以免拿错精液。精液应平放，可叠放。查看：从放入冰箱起先，每隔查看：从放入冰箱起先，每隔12小时，要当心摇匀精液小时，要当心摇匀精液一次（上下颠倒），防止精子沉淀聚集造成精子死亡。一次（上下颠倒），防止精子沉淀聚集造成精子死亡。一般可在早上上班、下午下班时各摇匀一次，并做好摇一般可在早上上班、下午下班时各摇匀一次，并做好摇匀时间和人员的记录。匀时间和人员的记录。冰箱应始终处于通电状态，尽量削减冰箱门的开关次数，冰箱应始终处于通电状态，尽量削减冰箱门的开关次数，防止频繁升降温对精子的打击。保存过程中，确定要随防止频繁升降温对精子的打击。保存过程中，确定要随时视察冰箱内温度的变更，出现温度异样或停电，必需时视察冰箱内温度的变更，出现温度异样或停电，必需普查贮存精液的品质。普查贮存精液的品质。精液一般可成功保存精液一般可成功保存37天。天。规范操作规范操作 运运 输输精液运输过程是一个关键环节。运输成败的关键在于保温顺防震是否做得足够好。冰皇的运用：合理运用。感谢大家！