《显微切割技术(精品).ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《显微切割技术(精品).ppt（41页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、显微切割技术显微切割技术第四军医大学病理与病理生理学教研室闫庆国组织成分的异质性（多样性）与研究需要的同质性（单一性）的矛盾如何解决？如何分离研究中需要的越来越小的单一的细胞内组分？解决之道 显微切割技术是显微切割技术是解决的方法之一。解决的方法之一。第一部分：显微切割技术概况第一部分：显微切割技术概况 概念概念 特点特点 方式方式 材料材料 范围范围 结合技术结合技术 影响因素影响因素 应用领域应用领域 第二部分：第二部分：激光捕获显微切割技术激光捕获显微切割技术第一部分第一部分显微切割技术概况显微切割技术概况 显微切割（microdissection)技术是在显微状态下通过显微操作系统对欲
2、选取的材料（组织,细胞群，细胞，细胞内组分或染色体区带等）进行切割分离并收集用于后续研究的技术。I.显微切割的概念II.显微切割技术的特点 F 细微 切割对象可为微米级；切切割对象可为微米级；切割精度可达毫微米；割精度可达毫微米；F 原位 在组织细胞或染色体的原在组织细胞或染色体的原位取材，因此所取材料的定位清楚，位取材，因此所取材料的定位清楚，所研究对象的历史背景明确；所研究对象的历史背景明确；FF 同质 可以保证所取材料一定层可以保证所取材料一定层次上的同质性次上的同质性 ；FF 结合 可以与多种分子生物学、可以与多种分子生物学、免疫学及病理学技术结合使用。免疫学及病理学技术结合使用。II
3、I.显微切割方式FF 镜下手工操作FF 机械微调辅助FF 液压显微操纵FF 激光捕获系统镜下手工操作镜下手工操作特点：精度低，范围大，易开展。特点：精度低，范围大，易开展。特点：精度低，范围大，易开展。特点：精度低，范围大，易开展。机械微调辅助机械微调辅助特点：精度有提高，二维操作，简单易行低耗。特点：精度有提高，二维操作，简单易行低耗。特点：精度有提高，二维操作，简单易行低耗。特点：精度有提高，二维操作，简单易行低耗。液压显微操纵系统液压显微操纵系统特点：精度高；用途多；效率低。特点：精度高；用途多；效率低。激光捕获显微切割系统激光捕获显微切割系统特点：电脑控制，激光切割，转移膜收集。特点：
4、电脑控制，激光切割，转移膜收集。IV.显微切割材料FF石蜡切片石蜡切片FF 冰冻切片冰冻切片FF 细胞爬片细胞爬片 FF细胞涂片细胞涂片FF 细胞铺片细胞铺片FF 染色体片染色体片V.显微切割范围FF 组织切割组织切割FF 细胞群切割细胞群切割FF 单个细胞切割单个细胞切割FF 单细胞内组分切割单细胞内组分切割FF 染色体区带切割染色体区带切割VI.显微切割结合技术FF 免疫组织化学免疫组织化学FF原位杂交原位杂交FF FISHFISHFF Southern,Northern,Western Blots Southern,Northern,Western BlotsFF PCR PCRFF 基
5、因克隆基因克隆VII.显微切割用于PCR分析所需细胞数的影响因素FF 切片厚度切片厚度FF细胞大小细胞大小FF 固定方式固定方式FF DNADNA提取方式提取方式FF PCRPCR扩增片段长度扩增片段长度单个细胞用于突变分析所需要单个细胞用于突变分析所需要的最小细胞数：的最小细胞数：冰冻切片同流式细胞仪冰冻切片同流式细胞仪 1010个个 石蜡切片石蜡切片 3030个个VIII.显微切割应用领域FF 肿瘤基因突变检测肿瘤基因突变检测FF 肿瘤异质性研究肿瘤异质性研究FF 新基因的发现新基因的发现FF 染色体畸变分析染色体畸变分析FF 细胞局部病变病因研究细胞局部病变病因研究FF 微阵列（微阵列（
6、microarraymicroarray）分析分析FF 特异基因表达分析特异基因表达分析FF 杂和性丢失检测杂和性丢失检测FF 微卫星序列不稳定性分析微卫星序列不稳定性分析FF 核酸及蛋白质的定量研究核酸及蛋白质的定量研究第二部分第二部分 激光捕获显微切割技术激光捕获显微切割技术 Laser Capture MicrodissectionTwogeneralclassesoflaser-capturemicrodissectionn nInfrared(IR)capturesystemn nUltraviolet(UV)cuttingsystemMoleculeMethodology/assa
7、yCellular yield/area of microdissectionDNALossofheterozygosity1001,000cellsDNAImprinting/DNAmethylation200cellsgDNAGeneticmosaicanalysis2,000cellsRNAcDNAlibraryconstruction25,000cells(93ngtotalRNA)5,000cells(14.718.6ngtotalRNA)RNAGene-expressionarrays100cellsfromFFPERNAQRT-PCR100cells/1reactionor2,0
8、00cells/200l4,0005,000cellsProteinWesternblot500cells(optimizedblottingprocedure)2,500cells8,00010,000cellsProtein2Dgelelectrophoresis50,000100,000cells3.7mm2area10,000cells(100200gin35020,00025,000cells50,000cellsDifferentpurposesdecidedifferentamountofcellsUncoverHiddenMolecularSignaturesfromPureCellPopulations n n Laser-capture Laser-capture microdissectionmicrodissection.Nature Protocols 586-603(2006)Nature Protocols 586-603(2006)小小 结结n n显微切割是一项精细的取材技术显微切割是一项精细的取材技术n n在选用异质性的材料进行研究时都可考虑在选用异质性的材料进行研究时都可考虑用此技术提升研究的科学性用此技术提升研究的科学性谢谢大家