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1、褪黑素双层控释片制备及其在Beagle犬体内的药动学中国新药与l临床杂志(ChinJNewDrugsClinRem),2006年7月,第25卷第7期?527?文章编号10077669(2006)07052704褪黑素双层控释片制备及其在Beagle犬体内的药动学张涛一,杨勇一,周远大3,陈兰,一,曾志,一,邓履红,(1.西南药业股份药物研究所,重庆400038;2.重庆太极医药研究院,重庆4015;3.重庆医科大学附属第一医院临床药理研究室,重庆400016)关键词褪黑激素;药动学;狗;控释制剂摘要目的:研制褪黑素双层控释片,并研究其药动学.方法:以羟丙甲基纤维素,硬脂酸为骨架材料,采用固体分
2、散技术和双层压片工艺,制备褪黑素双层控释片.6只Beagle犬随机交叉单剂灌服褪黑素双层控释片(6mg)或参比制剂(3mg),以高效液相色谱法测定血浆中褪黑素浓度,3P97程序推算药动学参数.结果:灌服受试制剂和参比制剂后,th分别为(3.3s0.9)和(1.20.5)h,c一分别为(85)和(1l4)IxgL,分别为(1.00.4)和(0.500.20)h,AC分别为(3816)和(258)Ixg?h?.结论:研制的褪黑素双层控释片具有速释和缓释特性.中图分类号R965;R969.1;R971.3文献标识码APreparationofmelatonincontrolled-releasebi
3、layertabletsanditspharmacoki-neticsinBeagledogsZHANGTao,YANGYong卫,ZHOUYuanda,CHENLan卫,ZENGZhi卫,DENGLtihong卫(1.1nstituteofSouthwestPharmaceuticalCompanyLtd.,CHONGQING400038,China;2.ChongqingTaijiAcademyofMedicine,CHONGQING400015,China;3.DepartmentofClinicalPharmacology,theFirstAffiliatedHospitalofCho
4、ngqingMedicalUniversity,CHONGQING400016,China)KEYWORDSmelatonin;pharmacokinetics;dogs;controlledreleasepreparationABSTRACTAIM:TopreparemelatonincontrolledreleasebilayertabletsandstudyitspharmacokineticsinBeagledogs.METHODS:Melatonincontrolledreleasebilayertabletswerepreparedbythesoliddispersionmetho
5、dandtwicecompressiontechnology,usingHPMCandstearicacidasthematrixmateria1.Inarandomized,crossoverdesign,asingleoraldoseofmelatonincontrolledreleasebilayertablets(6mg)orreferencepreparation(3mg)wasgivento6beagledogs,andthenplasmaconcentrationsofmelatoninweredetectedbyHPLCmethodwiththepharmacokineticp
6、arameterscalculatedby3P97pharmacokineticprogram.RESULTS:Thetkc.,ACoftestsreferencepreparationwere(3.3s0.9)US(1.20.5)h,(85)US(114)Ixg?,(1.00.4)US(0.500.20)h,(3816)US(25-4-8)Ixg?h?L,respectively.CONCLUSION:Theformulatedmelatoninsustainedreleasebilayertabletsexhibitsustainedreleaseandrapidreleasecharac
7、teristicsnvitroandnvivo.【收稿日期】2005120l【接受日期】20060430【作者简介】张涛(1966一),男,四川资中人,教授级高级工程师,硕士,重庆太极医药研究院副院长,西南药业股份药物研究所所长,主要从事药物制剂研究和新药开发.【联系人】张涛.Phn:862389855066.Fax:862389855208.Emaihzzhtao?528?中国新药与I临床杂志(ChinJNewDrugsClinRein),2006年7月,第25卷第7期褪黑素(melatonin)是一种广泛存在于生物体内的具有多种生物活性的古老的生物信息分子,其化学结构式如图1,是调节人体昼
8、夜节律时相,开启睡眠之门(sleepgate)并维持睡眠的内源性生物时相物质(chronobioticagent)t卜.1.此外,褪黑素通过自身的化学抗氧作用,与褪黑素受体(MTR.和MTR)的相互作用,以及对生物酶等蛋白靶标的作用,对机体有着广泛而重要的生理和药理功能而备受关注Il21,开发上市了多种制剂产品.褪黑素体内水平与睡眠状态密切相关,临床上睡前口服16mg,用于改善睡眠,调节时差.外源性褪黑素口服吸收,分布,去除快,t.短(3050min),个体差异大,首关效应强,绝对生物利用度低(1%37%),体内维持时间短(13h),达不到生理所需睡眠时问,影响了作用效果.为此,国内外学者对褪
9、黑素缓控释制剂,鼻腔给药,口腔给药等新制剂,新给药途径进行了广泛深入研究t.为了克服普通制剂维持时问短,缓释制剂起效慢的缺点,我们对有速释和缓释双向控释作用的褪黑素双层控释片(褪黑素I)进行了研究,并对其在Beagle犬体内的药动学进行了探讨.图1褪黑素结构式材料与方法NH药品与试剂褪黑素(药用,批号M02021,纯度>99%,黄冈普生生化制品),褪黑素标准品(Sigma公司),珀尔牌褪黑素片(褪黑素,参比制剂,规格3mg,批号20030110,美国宝力士有限公司),维生素B(药用,上海新亚药业),羟丙甲基纤维素(药用,DowChemicalCompany,美国),预胶化淀粉(药用,湖州
10、展望药业化学有限公司),聚乙二醇10000(药用,上海浦东高南化工厂),乳糖(药用,德国美剂乐公司),甲醇(色谱纯,TEDIACompany,INC.),纯化水(自制).硬脂酸,硬脂酸镁,二氧化硅等为药用辅料,其余为分析纯.仪器HP1100高效液相色谱仪(安捷伦),ZP21A旋转式压片机(上海天祥健台制药机械),Adventurer电子天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司),HD一20多相运动混合机(温州市制药设备厂),RCZ一5A智能溶出仪(天津大学精密仪器厂),HP8453分光光度仪(安捷伦).动物健康合格Beagle犬6只,雌雄各半,体重78kg,个体之问体重差异不超过20%,实验前检查其肝
11、,肾功能和心电图,结果均正常.褪黑素I的制备u51速释层:称取褪黑素(3%),乳糖(4O%),按等量递加法混合均匀,再与维生素B(10%),预胶化淀粉(42%),全部混合均匀;参加1%羟丙甲基纤维素溶液适量,按常规方法制软材,16目筛制粒;5070cIc枯燥;16目筛整粒;参加3%二氧化硅,1%硬脂酸镁混匀,得速释层颗粒.缓释层:称取硬脂酸(30%),聚乙二醇10000(36.5%),置于容器中,水浴加热到7090oC,熔化成溶液;参加褪黑素(2.5%)并溶解成溶液,再参加羟丙甲纤维素(30%)充分搅拌均匀;取出,冷却;用20目筛制粒;最后参加1%硬脂酸镁混匀;得缓释层颗粒.调整速释层,缓释层
12、的质量,使含褪黑素分别为3mg,经多功能压片机压制而得.含量测定1色谱条件色谱柱ODSCl8柱(150mm4.6mm,5m);流动相0.05mol?LKH2PO4一甲醇(10:9);流速1mL?min一;柱温40oC;检测波长285nm(紫外检测器).2测定方法称取研细后的片粉(约200mg)于100mL量瓶中,加流动相,超声溶解,稀释至刻度,用0.8m滤膜滤过,取续滤液5mL,置25mL量瓶中流动相稀释至刻度,作为供试品溶液.另取褪黑素对照品,加流动相制成每mL中含褪黑素12g的对照品溶液.取供试品溶液和对照品溶液各20L,照?中国药典)2005年版高效液相色谱法进行测定.3方法精密度与回收
13、率配制高,中,低3种浓度(0.014,0.012,0.010g?L)的对照品溶液,同日内连续测定5次,5d内重复测定,分别计算日内,日问精密度及回收率,结果高,中,低浓度日内RSD分别为0.77%,1.10%,1.11%(n=5),日问RSD分别为1.32%,1.20%,1.19%(n=5),回收率分别为(99.70.6)%,(99.100.21)%,(99.71.3)%(凡=9),平均值为(99.50.7)%.释放度测定照?中国药典)2005版释放度测定第一法,采用溶出度测定法第一法装置,以去空气的新鲜纯化水500mL为溶剂,转速为100r?rain一,经0.25,0.5,1,2,3,5和6
14、h,分别取溶液5mL,用0.8Ixm膜滤过,补充相同温度和体积的水,取续滤tI_I(中国新药与临床杂志(ChinJNewDrugsClinRem),2006年7月,第25卷第7期?529?液作为供试品溶液.另取含量项下的对照品溶液,加流动相稀释成每1mL中含褪黑素0.012mg的溶液作为对照品溶液,按照含量测定项下的方法分别测定峰面积,按外标法以峰面积计算出每片在不同时间褪黑素的释放量:血浆中褪黑素的测定1色谱条件色谱柱:ODSCl8柱(150inm4.6mm,7Ixm);流动相:乙腈一重蒸水(50:50);流速0.5mL?min;柱温室温;检测波长220lqm(紫外检测器).2测定方法取Be
15、agle犬血浆1.5mL,加重新蒸馏的乙醚4mL.震摇,静置,定量取有机层3mL,置40水浴用氮气吹干,用50L流动相复溶备用.进样40L,HPLC法测定.3色谱行为卒白血浆,褪黑素标准品以及犬血样品,经HPLC分析测定得到的色谱图,见图2.BlC44.555.544.555.544.555.5t/raint/raint/rain图2高效液相色谱图A:标准品;B:空白血浆;c:犬血样品;l:褪黑素4方法精密度与同收率配制高,中,低3种浓度(2.275,9.100,36.400mg?L)的血浆标准品溶液,每种浓度5份,按上述血浆样品处理后,同日内测定5次,连续5d内测定,计算日内,日间精密度及回
16、收率,结果高,中,低浓度日内精密度RSD分别为5.04%,6.34%,6.52%(凡=5),日间精密度SD分别为5.64%,5.79%,7.59%,回收率分别为(1063)%,(964)%,(92.62.5)%(n=5)体内药动学试验方法采用随机交叉试验方法,单剂口服给药.取6只Beagle犬随机分为A,B两组,每组3只,分2个阶段分别交叉口服褪黑素I或褪黑素,交叉给药前经1wk清洗期.试验前禁食12h后,于次日晨8:00空腹灌服单剂量褪黑素I或褪黑素(50mL水灌服药).服药后4h统一进食.在给药前及给药后0.083,0.17,0.25,0.33,0.5,0.67,1.0,1.5,2.0,3
17、.0,4.0,6.0,8.0h,抽取静脉血4.0mL,别离血浆,低温保存(一2OoC),待测.间隔1wk后交换口服另一种片剂,同法处理.测定血浆中褪黑素含量.结果HPLC含量测定褪黑素标准曲线称取褪黑素对照品,甲醇溶解制成每升中含褪黑素0.364g的褪黑素标准储藏液,使用时甲醇稀释为0.728mg?.分别用流动相制成浓度(C)为0.060,0.024,0.012,0.006,0.003g?L的对照品溶液.按含量测定的色谱条件,取20L注入色谱仪,285lqm处测定峰面积(A).以Ac进行线性回归,得标准曲线:A=一0.1629+35.8535c,r=0.9999.结果说明,在0.0030.06
18、0g?L的浓度范围内,褪黑素峰面积(A)与浓度(c)线性关系良好.ttPLC血浆检测褪黑素标准曲线在空白犬血浆中,分别添加褪黑素,使血药浓度相当于0.0364,0.0182,0.0091,0.0046,0.0023,0.0011mg?L,以血浆样品峰面积Y对褪黑素浓度回归得标准曲线:Y=5.8896一0.5126,r=0.9998.结果说明,在0.00110.0364mg?L的浓度范围内,褪黑素峰面积(A)与浓度(c)线性关系良好.褪黑素体外累积释放度测定结果取3批褪黑素I,测定褪黑素体外累积释放度(F),结果见图3.体外释放试验研究说明,研制的褪黑素I15rain释放约4O%(2.4mg),
19、1h释放约50%(3.0mg),5h释放完全.说明褪黑素I既能快速使药物溶出,又能缓慢释放药物.连续3批释放数据重现好(相似因子分别为70,76,87).1008O6O加2OO图3褪黑素双层控释片体外释药蓝线(n=61Beagle犬血药浓度6只Beagle随机交叉单剂灌服褪黑素I或褪黑素后,测定血药浓度.血药浓度一时间曲线见图4.结果说明,灌服褪黑素I后,血药浓度快速升高,约30rain左右到达峰值,4h后达到较低水平,68h接近消除完全.药动学参数采用中国数学药理学会编制的3P97L?530?中国新药与临床杂志(ChinJNewDrugsClinRein),2006年7月,第25卷第7期25
20、20下.15匕ol0050c,h图4单剂量灌服褪黑素受试制剂和参比制剂后Beagle犬体内平均血药浓度(rl=6)软件计算各犬的药动学参数,处理结果见表1.表1灌服褪黑素双层控释片和参比制剂后Beage犬体内药动学参数讨论本研究采用湿法制粒,固体分散和双层压片技术首创了褪黑素双层控释片制备工艺,建立了体内外含量测定和体外释放度检测方法.制备工艺具有良好的重现性和可操作性,含量测定和体外释放度检测方法准确,灵敏.每片含褪黑素6mg,其中速释层,缓释层分别含褪黑素3mg.口服后,速释层中3mg褪黑素快速释放;O.255h内缓释层中褪黑素持续缓慢释放.体外释放到达速释和缓释双向控制释放设计目的.Be
21、agle犬体内药动学试验结果表明,褪黑素I吸收半衰期,达峰时问与参比制剂相当.峰浓度低于参比制剂,吸收半衰期,消除半衰期,平均驻留时问均长于参比制剂.口服参比制剂试验结果与文献161一致.Beagle犬体内药动学试验结果与体外释放研究结果一致,具有明显的速释和缓释作用特点.口服褪黑素I后,褪黑素既能快速释放,又迅速吸收,在Beagle犬体内维持68h.克服了褪黑素普通制剂半衰期短(3O50min),消除快,维持血药浓度短等缺点,具有速释和缓释作用特性.提示改善睡眠快速,持久,符合失眠病人生理节律需要.由于褪黑素双层控释片研制尚属首次,其体内外研究尚无文献报道,人体药动学过程还有待进一步研究证实
22、.参考文献1LEPPAMAKIS,PARTONENT,VAKKURIO,eto1.Effectofcontrolledreleasemelatoninonsleepquality,mood,andqualityoflifeinsubjectswithseasonalorweatherassociatedchangesinmoodandbehaviourJ1.EurNeuropsychopharmacol,2003,13(3):l37145.2TOUITOUY.Humanagingandmelatonin.ClinicalrelevanceJ.ExpGerontol,2001,36(7):108
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