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1、专题二 微生物的培育和应用课题 1 微生物的试验室培育【目标定位】了解培育基的根底学问，进展微生物培育和无菌技术的操作。【自主预习】一、培育基：1概念：人们依据微生物对的不同需求，配制出供其的养分基质叫培育基。可分为培育基和培育基。2养分构成：各种培育基一般都含有、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。3培育乳酸杆菌时需在培育基中添加、培育霉菌时需将培育基 PH 调至、培育细菌时需将 PH 调至、培育厌氧微生物则需供给条件。思考 1从细胞的化学元素组成来看，培育基中为什么都含有这些养分成分？ 二、无菌技术：阅读“无菌技术”，争辩答复以下问题：(一)获得纯洁培育物的关键是，具体操作如下：1.
2、 对试验操作的、操作者的和进展。2. 将用于微生物培育的、和等器具进展。3. 为避开四周环境中微生物的污染，试验操作应在四周进展。4. 试验操作时应避开已经灭菌处理的材料用具与相接触。(二)消毒和灭菌1. 消毒是指。常用的方法有、消毒法。2. 灭菌是指。常用的方法有：、灭菌。分别适用于那些用具？思考 2无菌技术除了防止培育物被污染外，还具有的目的是什么？思考 3利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？思考 4物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先翻开排气阀，煮沸并排解锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀连续加热，气压升至 ，温度为 ， 并维持 min；最终切断热源，使温度自然
3、降温，气压务必降至时翻开锅盖，其目的是防止。三、试验操作大肠杆菌的纯化培育：本试验所用的培育基是，本试验可分成和两个阶段进展。一制备牛肉膏蛋白胨固体培育基1 制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的操作步骤是：、。思考 5在制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的称量操作中，动作要快速，缘由是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？思考 6牛肉膏和蛋白胨主要为微生物供给什么等养分物质？2. 倒平板：待培育基冷却至左右时在酒精灯火焰四周操作进展。其过程是：在火焰旁右手拿，左手；使锥形瓶的瓶口；左手将培育皿，右手，马上盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板。思考 7锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？思考 8平板倒置
4、的目的是什么？思考 9假设皿盖和皿底之间粘有培育基，则该平板能否培育微生物？为什么？二纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。1. 平板划线法是的操作，将聚拢的菌种逐步稀释分散到培育基的外表。其操作步骤是：将在酒精灯火焰上灼烧直至。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并翻开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰到达的目的。将冷却的接种环伸入到。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖翻开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培育基。灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。留意不要将相连。将平板培育。思考 10取菌种前灼烧接种环的目的是什
5、么？为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进展，其目的是？ 最终灼烧接种环的目的是？在作其次次以及其后的划线操作时为什么总是从上一次划线的末端开头划线？2. 稀释涂布平板法则是将菌液进展一系列的梯度，然后将进展培育。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的。系列稀释操作：取盛有mL 水的无菌试管 6 支，编号 101、102、103、104、105、106。用灼烧冷却的移液管吸取mL 菌液注入编号为 101 试管中，并吹打 3 次使之混匀。从 101 倍液中吸取mL 菌液注入到编号为 102 试管内吹打均匀，获得 102 倍液。依此类推。思考 11
6、系列稀释操作的留意事项是什么？ 涂布平板操作：将浸在盛有的烧杯中。取少量不超过，滴加到培育基外表。将的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却。用涂布器将菌液地涂布在培育基的外表。涂布时可，使菌液分布均匀。四、结果分析与评价1. 培育未接种培育基的作用是什么？，假设有菌落形成，说明什么？2. 在肉汤培育基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3. 培育 12h 和 24h 后的菌落大小？；菌落分布位置？缘由？思考 12在某培育基上消灭了 3 种特征不同的菌落是什么缘由？思考 13频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？【随堂检测设计】1. 以下关于微生物养分的说法，正确的选项是 A同一种物
7、质不行能既作碳源又作氮源B但凡碳源都能供给能量c除水以外的无机物仅供给无机盐D无机氮源也能供给能量2. 细菌培育过程中分别承受了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌A接种针、手、培育基B高压锅、手、接种针C培育基、手、接种针D接种针、手、高压锅3. 以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的表达错误的选项是A操作挨次为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯 C待培育基冷却至 50左右时进展倒平板D待平板冷却凝固约 510 min 后将平板倒过来放置【拓展训练设计】1. 以下有关培育基的表达正确的选项是 A培育基是为微生物的生长生
8、殖供给养分的基质 B培育基只有两类：液体培育基和固体培育基 C固体培育基中参加少量水即可制成液体培育基 D微生物在固体培育基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌2. 不同培育基的具体配方不同，但一般都含 A碳源、磷酸盐和维生素B氮源和维生素C水、碳源、氮源和无机盐D碳元素、氧元素、氢元素、氮元素3获得纯洁培育物的关键是A将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等器具进展灭菌B接种纯种细菌C适宜环境条件下培育D防止外来杂菌的入侵4. 以下常用的无菌操作中错误的选项是A. 用酒精擦拭双手B用氯气消毒水源 C试验操作应在酒精灯火焰四周进展D玻璃器皿(吸管、培育皿)可用酒精擦拭5. 有关倒平板的操作错
9、误的选项是A. 将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上B使翻开的锥形瓶瓶口快速通过火焰C将培育皿翻开，培育皿盖倒放在桌子上D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置6. 有关平板划线操作正确的选项是 A使用已灭菌的接种环、培育皿，操作过程中不再灭菌 B翻开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞c将沾有菌种的接种环快速伸入平板内，划三至五条平行线即可D最终将平板倒置，放人培育箱中培育7. 有关稀释涂布平板法，表达错误的选项是 A首先将菌液进展一系列的梯度稀释 B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的外表C再放在适宜条件下培育 D结果都可在培育基外表形成单个的菌落8. 涂布平板操作需要
10、用到A. 接种环、滴管、酒精灯B接种环、移液管、酒精灯C涂布器、移液管、酒精灯D涂布器、接种环、酒精灯9将接种后的培育基和一个未接种的培育基都放入 37恒温箱的目的是A比照观看培育基有没有被微生物利用B比照分析培育基是否被杂菌污染C没必要放人未接种的培育基D为了下次接种时再使用10. 菌种保藏应把握的条件是1湿度 2 低温3 枯燥4 有光5隔绝空气6适当有氧A146B236C156D235 11平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是A 利于大肠杆菌的接种B 防止杂菌污染C 利于培育的冷却D 防止皿盖冷却水倒流入培育基12鉴定培育基的制作是否合格的方法是：将制备好的培育基放在中保温 1-2 天看有无
11、，假设没有说明制作合格，反之则不合格。参考答案根底学问一、1.养分物质 生长生殖 液体固体2 水.碳源氮源 无机盐PH 特别养分物质氧气3 维生素，酸性，中性或微碱性，无氧思考 1:C、H、O、N、P、S 是构成细胞原生质的根本元素，约占原生质总量的97 以上。二 一杂菌 1.空间 衣着 手，清洁和消毒 2.器皿接种用具，培育基，灭菌 3. 酒精灯火焰 4.四周的物品二1.略 巴氏消酒精2.略灼烧 干热高压蒸气思考 2:防止感染试验操作者 。思考 3避开阻碍热空气流通。思考 4有利于锅内温度上升，100k Pa，121，1530，零，容器中的液体暴沸， 试验操作、 1 计算称量溶化灭菌倒平板思
12、考 5：防止牛肉膏吸取空气中水分。防止琼脂糊底而导致烧杯裂开。思考 6糖 维生素 和 有机氮2：50，锥形瓶，拔出棉塞，快速通过火焰，翻开一条缝隙，将培育基倒入培育皿，倒过来放置思考 7消灭瓶口的杂菌，防止杂菌感染培育基。思考 8防止培育基冷却过程中形成的水滴落到培育基外表。思考 9不能。空气中杂菌会在这些粘附培育基上生殖，并污染皿内培育基。思考 10增大接种面积，保持通气并防止杂菌感染。答案。二、平板划线 .稀释涂布平板1 通过接种环在琼脂固体培育基外表连续划线，接种环，烧红。，消灭试管口杂菌。菌液中取出一环菌种。，伸入平板内划 35 条平行线，第一区划线末端开头向其次区域内，第五区的划线与
13、第一区划线，倒置放在培育箱中思考 11消灭接种环上的微生物，的目的是消灭接种环上残留菌种，防止高温杀死菌种； 防止细菌污染环境和操作者。获得由单个细菌形成的标准菌落。2 不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的外表，9mL，灭菌。，1。，1思考 12操作中试管口和移液管应在离火焰 12cm 处。整个操作过程中使用了 1 支移液管结果分析与评价1 比照，培育基灭菌不彻底。2 呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。3 大小不同；菌落分布位置一样。缘由是时间越长，菌落中细菌生殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。思考 14有培育基灭菌不彻底或杂菌感染等。思考 15临时保藏法和甘油管藏
14、法。前者利用固体斜面培育基培育后，保存在 4冰箱中， 每 36 个月转种培育一次，缺点是保存时间较短，简洁发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在20冷冻箱中。【例 1】解析：此题考察学生对微生物的养分和能源的理解。对异养微生物来说，含 C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO 是光能自养细菌的碳源，但不能供给能量。CO 和 N。是无机物，22也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌供给用以化能合成作用的能源。答案：D启发：含C、H、o、N 的化合物既是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有机碳源能供给能量， 无机碳源不能供给能量；无机物也可供
15、给碳源、氮源和能源。【例 2】 解析：此题考察学生对无菌技术的把握。高压蒸气灭菌锅是灭菌的一个设备，通常用于培育基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以快速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。 答案：C启发：微生物培育过程中的无菌操作包括消毒和灭菌两大类，分别又有各种不同的方法。对试验操作的空间、操作者的衣着和手，进展清洁和消毒；将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等器具进展灭菌。【例 3】解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培育基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒。牛肉膏简洁吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分别后，用玻棒取出称量纸 。待培育基冷却至 50，用
16、手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培育基处于溶化状态。平板冷却几分钟后还需倒置。答案：A启发：固体培育基的制作步骤是：“计算称量溶化灭菌倒平板” 挨次不能颠倒。并且在制作过程特别是倒平板时彻底做到“无菌”。【例 4】解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A 说的是灭菌的目的，由于发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物杂菌，所以是正确的；B 是错误的，由于灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不行能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C 是正确的，由于与发酵有关的全部设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后特地接种的， 灭菌必需在接种前，假设接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。答案：B根底自测一、1A2C3D4D5C6C7D8D9C10B。11D。 12。C。13。D。14。B。15。C。16。D。17。B。二、18 恒温箱菌落生长，菌落生长 19(1)需要灭菌 (2)需要灭菌(3)需要消毒20(1)导致生产失败的根源在于发酵物中混入了杂菌。(2)杂菌入侵，获得纯洁的培育物。21. 不能因空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培育基上滋生，因此最好不要用这个平板培育微生物。22. 因划线后线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开头，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步削减，这样最终就能得到由单个细菌生殖而来的菌落。