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1、蚕豆根尖微核检测技术蚕豆根尖微核检测技术实验目的实验目的1.了解了解微核检测的原理和毒理遗传学微核检测的原理和毒理遗传学2.学习学习蚕豆根尖微核检测技术蚕豆根尖微核检测技术 实验原理 微核（微核（micronucleus，MCN）：）：是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构 微核率（微核率（MCN）与作用因子的剂量或累积与作用因子的剂量或累积效应呈正相关效应呈正相关 污染指数污染指数实验材料蚕豆根尖蚕豆根尖实验步骤1 1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸泡泡24h24h，此间至少
2、换水两次。种子吸胀后，此间至少换水两次。种子吸胀后，2525催芽，置于铺有催芽，置于铺有湿润滤纸的培养皿中，经湿润滤纸的培养皿中，经3648h3648h，大部分初生根长至，大部分初生根长至12cm12cm。2 2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-53-5粒初生根生长粒初生根生长良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根尖即可。阳性检测因子可采用尖即可。阳性检测因子可采用CrOCrO3 3、NaNNaN3 3、重铬酸钾、重铬酸钾、EDTAEDTA为加为加强阳性效果可适当加大溶度，如
3、强阳性效果可适当加大溶度，如1.02.5mol/L Cr1.02.5mol/L CrO O3 3和和0.50.51.5mol/L NaN1.5mol/L NaN3 3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖1224h1224h，此时间也可视，此时间也可视试验要求和被检液溶度而定。试验要求和被检液溶度而定。实验步骤3 3、根尖细胞恢复培养：处理后的种子用自来水（或蒸馏水）、根尖细胞恢复培养：处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗浸洗3 3次，每次次，每次2323分钟。洗净后再置于铺有湿润
4、滤纸的分钟。洗净后再置于铺有湿润滤纸的中，中，2525下恢复培养下恢复培养2224h2224h。4、根尖细胞固定：将恢复培养后的种子，从根尖顶端切下、根尖细胞固定：将恢复培养后的种子，从根尖顶端切下长长1cm左右的幼根，用甲醇左右的幼根，用甲醇-冰醋酸（冰醋酸（3：1）固定液固定）固定液固定24h。固定后的根尖如不及时制片，可换入。固定后的根尖如不及时制片，可换入70%酒精中，酒精中，置置4冰箱中保存备用。冰箱中保存备用。5、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏，吸净蒸馏水，加水，加6mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离盐酸将幼根
5、浸没，室温下解离10min至根尖软化。至根尖软化。6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次次，每次12min。最后。最后浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下12mm长的根尖，滴长的根尖，滴一滴石炭酸品红，染色一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。，加一盖玻片，压片观察。7、显微镜观察、微核细胞记数：每一处理观察、显微镜观察、微核细胞记数：每一处理观察3个根尖、个根尖、1000个细个细胞，统计胞，统计MCN ，计算污染指数，计算污染指数 实验步骤实验步骤实验结果实验结果 首先在显微镜下找到分生组织区细
6、胞分首先在显微镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察。微核大小在主核观察。微核大小在主核1/3以下，并与主核以下，并与主核分离，着色与主核一致或稍深，呈圆形或分离，着色与主核一致或稍深，呈圆形或椭圆形。每一处理观察椭圆形。每一处理观察3个根尖，每个根尖个根尖，每个根尖计数计数1000个细胞，统计其中含微核的细胞个细胞，统计其中含微核的细胞数，计算平均数，即为该处理的数，计算平均数，即为该处理的MCN ，即微核千分率，以此可作为一个检测指标。即微核千分率，以此可作为一个检测指标。根据你的实验安排列表填写实验结果。根据你的实验安排列表填写实验结果。若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。污染指数（污染指数（PI)=样品实测样品实测MCN 平均值平均值/对照组（标准水）对照组（标准水）MCN 平均值平均值 污染指数在污染指数在0.501.50区间基本没区间基本没 有污染；有污染；1.512.00区间为轻度污染；区间为轻度污染；2.013.50区间为中度污染；区间为中度污染；3.51以上为重度污染。以上为重度污染。实验结果实验结果