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1、实验十实验十 细菌菌落总数细菌菌落总数（CFU）的测定）的测定一、实验目的和要求一、实验目的和要求1、学会细菌菌落总数的测定。、学会细菌菌落总数的测定。2、了解水质与细菌菌落数之间的相关、了解水质与细菌菌落数之间的相关性。性。二、实验原理二、实验原理细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。然而，在实际工作中不易做到，所以通常用然而，在实际工作中不易做到，所以通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程性细
2、菌，以它的菌落总数表明有机物污染程度。水中细菌总数与水体受有机污染的程度度。水中细菌总数与水体受有机污染的程度成下相关，因此细菌总数常作为评价水体污成下相关，因此细菌总数常作为评价水体污染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说明水体被污染得越严重。明水体被污染得越严重。三、仪器和材料三、仪器和材料 无菌培养皿、无菌试管、无菌水，无菌吸管、无菌培养皿、无菌试管、无菌水，无菌吸管、接种环、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体培养基、接种环、酒精灯、牛肉膏蛋白胨固体培养基、水样、培养箱、微波炉。水样、培养箱、微波炉。四、实验内容和操作方法四、实验内容和操作方法（一）采集水样：
3、取校园内河水，用无菌取水器，（一）采集水样：取校园内河水，用无菌取水器，在距岸边在距岸边5m处，取距水面处，取距水面1015cm的深层水样。的深层水样。如果不能在如果不能在2h内检测的，需放入冰箱中保存。内检测的，需放入冰箱中保存。（二）细菌总数的测定：（二）细菌总数的测定：1）水样稀释：按无菌操作法，将水样作）水样稀释：按无菌操作法，将水样作10倍系列倍系列稀释。稀释。2）选取）选取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度。稀释度三个连续稀释度。稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于皿上菌落总数介于30和和300之之间。3
4、）吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别注）吸取由高倍至低倍的稀释液，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿入两个培养皿，每皿1mL。4）注入彻底融化，然后冷却到）注入彻底融化，然后冷却到45的营养琼脂培的营养琼脂培养基（用于河水样）立即旋摇培养皿，充分混匀。养基（用于河水样）立即旋摇培养皿，充分混匀。方法是握住平皿，先往一个方向画圆，再朝相反方法是握住平皿，先往一个方向画圆，再朝相反方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿方向回转；或一面画圆，一面适当倾斜。小心勿使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿基于使这个混合液体溅到培养皿的边缘。让平皿基于水平位置放置至固化。水平位置放置至固化。5）接
5、种河水样的培养皿，倒置于）接种河水样的培养皿，倒置于37培养箱中培培养箱中培养养24h。操作步骤图示操作步骤图示振荡振荡10min水样水样9ml9ml9ml9ml9ml9ml 1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1ml1010-1-11010-2-21010-3-320ml20ml20ml20ml20ml20ml倒培养基倒培养基2 2五、菌落计数及报告方法（一）平板菌落数的选择（一）平板菌落数的选择1、进行平皿菌落计数时，记下同一浓度的、进行平皿菌落计数时，记下同一浓度的3个平板（或个平板（或 2个）的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即为个）的菌落总数，计算平均值，
6、再乘以稀释倍数即为1ml水样中的细菌总数。水样中的细菌总数。2、计数时应选择菌落数在计数时应选择菌落数在30300/皿之间的稀释倍数皿之间的稀释倍数进行计数，若同进行计数，若同个稀释度中一个平皿有较大片状菌落个稀释度中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿计数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半数该稀释度的平均菌落数。若片状菌落少于平皿的一半时，而另时，而另半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的半中菌落分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。在记下各平皿菌落数后，应算出同倍作为全皿的数目。在记下各平皿
7、菌落数后，应算出同一稀释度的平均菌数，供下一稀释度的平均菌数，供下步计算时用。步计算时用。(二二)稀释度的选择稀释度的选择l、首先选择平均菌落数在、首先选择平均菌落数在30300者进行计算，当者进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均值乘其稀释倍数。用它作为平均值乘其稀释倍数。2、若有两个稀释度的平均菌落数都在、若有两个稀释度的平均菌落数都在30300之之间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于间，则应按两者的比值来决定。若其比值小于2，应报告两者的平均数；若大于应报告两者的平均数；若大于2则报告其中较小则报告其中较小的菌
8、落数。的菌落数。3、如果所有稀释度的平均菌落数均大于、如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。之。4、若所有稀释度的平均菌落数均小于、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之5、如果全部稀释度的平均菌落数均不在、如果全部稀释度的平均菌落数均不在30300之间，则以最接近之间，则以最接近300或或30的平均菌落数乘以稀的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。释倍数报告之。6、菌落计数的报告，菌落在、菌落计数的报告，菌落在1
9、00以内时按实有数以内时按实有数报告；大于报告；大于100时，采用二位有效数字；在二位有时，采用二位有效数字；在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数缩短数字后面的零数,也可用也可用10的指数来表示，的指数来表示，在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水在所需报告的菌落数多至无法计算时，应注明水样的稀释倍数。样的稀释倍数。六、思考题六、思考题1、测定水中细菌菌落总数有什么实际意义？、测定水中细菌菌落总数有什么实际意义？2、根据我国饮用水水质标准，讨论你这次的检、根据我国饮用水水质标准，讨论你这次的检验结果。验结果。3、本实验中哪些步骤属无菌操作？为什么？、本实验中哪些步骤属无菌操作？为什么？