平面色谱法讲稿.ppt

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1、关于平面色谱法第一页，讲稿共四十六页哦第一节第一节 概述概述平面色平面色谱谱法（法（PC）：）：在平面上在平面上进进行分离行分离n纸色谱法纸色谱法 n薄层色谱法薄层色谱法第二页，讲稿共四十六页哦一、平面色谱法的特点一、平面色谱法的特点固定相一次使用，样品预处理简单，固定相一次使用，样品预处理简单，对被分离物质没对被分离物质没对被分离物质没对被分离物质没有限制有限制有限制有限制分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试样分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试样分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试样分离能力强，展开时间短，一次可以同时展开多个试样 所用仪器简单，操作方便所用仪

2、器简单，操作方便所用仪器简单，操作方便所用仪器简单，操作方便缺点：自动化程度低，分辨率和重现性较差缺点：自动化程度低，分辨率和重现性较差第三页，讲稿共四十六页哦二、平面色谱的主要技术参数二、平面色谱的主要技术参数平面色谱定性参数及相平衡参数平面色谱定性参数及相平衡参数比移值比移值 相对比移值相对比移值平面色谱分离评价参数平面色谱分离评价参数分离度分离度平面色谱板效参数平面色谱板效参数理论塔板数理论塔板数 理论塔板高度理论塔板高度第四页，讲稿共四十六页哦1、平面色谱定性参数及相平衡参数关系、平面色谱定性参数及相平衡参数关系比移值：比移值：溶质移动距离与溶质移动距离与流动相移动距离之比流动相移动距

3、离之比定性参数定性参数第五页，讲稿共四十六页哦l讨论讨论l Rf与与K有有关关，即即与与组组分分性性质质、平平面面板板和和展展开开剂剂的的性性质质有有关关 K大，大，Rf小小l色色谱谱条条件件一一定定，Rf只只与与组组分分性性质质有有关关，是是平平面面色色谱谱基基本本定定性参数，说明组分保留行为性参数，说明组分保留行为lRf范围：范围：0 Rf 1 Rf=0.20.8（常用）；（常用）；0.30.5（最佳）（最佳）相平衡参数相平衡参数第六页，讲稿共四十六页哦相对比移值相对比移值Rs 讨论讨论参参考考物物与与被被测测组组分分在在完完全全相相同同条条件件下下展展开开；可可消消除除系系统统误误差差，

4、提高重现性和可靠性提高重现性和可靠性相相对对比比移移值值Rs与与组组分分、参参考考物物性性质质及及色色谱谱条条件件有有关关，范范围围可可以大于或小于以大于或小于1参比物参比物i被测物被测物s原点原点L2L1第七页，讲稿共四十六页哦2、平面色谱分离评价参数、平面色谱分离评价参数分离度：分离度：两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（直径）的比值（直径）的比值相临两斑点间距离越大，斑点越集中，相临两斑点间距离越大，斑点越集中，分离度越大，分离效率越高分离度越大，分离效率越高当当R1.5时，相临斑点可达到基线时，相临斑点可达到基线分离分离第八页，讲稿共四十六页哦TLC分

5、离度与比移值的关系分离度与比移值的关系Rf=0.3 时时 分离度分离度R最大最大Rf=0.20.5时时 分离度分离度R变化不大变化不大Rf 0.1或或Rf 0.7时时 分离度分离度R急剧下降急剧下降 第九页，讲稿共四十六页哦3、平面色谱板效参数、平面色谱板效参数理论塔板高度理论塔板高度L为原点距斑点中心的距离为原点距斑点中心的距离W为组分斑点的宽度为组分斑点的宽度L0为原点距溶剂前沿的距离为原点距溶剂前沿的距离理论塔板数理论塔板数W 越小，越小，n 越大，越大，H 值越小，板效越高值越小，板效越高第十页，讲稿共四十六页哦三、平面色谱法操作流程图三、平面色谱法操作流程图活化活化第十一页，讲稿共四

6、十六页哦一、概述一、概述1定义：定义：将将固固定定相相均均匀匀涂涂布布在在表表面面光光滑滑的的平平板板上上，形形成成薄薄层层而进行色谱分离和分析的方法。而进行色谱分离和分析的方法。第二节、薄层色谱法第二节、薄层色谱法 TLCTLC2分离机制分离机制 吸附薄层色谱吸附薄层色谱 分配薄层色谱分配薄层色谱 空间排阻薄层色谱空间排阻薄层色谱 胶束薄层色谱胶束薄层色谱第十二页，讲稿共四十六页哦二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料氧化铝、硅胶氧化铝、硅胶纤维素纤维素、聚酰胺聚酰胺（一）固定相（一）固定相吸附剂吸附剂第十三页，讲稿共四十六页哦1.1.硅胶：最常用的吸附剂，硅胶：最常用的吸附剂，SiOSi

7、O2 2XHXH2 2O Op吸附的原因吸附的原因 氢键作用氢键作用吸附活性中心吸附活性中心硅胶含水量硅胶含水量%05152538活性级活性级吸附强弱：吸附强弱：五级五级;级数高级数高,含水量大含水量大,吸附力弱吸附力弱第十四页，讲稿共四十六页哦1）物质极性）物质极性，吸附能力，吸附能力 强极性吸附中心，不易洗脱强极性吸附中心，不易洗脱2）吸水）吸水占用活性位点占用活性位点失活失活p105110OC烘干烘干30min(活化活化)，吸附力最大，吸附力最大 p500OC烘干烘干(不可逆失水不可逆失水)无吸附力无吸附力适用：适用：硅胶具微酸性，分析酸性或中性物质硅胶具微酸性，分析酸性或中性物质 pp

8、 硅胶特性：硅胶特性：pp1.1.硅胶：最常用的吸附剂，硅胶：最常用的吸附剂，SiOSiO2 2XHXH2 2O O第十五页，讲稿共四十六页哦p碱碱性性（pH 910）:分分离离碱碱性性及及中中性性化化合合物物。如如生生物碱等。物碱等。p酸酸性性（pH 45）:用用于于分分离离酸酸性性中中性性物物质质。如如酸酸性性色素、氨基酸等。色素、氨基酸等。p中中性性（pH 7.5）:用用途途最最广广，适适于于分分析析酸酸性性碱碱性性和和中中性物性物质质，如生物碱、，如生物碱、挥发挥发油、甾体等。油、甾体等。2.2.氧化铝氧化铝第十六页，讲稿共四十六页哦p吸附的原因吸附的原因氢键氢键。p吸附吸附强强弱：弱

9、：五五级级，级级数高，含水量大，吸附力弱数高，含水量大，吸附力弱 2.2.氧化铝氧化铝氧化铝含水量氧化铝含水量%0361015活性级活性级第十七页，讲稿共四十六页哦p 常常用用的的是是聚聚己己内内酰酰胺胺，商商名名为为锦锦纶纶、尼尼龙龙-6、卡卡普普隆隆等。等。p 吸附的原因吸附的原因氢键氢键 聚聚酰酰胺胺分分子子内内存存在在着着许许多多酰酰胺胺基基，可可与与酚酚、酸酸、醌醌等等形成形成氢键氢键 氢键能力氢键能力强，组分越后出柱强，组分越后出柱 3.3.聚酰胺聚酰胺第十八页，讲稿共四十六页哦疏水改性硅胶疏水改性硅胶（非极性键合相）（非极性键合相）4.4.改性硅胶改性硅胶 借化学反应方法将有机分

10、子以共价键连接在硅醇基上，借化学反应方法将有机分子以共价键连接在硅醇基上，称化学键合固定相。称化学键合固定相。亲水改性硅胶亲水改性硅胶（极性键合相）（极性键合相）介于极性和疏水改性吸附剂间的色谱选择性介于极性和疏水改性吸附剂间的色谱选择性反相色谱采用高含水溶剂，需低疏水改性硅胶反相色谱采用高含水溶剂，需低疏水改性硅胶第十九页，讲稿共四十六页哦玻板：玻板：5cm10cm、10cm20cm、20cm20cm（二）载板（二）载板 具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度、表面平整、厚具一定机械强度，化学惰性，耐一定温度、表面平整、厚度均匀、价格便宜度均匀、价格便宜光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥光滑、平

11、整、洗净后不附水珠、干燥二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料第二十页，讲稿共四十六页哦含粘结剂固定相：含粘结剂固定相：硅胶硅胶G含含13%15%煅石膏煅石膏 制备硅胶制备硅胶G含含30%煅石膏煅石膏 氧化铝氧化铝G含含9%煅石膏煅石膏不含粘结剂固定相：硅胶不含粘结剂固定相：硅胶H（三）粘结剂（三）粘结剂 加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板的润湿性加强固定相颗粒的附着力，增加薄层板的润湿性1）无机粘结剂：煅石膏）无机粘结剂：煅石膏二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料第二十一页，讲稿共四十六页哦2）有机粘结剂：）有机粘结剂：羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（CMC）0.8%CMC溶液配匀浆涂

12、铺的薄层板强度高，色谱分离性能好注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解注意：不适合浓硫酸显色，易霉变降解（三）粘结剂（三）粘结剂二、吸附薄层色谱材料二、吸附薄层色谱材料第二十二页，讲稿共四十六页哦作用：作用：适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光背适当波长激发光照射下可以产生均匀的荧光背景，清晰显示化合物的暗斑景，清晰显示化合物的暗斑短波荧光指示剂：短波荧光指示剂：254nm 锰激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿锰激活的硅酸锌；钠荧光素，阴极绿长波荧光指示剂：长波荧光指示剂：365nm 银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝银激活的硫化锌、硫化镉；彩蓝（四）荧光指示剂（四）荧光指示剂二、吸附薄层色谱材料二、吸附

13、薄层色谱材料第二十三页，讲稿共四十六页哦 硅胶硅胶H不含粘合剂 硅胶硅胶G硅胶和煅石膏混合而成 硅胶硅胶HF254不含粘结剂，含荧光指示剂荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景呈现强绿色荧光背景 硅胶硅胶GF254同时含粘结剂和荧光指示剂荧光指示剂 254 nm呈现强绿色荧光背景呈现强绿色荧光背景硅胶硅胶HF254+365不含粘结剂，含荧光剂荧光剂 254 nm和和356 nm呈现荧光背景呈现荧光背景第二十四页，讲稿共四十六页哦 被分离物质的极性被分离物质的极性 展开剂的极性展开剂的极性 吸附剂的活度吸附剂的活度选择根据选择根据三、吸附剂和流动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：第二十五页

14、，讲稿共四十六页哦1、被分离物质的极性、被分离物质的极性烷烃烷烃 烯烃烯烃 醚醚 硝基化合物硝基化合物 二甲胺二甲胺 酯酯 酮酮 醛醛 胺胺 酰胺酰胺 醇醇 酚酚 羧酸羧酸三、吸附剂和流动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：第二十六页，讲稿共四十六页哦n 石油醚石油醚 环己烷环己烷 二硫化碳二硫化碳 三氯乙烷三氯乙烷 苯苯 甲苯甲苯 二氯甲烷二氯甲烷 氯仿氯仿 乙醚乙醚 乙酸乙酸 乙酯乙酯 丙丙酮酮 正丁醇正丁醇 乙醇乙醇 甲醇甲醇 吡啶吡啶 酸酸“相似相溶相似相溶”原则原则 根据组分性质选择适当极性的流动相根据组分性质选择适当极性的流动相2.展开剂的极性选择：展开剂的极性选择：三、吸附剂和流

15、动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：第二十七页，讲稿共四十六页哦极性化合物极性化合物选用吸附活性小的（活度级别大的）薄层选用吸附活性小的（活度级别大的）薄层板，极性大的强洗脱剂展开板，极性大的强洗脱剂展开非极性化合物非极性化合物选用吸附活性大的（活度级别小的）薄层选用吸附活性大的（活度级别小的）薄层板，极性小的强洗脱剂展开板，极性小的强洗脱剂展开以感兴趣以感兴趣Rf值是否在值是否在0.30.5间为衡量标准间为衡量标准三、吸附剂和流动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：3、薄层板活度级别选择、薄层板活度级别选择第二十八页，讲稿共四十六页哦4、TLC色谱条件选择原则色谱条件选择原则三、吸附剂和流

16、动相的选择：三、吸附剂和流动相的选择：第二十九页，讲稿共四十六页哦四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程第三十页，讲稿共四十六页哦四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程p1 1、薄层制备（铺板）、薄层制备（铺板）1份吸附剂份吸附剂+3份粘合剂份粘合剂+水水 调成糊状，均匀涂布薄层板调成糊状，均匀涂布薄层板硅胶硅胶G：自含粘合剂，仅加水。自含粘合剂，仅加水。硅胶硅胶H：不含粘合剂。需另加粘合剂。不含粘合剂。需另加粘合剂。第三十一页，讲稿共四十六页哦 薄层放置薄层放置110烘烘30min，干燥器中备用，干燥器中备用 吸附剂活性越高，活性级别越低；吸附剂活性越高，活性级别越低；最好二级或三级最好

17、二级或三级 不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化不可将刚涂布好的薄层板立即烘烤活化2 2、活化、活化四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程第三十二页，讲稿共四十六页哦3 3、点样、点样溶解试样的溶剂尽量避免用水溶解试样的溶剂尽量避免用水配置试样浓度约为配置试样浓度约为0.01%0.1%点样点样四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程点样装置：点样装置：容量毛细管；自动薄层色谱点样仪容量毛细管；自动薄层色谱点样仪第三十三页，讲稿共四十六页哦点样原点应小而圆，距板边缘点样原点应小而圆，距板边缘2cm 多次点样（每次挥干后），防多次点样（每次挥干后），防止边缘效应止边缘效应 点样量勿超载，防止拖尾点

18、样量勿超载，防止拖尾 点样勿伤及薄层表面点样勿伤及薄层表面第三十四页，讲稿共四十六页哦4、展开、展开展开过程：展开过程：展开室预先用展开剂饱和，平衡系统展开室预先用展开剂饱和，平衡系统 点样薄板一端浸入展开剂展开（距边缘点样薄板一端浸入展开剂展开（距边缘0.51 cm）挥尽溶剂挥尽溶剂 展开室通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具展开室通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭。有磨口玻璃盖，应能密闭。四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程第三十五页，讲稿共四十六页哦5、定位、定位光学检出法：直接观察、荧光显示技术光学检出法：直接观察、荧光显示技术试剂显色法：喷雾显色法，浸渍显色法试剂

19、显色法：喷雾显色法，浸渍显色法四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程n薄层色谱常用通用型显色剂薄层色谱常用通用型显色剂 碘蒸气法碘蒸气法 10%硫酸乙醇溶液硫酸乙醇溶液 0.05%荧光黄甲醇溶液荧光黄甲醇溶液第三十六页，讲稿共四十六页哦日光，紫外光，显色剂显示日光，紫外光，显色剂显示测出测出Rf值值 相同条件下展开，与已知标准物质对照进行相同条件下展开，与已知标准物质对照进行定性鉴别。定性鉴别。6、定性分析、定性分析四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程第三十七页，讲稿共四十六页哦7、定量分析、定量分析四、薄层色谱操作过程四、薄层色谱操作过程洗脱方法：洗脱方法：显色后取下斑点，用溶剂定量洗

20、脱，收集洗显色后取下斑点，用溶剂定量洗脱，收集洗脱液以适当的方法进行定量测定。脱液以适当的方法进行定量测定。目视比较法：目视比较法：显色后比较标准系列与样品的斑点颜色或显色后比较标准系列与样品的斑点颜色或面积大小。面积大小。薄层扫描法：薄层扫描法：显色后用薄层扫描仪扫描定量。显色后用薄层扫描仪扫描定量。第三十八页，讲稿共四十六页哦1、薄层扫描法检测茶碱中毒者血清中茶碱浓度、薄层扫描法检测茶碱中毒者血清中茶碱浓度2、TLC同时测定同时测定10种精神安定药物血药浓度种精神安定药物血药浓度3、异烟肼中毒快速检验、异烟肼中毒快速检验4、尿液中利福平的测定、尿液中利福平的测定5、薄层扫描法测定血浆中的度

21、冷丁、薄层扫描法测定血浆中的度冷丁五、薄层色谱的应用五、薄层色谱的应用 中草药和中成药的鉴别及成分分析中草药和中成药的鉴别及成分分析 判断合成反应进行的程度判断合成反应进行的程度 药物的纯度和杂质限量试验药物的纯度和杂质限量试验 临床药物分析临床药物分析第三十九页，讲稿共四十六页哦2010版药典（二部）采用版药典（二部）采用TLC的品种数量，共的品种数量，共435个个TLC品种数量品种数量硅胶硅胶G254个品种个品种硅胶硅胶G254148个品种个品种硅胶硅胶H15个品种个品种硅胶硅胶HF25412个品种个品种硅藻土硅藻土2个品种个品种微晶纤维素微晶纤维素3个品种个品种氧化铝氧化铝1个品种个品种

22、第四十页，讲稿共四十六页哦2005年版收载薄层色谱定性鉴别年版收载薄层色谱定性鉴别1507项项2010年版新增薄层色谱定性鉴别年版新增薄层色谱定性鉴别2494项项味连 雅连 云连三种黄连的薄层色谱图像种黄连的薄层色谱图像第四十一页，讲稿共四十六页哦北五味子与南五味子的薄层色谱鉴别北五味子Fructus Schisandriae chineses南五味子FructusSchisandriae sphenantheraeReferenceg-g-schisandrin（五味子乙素）（五味子乙素）Schizandrin（五味子甲素）（五味子甲素）Schisantherin (Gomisin C)（五

23、味子酯甲）（五味子酯甲）Schisandrin(五味子醇甲）五味子醇甲）第四十二页，讲稿共四十六页哦白芷异欧前胡素异欧前胡素欧前胡素欧前胡素 1 2 3 s 4 5 61白芷（浙江）白芷（浙江）2白芷（磐安）白芷（磐安）3白芷（杭州）白芷（杭州）4白芷对照药材白芷对照药材5、6白芷（四川遂宁）白芷（四川遂宁）第四十三页，讲稿共四十六页哦第三节第三节 纸色谱法纸色谱法 将固定相放在纸上，以纸做载体进行点样、展开、定性、和定量的液-液分配色谱法第四十四页，讲稿共四十六页哦固定相：纸上所含水分或其他物质固定相：纸上所含水分或其他物质流动相：水不互溶的有机溶剂流动相：水不互溶的有机溶剂 （饱和正丁醇）（饱和正丁醇）分离机制：同液分离机制：同液-液分配色谱液分配色谱分离对象：极性化合物，如糖类分离对象：极性化合物，如糖类滤纸选择：中速滤纸最常用滤纸选择：中速滤纸最常用 质地均匀平整，具有一定机械强度质地均匀平整，具有一定机械强度第三节第三节 纸色谱法纸色谱法第四十五页，讲稿共四十六页哦感感谢谢大大家家观观看看第四十六页，讲稿共四十六页哦