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1、关于血液标本采集和血涂片制备第1页，讲稿共49张，创作于星期三第一章第一章 血液标本采集血液标本采集和血涂片制备和血涂片制备重点：血标本采集方法和血涂片制备技术重点：血标本采集方法和血涂片制备技术难点：各种抗凝剂的优缺点和使用选择难点：各种抗凝剂的优缺点和使用选择第2页，讲稿共49张，创作于星期三 第一节第一节 血液标本采集和抗凝剂选择血液标本采集和抗凝剂选择血标本：血标本：全血：血细胞全血：血细胞+血浆血浆;临床血液学检查，血细胞计数、分类和形态临床血液学检查，血细胞计数、分类和形态 学学检查检查血浆：全血除去血细胞；血浆病理性和生理性化学成分的测定，内分泌激素、血浆：全血除去血细胞；血浆病
2、理性和生理性化学成分的测定，内分泌激素、凝血因子（钙除外）、血栓和止血检查凝血因子（钙除外）、血栓和止血检查血清：离体后血液自然凝固后析出的液体成分（除纤维蛋白原等凝血因血清：离体后血液自然凝固后析出的液体成分（除纤维蛋白原等凝血因子）；临床化学和临床免疫学检查子）；临床化学和临床免疫学检查第3页，讲稿共49张，创作于星期三 一、采血方法一、采血方法 静脉采血法静脉采血法部位：主要是肘静脉。还可以在：手背、内踝、股静脉，幼儿可采用颈部位：主要是肘静脉。还可以在：手背、内踝、股静脉，幼儿可采用颈外静脉采血外静脉采血采血器材：一次性注射器采血器材：一次性注射器采血步骤和注意事项：止血带压迫时间不能
3、过长；注射器和容器必须干燥采血步骤和注意事项：止血带压迫时间不能过长；注射器和容器必须干燥第4页，讲稿共49张，创作于星期三采血步骤采血步骤 选择适宜静脉，在臂扎选择适宜静脉，在臂扎上压脉带，于穿刺处皮肤上压脉带，于穿刺处皮肤做环形消毒做环形消毒 让病人握拳，使静脉显让病人握拳，使静脉显露。左手拇指固定穿刺部露。左手拇指固定穿刺部位下端，右手持注射器，位下端，右手持注射器，使针筒刻度向上，先以约使针筒刻度向上，先以约3030o o角度沿静脉正面进针，穿角度沿静脉正面进针，穿过皮肤刺人静脉腔。过皮肤刺人静脉腔。见回血后见回血后，右手固定注射右手固定注射器，用左手缓缓抽出注射器针器，用左手缓缓抽出
4、注射器针栓，至所需血量后，解除压脉栓，至所需血量后，解除压脉带，放松拳头，以消毒棉签压带，放松拳头，以消毒棉签压住穿刺孔，拔出针头住穿刺孔，拔出针头 第5页，讲稿共49张，创作于星期三第6页，讲稿共49张，创作于星期三部位：中指或无名指尖内侧、耳垂；半岁以下拇指或足部，部位：中指或无名指尖内侧、耳垂；半岁以下拇指或足部，特殊人员视情况而定特殊人员视情况而定所用器材：采血针、吸管所用器材：采血针、吸管采血步骤及注意事项：避免交叉应严格实行一人一针制；采血步骤及注意事项：避免交叉应严格实行一人一针制；穿刺的深度的适当，切忌用力挤压，以免混入组织液，穿刺的深度的适当，切忌用力挤压，以免混入组织液，影
5、响检验结果。影响检验结果。皮肤采血法（毛细血管采血法）皮肤采血法（毛细血管采血法）第7页，讲稿共49张，创作于星期三部位：部位：主要是肘静脉。主要是肘静脉。采血器材：采血器材：真空采血装置，头套式、头皮静脉式两种真空采血装置，头套式、头皮静脉式两种真空采血法（负压采血法）真空采血法（负压采血法）第8页，讲稿共49张，创作于星期三采血步骤及注意事项：采血步骤及注意事项：利用真空贮血管中的负压利用真空贮血管中的负压原理，自动定量的将血液引入贮血管内；瓶塞穿刺针外原理，自动定量的将血液引入贮血管内；瓶塞穿刺针外具有止血护套，使用时请勿将其取下；采集血样后，针具有止血护套，使用时请勿将其取下；采集血样
6、后，针对有输液要求的病患者，医务人员可将软座与输液器相对有输液要求的病患者，医务人员可将软座与输液器相接进行输液，减少病人的静脉穿刺次数；一次性使用，接进行输液，减少病人的静脉穿刺次数；一次性使用，用后销毁。用后销毁。既有利于标本的收集运送和保存，又便于防止血液交叉感既有利于标本的收集运送和保存，又便于防止血液交叉感染，已开始在国内推广使用。染，已开始在国内推广使用。第9页，讲稿共49张，创作于星期三第10页，讲稿共49张，创作于星期三方法学评价方法学评价 静脉采血静脉采血 皮肤采血皮肤采血 真空采血真空采血缺点缺点 不同抗凝剂的使用，不同抗凝剂的使用，限制了重复实验；限制了重复实验；价格高价
7、格高 改变血液性质，影改变血液性质，影 易于溶血、凝血易于溶血、凝血 响有形成分的形态响有形成分的形态;和可混入组织液和可混入组织液 环境污染环境污染优点优点 标本代表性大，无标本代表性大，无 价廉、快速、操作价廉、快速、操作 减少减少溶血，操溶血，操 组织液影响，适于组织液影响，适于 简便，标本可直接简便，标本可直接 作规范，防止作规范，防止 临床研究，可重复临床研究，可重复 测定测定 交叉感染，保交叉感染，保 实验和追加其他实实验和追加其他实 护护环境环境 验验第11页，讲稿共49张，创作于星期三 质量控制质量控制n患者：患者：活动情况、精神状态、药物、年龄、性别标本采集等活动情况、精神状
8、态、药物、年龄、性别标本采集等n采血：采血：操作规范操作规范n溶血：溶血：采集、转移、保管、分离采集、转移、保管、分离n血标本处理：血标本处理：立即送检立即送检n实验结果分析：实验结果分析：药物、饮食的影响；密切结合临床药物、饮食的影响；密切结合临床第12页，讲稿共49张，创作于星期三 二、抗凝剂选择二、抗凝剂选择n抗凝：抗凝：用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固活性，以阻止血液凝固 n抗凝剂：抗凝剂：能够阻止血液凝固的物质，称抗凝剂能够阻止血液凝固的物质，称抗凝剂第13页，讲稿共49张，创作于星期三 乙二胺四乙酸
9、（乙二胺四乙酸（EDTAEDTA）盐）盐抗凝原理：抗凝原理：螯合钙离子螯合钙离子使用方法：使用方法：15g/L15g/L浓度浓度EDTA EDTA 和血液和血液 1 1：1010适用范围：适用范围：对血细胞形态、血小板计数影响小；影响血小对血细胞形态、血小板计数影响小；影响血小 板聚集板聚集和白细胞吞噬功能；不适合做凝血象检验及血小板功能试验和白细胞吞噬功能；不适合做凝血象检验及血小板功能试验 第14页，讲稿共49张，创作于星期三 草酸盐草酸盐 （sodium oxalatesodium oxalate）n草酸钠草酸钠 、草酸钾、草酸铵、草酸钾、草酸铵n原理：原理：草酸盐可与血中钙离子生成草酸
10、钙沉淀，从而阻止血液草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固凝固n使用方法：使用方法：草酸钠草酸钠0.1mol/L 0.1mol/L 和血液和血液1 1：9 9n适用范围适用范围：凝血象检查凝血象检查第15页，讲稿共49张，创作于星期三 肝素（肝素（heparinheparin）原理：原理：低浓度时抑制因子低浓度时抑制因子aa、和和PFPF3 3之间的作用，加强抗凝血酶之间的作用，加强抗凝血酶（AT-AT-）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成,还能抑制凝还能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子血酶的自我催化及抑制因子的作用；高浓度时阻断凝血酶和纤维的
11、作用；高浓度时阻断凝血酶和纤维蛋白的反应蛋白的反应适用方法：适用方法：1g/L1g/L浓度的肝素钠与血液浓度的肝素钠与血液 1 1：1010优点：优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易溶血、能耐高温适用范围：适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积）红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞比积）和多种生化分析和多种生化分析第16页，讲稿共49张，创作于星期三 枸橼酸盐（枸橼酸三钠）枸橼酸盐（枸橼酸三钠）原理：原理：螯合钙离子螯合钙离子使用方法：使用方法：配成配成109 mmol/L109 mmol/L的浓度和血液的浓度和血
12、液1 1：9 9 106 mmol/L 106 mmol/L的浓度和血液的浓度和血液1 1：4 4适用范围：适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）第17页，讲稿共49张，创作于星期三 物理方法抗凝物理方法抗凝脱纤维蛋白：脱纤维蛋白：将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血成凝块。适维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血成凝块。适用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查。用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查。第18页，讲稿共49张，创作于星期三 血液的贮存血液的贮存 1.1.血液标本检验前的预处
13、理血液标本检验前的预处理 n分离血清或血浆分离血清或血浆 n预温血浆或血清预温血浆或血清 n分离细胞分离细胞 第19页，讲稿共49张，创作于星期三n冷藏保存冷藏保存:血浆在血浆在44保存保存24h24h后，某些凝血因子活性减少后，某些凝血因子活性减少95%95%。供血。供血细胞分析仪使用的细胞分析仪使用的EDTA-kEDTA-k2 2抗凝全血应保存于室温，但不宜超过抗凝全血应保存于室温，但不宜超过8h8h，如，如果在果在44保存可使血小板计数结果减低。保存可使血小板计数结果减低。n冷冻保存冷冻保存:要长时间保存血液中有活性的成分如凝血因子、酶类等，要长时间保存血液中有活性的成分如凝血因子、酶类
14、等，可采取分离血清或血浆后快速深低温冷冻的方式，冷冻的标本一般应避可采取分离血清或血浆后快速深低温冷冻的方式，冷冻的标本一般应避免反复冻融。免反复冻融。n根据检验项目要求有些血液标本要求避光、隔绝空气等根据检验项目要求有些血液标本要求避光、隔绝空气等 2.2.血液标本的保存血液标本的保存第20页，讲稿共49张，创作于星期三3.3.血液标本检验后的处理血液标本检验后的处理 血血源源性性污污染染是是医医源源性性污污染染的的主主要要来来源源之之一一，检检验验后后的的血血液液标标本本处处理理不不当当，其其危危害害极极大大。对对于于检检验验完完毕毕的的血血液液标标本本首首先先要要进进行行高高压压灭灭菌菌
15、，然然后后再再进进行行无无害害化化处处理理。带带有有血血液液的的检检验验器器材材要要用用消消毒毒液液浸浸泡泡。采采血血用用的的注注射射器器要要进进行行毁毁形形、消消毒毒并并进进行行无无害化处理。害化处理。第21页，讲稿共49张，创作于星期三第二节第二节 血液涂片制备和细胞染色血液涂片制备和细胞染色 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器
16、结果的简易方法。血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。血涂片的用途：血涂片的用途：血细胞形态学检验、网织红、异常血细胞形态学检验、网织红、异常 寄生虫检验寄生虫检验。第22页，讲稿共49张，创作于星期三 一、血液涂片制备一、血液涂片制备将推玻片向将推玻片向1 1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速度向后，以一定均匀的速度向2 2的方向滑动。的方向滑动。第23页，讲稿共49张，创作于星期三图图1-3 1-3 血涂片制备示意图（上：侧面观，下：正面观）血涂片制备示意图（上：侧面观，下：正面观）第24页，讲稿共49张，创作于星期三 血涂片质
17、量评价血涂片质量评价均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧注意：血滴大，速度快、角度大注意：血滴大，速度快、角度大-血膜厚血膜厚一张良好血涂片的标准是：厚薄适宜、头体尾分明、一张良好血涂片的标准是：厚薄适宜、头体尾分明、细胞分布均匀、边缘整齐、两侧及两头留有空隙。细胞分布均匀、边缘整齐、两侧及两头留有空隙。第25页，讲稿共49张，创作于星期三第26页，讲稿共49张，创作于星期三第27页，讲稿共49张，创作于星期三 二、血液二、血液细胞染色细胞染色 染料：生物学染色剂，将生物组织细胞和病原染料：生物学染色剂，将生物组织细胞和病原体染色，在显微镜下观察结构。体染色，在显微镜下
18、观察结构。发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。色和被染组织亲合。第28页，讲稿共49张，创作于星期三碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核 的染料。如亚甲蓝、天青。的染料。如亚甲蓝、天青。酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧 烷烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合 细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。嗜酸性颗粒成分等。复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如
19、瑞氏染料复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料第29页，讲稿共49张，创作于星期三 细胞染色原理：细胞染色原理：一般以它们的物理现象和一般以它们的物理现象和/或化学现象为依据或化学现象为依据物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等化学作用：化学作用：a.a.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带
20、正电荷的碱性物质结合。合。第30页，讲稿共49张，创作于星期三b.b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同 数量的氨基（数量的氨基（-NH-NH2 2）和羧基（）和羧基（-COOH-COOH），同时还有其），同时还有其 它活性基团。在游离状态时，它活性基团。在游离状态时，-NH-NH2 2获得一个获得一个H H+变成变成 带带正电的正电的-NH-NH3 3+，而，而-COOH-COOH失去一个失去一个H H+变成带负电的变成带负电的-COO-COO-。分。分别与不同染料结合。别与不同染料结合。c.c.周围环境的酸碱度：如环境周围环境的酸碱度：如环
21、境pHpHpIpI（pI pI 为等电为等电 点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pHpHpIpI，则结合碱性染料，则结合碱性染料。第31页，讲稿共49张，创作于星期三 细胞染色法的类型细胞染色法的类型 普通染色法：普通染色法：经物理和经物理和/或化学作用的吸附、结合或化学作用的吸附、结合荧光染色法：荧光染料，荧光显微镜荧光染色法：荧光染料，荧光显微镜细胞活体染色法：活体染料如灿烂甲酚蓝等细胞活体染色法：活体染料如灿烂甲酚蓝等细胞化学染色法：用化学反应显示细胞内某种成分细胞化学染色法：用化学反应显示细胞内某种成分细胞免疫化学染色法（应用单克隆抗体
22、技术、酶标记技细胞免疫化学染色法（应用单克隆抗体技术、酶标记技术）术）第32页，讲稿共49张，创作于星期三 瑞氏染色法瑞氏染色法 瑞氏染料瑞氏染料 由酸性染料伊红（由酸性染料伊红（eosin,Eeosin,E-）和碱性染料亚甲蓝）和碱性染料亚甲蓝(methylene blue,M(methylene blue,M+)组成有复合染料。亚甲蓝为四甲基硫组成有复合染料。亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。化美蓝。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。市售美蓝中部分
23、已被氧化为天青。伊红通常为钠盐。将伊市售美蓝中部分已被氧化为天青。伊红通常为钠盐。将伊红和美蓝溶解在甲醇中，即瑞氏染料。红和美蓝溶解在甲醇中，即瑞氏染料。第33页，讲稿共49张，创作于星期三 染色原理染色原理 细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以不一样。因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性看到各种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱
24、性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物嗜酸性物质质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质嗜碱性物质；中性颗粒呈；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质中性物质。M M+CL+NaCL+Na+E ME+NaCLE ME+NaCL 美蓝美蓝 伊红伊红 伊红化美蓝（瑞氏染料）伊红化美蓝（瑞氏染料）第34页，讲稿共49张，创作于星期三 图图1-4 1-4 瑞氏染
25、色原理示意图瑞氏染色原理示意图 第35页，讲稿共49张，创作于星期三PHPH对细胞染色有影响对细胞染色有影响 细胞各种成分均为蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，细胞各种成分均为蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液所带电荷随溶液PHPH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度度十分敏感，染色用玻片必须清洁，无酸碱污染。配制瑞氏染液十分敏感，染色用玻片必须清洁，无
26、酸碱污染。配制瑞氏染液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。至造成错误。第36页，讲稿共49张，创作于星期三 试剂试剂 WrightWright染液：瑞氏染粉染液：瑞氏染粉0.1g,0.1g,甲醇甲醇60.0ml60.0ml甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增加细胞与染料接触表
27、面积，提高对染料的吸附作用，增强染色染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。效果。磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBSPBS，pH 6.4-6.8pH 6.4-6.8）：磷酸二氢钾（无水）：磷酸二氢钾（无水）0.3g0.3g，磷酸氢二钠（无水），磷酸氢二钠（无水）0.2g,0.2g,蒸馏水加到蒸馏水加到1000ml1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正配好后用磷酸盐溶液校正pHpH，塞紧瓶口备用。，塞紧瓶口备用。第37页，讲稿共49张，创作于星期三 染色方法染色方法1.1.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。2.2.加瑞氏染液覆盖血膜，固定加瑞氏
28、染液覆盖血膜，固定1min1min。3.3.滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-105-10分钟。分钟。4.4.用清水冲洗，待干后镜检。用清水冲洗，待干后镜检。第38页，讲稿共49张，创作于星期三【质量控制质量控制】血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。间长些效果好。染液不能过少，以防蒸发沉淀。染液不能过少，以防蒸发沉淀。冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防止染料冲洗时不能先倒掉染液，应以流
29、水冲，防止染料沉着。冲洗时间也不能长。沉着。冲洗时间也不能长。染色过淡，可复染。染色过淡，可复染。染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色.第39页，讲稿共49张，创作于星期三第40页，讲稿共49张，创作于星期三【染色结果评价染色结果评价】n 正正常常情情况况：血血膜膜外外观观呈呈淡淡琥琥珀珀色色。在在显显微微镜镜下下红红细细胞胞染染成成粉粉红红色色，在在厚厚薄薄均均匀匀处处略略有有碟碟状状感感。白白细细胞胞胞胞质质中中的的颗颗粒粒能能显显示示出出各各种种细细胞胞的特有色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。的特有色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
30、n 染染色色环环境境偏偏酸酸：则则红红细细胞胞和和嗜嗜酸酸性性颗颗粒粒偏偏红红，白白细细胞胞核核呈呈浅浅蓝蓝色色或或不不着着色色，染染色色过过酸酸pH3.5pH3.5时时，则则呈呈现现一一片片红红色色，白白细细胞胞中中除除嗜嗜酸酸性性颗粒外均不着色。颗粒外均不着色。n 染染色色环环境境偏偏碱碱：则则所所有有细细胞胞呈呈灰灰蓝蓝色色，微微偏偏碱碱者者红红细细胞胞暗暗红红、白白细细胞胞颗颗粒粒深深暗暗。嗜嗜酸酸性性颗颗粒粒可可染染成成暗暗褐褐色色甚甚至至黑黑紫紫色色或或蓝蓝色色。中中性性颗颗粒粒也也偏偏粗染成紫黑色，血膜过厚的地方呈绿色。粗染成紫黑色，血膜过厚的地方呈绿色。第41页，讲稿共49张，
31、创作于星期三姬姆萨染色法姬姆萨染色法 原理原理 吉姆萨染液由吉姆萨染液由天青，伊红天青，伊红组成。染色原理和结组成。染色原理和结 果与果与瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较瑞特染色法基本相同。但本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。好，结构显示更不清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液为兼顾二者之长，可用复合染色法。即以稀释吉姆萨液代替缓冲液，按瑞特染色法染代替缓冲液，按瑞特染色法染10min10min。或先用瑞特染色法染。或先用瑞特染色法染色后，再用稀释吉姆萨复染。色后，再用稀释吉姆萨复染。第42
32、页，讲稿共49张，创作于星期三吉姆萨染料吉姆萨染料 1.0g 1.0g 甘油甘油 66.0ml66.0ml甲醇（甲醇（ARAR）66.0ml66.0ml 染色方法染色方法 1.1.甲醇固定干燥血膜甲醇固定干燥血膜3-5min3-5min 2.2.将血膜在染液中浸染将血膜在染液中浸染10-30min10-30min 3.3.流水冲洗流水冲洗,待干后镜检待干后镜检 试剂试剂 第43页，讲稿共49张，创作于星期三 瑞氏瑞氏-吉姆萨染色吉姆萨染色【原理原理】将瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合后对细胞进将瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合后对细胞进行染色，其染色原理同瑞特和吉姆萨染色法，但染色效果更行
33、染色，其染色原理同瑞特和吉姆萨染色法，但染色效果更佳，因为其综合了瑞士和吉姆萨染色法的优点。佳，因为其综合了瑞士和吉姆萨染色法的优点。第44页，讲稿共49张，创作于星期三【试剂试剂】n瑞特染料瑞特染料 1.0g1.0gn吉姆萨染料吉姆萨染料 0.3g0.3gn甲醇甲醇 加至加至500ml500ml 先先将将瑞瑞特特染染料料和和吉吉姆姆萨萨染染料料充充分分研研磨磨混混匀匀，甲甲醇醇溶溶解解倒倒入入容容器器中中，未未溶溶解解完完的的继继续续加加入入甲甲醇醇研研磨磨，重重复复多多次次，最最后后把染液加至把染液加至500ml500ml。第45页，讲稿共49张，创作于星期三 染色方法染色方法 血片加滴加
34、染液血片加滴加染液5 5滴，并立即将染液盖满血膜，滴，并立即将染液盖满血膜，2min2min后加入后加入pH6.4-6.8pH6.4-6.8磷酸盐缓冲液（同瑞氏染液）缓冲液磷酸盐缓冲液（同瑞氏染液）缓冲液1010滴，滴，10min10min后用流水冲洗干净，待干后镜检。后用流水冲洗干净，待干后镜检。第46页，讲稿共49张，创作于星期三【质量控制质量控制】n同瑞同瑞氏氏染色法染色法第47页，讲稿共49张，创作于星期三【方法学评价方法学评价】瑞瑞氏氏染染液液和和吉吉姆姆萨萨染染液液对对细细胞胞进进行行染染色色时时有有各各自自的的显显色色特特征征，前前者者对对细细胞胞质质和和颗颗粒粒着着色色较较好好，后后者者对对细细胞胞核核结结构构显显示示清清晰晰。因因此此将将二二者者结结合合，能能取取长长补补短短、集集中中优优势势，用用该该混混合合染染液液对对血血细细胞胞进进行行染染色色，其其细细胞胞核核、细细胞胞质质和和细细胞胞内内颗颗粒粒均均着着色色鲜鲜艳艳，对对比比鲜鲜明明。瑞瑞氏氏-吉吉姆姆萨萨混混合合染染色色法法是是临临床床上上广广泛泛使使用的方法。用的方法。第48页，讲稿共49张，创作于星期三感谢大家观看第49页，讲稿共49张，创作于星期三