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1、关于平面色谱法级药学关于平面色谱法级药学第1页，讲稿共57张，创作于星期六第一节第一节 平面色谱法的分类和原理平面色谱法的分类和原理第二节第二节 薄层色谱法薄层色谱法第三节第三节 纸色谱法纸色谱法本章内容本章内容第2页，讲稿共57张，创作于星期六第一节平面色谱法的分类和原理第一节平面色谱法的分类和原理一、平面色谱法的分类一、平面色谱法的分类 组分在以平面为载体的固定相和流动相之间吸附或分配平衡而组分在以平面为载体的固定相和流动相之间吸附或分配平衡而进行的一种色谱方法。进行的一种色谱方法。按按操操作作方方式式 1薄层色谱法薄层色谱法（thin layer chromatography）2 纸色谱
2、法纸色谱法(paper chromatography)3 薄层电泳法薄层电泳法(thin layer electrophoresis)吸附薄层色谱法吸附薄层色谱法分配薄层色谱法分配薄层色谱法分子排阻薄层色谱法分子排阻薄层色谱法等等等等按按分分离离机机制制第3页，讲稿共57张，创作于星期六二二 平面色谱法参数平面色谱法参数1.定性参数：反映组分的保留行为定性参数：反映组分的保留行为2.相平衡参数：描述分离过程相平衡参数：描述分离过程3.面效参数：衡量分离效能面效参数：衡量分离效能4.分离参数：衡量分离条件的优劣分离参数：衡量分离条件的优劣第4页，讲稿共57张，创作于星期六（一）（一）定性参数定性
3、参数1 比移值比移值(Retardation factor,Rf值值)溶质移动距离与流动相移动距离之比。溶质移动距离与流动相移动距离之比。Rf=L/L0 （适宜范围（适宜范围0.20.8，最佳，最佳0.30.5）L原点至斑点中心的距离原点至斑点中心的距离 L0原点至溶剂前沿的距离原点至溶剂前沿的距离 展开溶剂展开溶剂原点原点L0L前沿前沿第5页，讲稿共57张，创作于星期六1 比移值比移值(Retardation factor,Rf值值)Rf数值与组分及色谱条件（薄层板活性，展开剂等）和温度有数值与组分及色谱条件（薄层板活性，展开剂等）和温度有关关 实验中满足下列条件，可获得真实实验中满足下列条
4、件，可获得真实Rf值：值：a 展开槽密闭不泄露，薄层板周围空间被展开剂蒸汽所饱展开槽密闭不泄露，薄层板周围空间被展开剂蒸汽所饱和，无边缘效应和，无边缘效应;b 沿分离轨迹固定相与流动相无梯度变化沿分离轨迹固定相与流动相无梯度变化;c 展开剂的前沿位置能正确测定。展开剂的前沿位置能正确测定。第6页，讲稿共57张，创作于星期六2 相对比移值相对比移值(relative Rf；Rr)Rr=Rf(i)/Rf(s)=L(i)/L(s)与组分、色谱条件、参考物质有关。与组分、色谱条件、参考物质有关。Rr值可以大于值可以大于1，也可以小于，也可以小于1。重现性和可比性均比重现性和可比性均比Rf值好，能消除系
5、统误差（值好，能消除系统误差（参参考物质与组分在完全相同的条件下展开）考物质与组分在完全相同的条件下展开）第7页，讲稿共57张，创作于星期六1 分配系数分配系数 K=2 保留因子保留因子 k=3 分配系数分配系数K、保留因子、保留因子 k与与Rf值的关系：值的关系：(二二)相平衡参数相平衡参数组分在固定相中的量组分在固定相中的量组分在流动相中的量组分在流动相中的量CsVsCmVmCsCmCs、Cm分别表示在达到分配平衡后，某物质在固定相和流动相中的浓度。第8页，讲稿共57张，创作于星期六（三）面效参数（三）面效参数1 理论塔板数（理论塔板数（n）n=16(L/W)22 塔板高度（塔板高度（H）
6、H=L0/n（四）分离参数（四）分离参数1 分离度（分离度（R）R12 分离数（分离数（SN）R=1.177时，时，SN=L0/(b 0+b 1)-1,dW1W2Rf=0Rf=1前沿前沿原点原点SN:7 10（一般（一般TLC板）板）10 20（高效（高效TLC板）板）第9页，讲稿共57张，创作于星期六第二节薄层色谱法第二节薄层色谱法(thin layer chromatography；TLC)一一 定义、特点、主要类型定义、特点、主要类型二二 吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂三三 薄层色谱操作方法薄层色谱操作方法四四 定性和定量分析定性和定量分析五五 高效薄层色谱法高
7、效薄层色谱法六六 薄层扫描法简介薄层扫描法简介七七 在药物研究中的应用在药物研究中的应用第10页，讲稿共57张，创作于星期六薄层色谱法特点：薄层色谱法特点：1 分析速度快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。分析速度快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。2 试样预处理简单，对试样限制少。试样预处理简单，对试样限制少。3 载样量比较大，适用于制备。载样量比较大，适用于制备。4 仪器简单，操作方便。仪器简单，操作方便。5 分离能力较强，分析结果直观。分离能力较强，分析结果直观。一一 薄层色谱法定义、特点及主要类型薄层色谱法定义、特点及主要类型定义：定义：将吸附剂或载体涂布成一均匀薄层，点样，（密将吸
8、附剂或载体涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质比较）进闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质比较）进行定性定量。行定性定量。第11页，讲稿共57张，创作于星期六薄层色谱法的主要类型薄层色谱法的主要类型1 吸附薄层色谱法吸附薄层色谱法原理原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。再吸附、再解吸附的过程。吸附系数吸附系数 Ka 大小不同实现分离大小不同实现分离 极性强的组分极性强的组分 Ka 大，大，Rf值小；值小；极性弱的组分极性弱的组分 Ka 小，小，Rf值大。值大。第12页，讲稿共57张，创作于星期六2 分配薄层色
9、谱法分配薄层色谱法原理：多次分配的过程，分配系数原理：多次分配的过程，分配系数（溶解度）大小不同实现分离（溶解度）大小不同实现分离分类：按流动相与固定相极性大小分类：按流动相与固定相极性大小（1）正相色谱）正相色谱 固定相：含水硅胶固定相：含水硅胶 流动相：有机溶剂。流动相：有机溶剂。极性强的组分极性强的组分K大，大，Rf 值小。值小。（2）反相色谱：）反相色谱：固定相：烷基化学键合相固定相：烷基化学键合相 流动相：水有机溶剂。流动相：水有机溶剂。极性强的组分极性强的组分K小，小，Rf 值大。值大。第13页，讲稿共57张，创作于星期六3 凝胶薄层色谱法：凝胶薄层色谱法：用葡聚糖凝胶或聚丙烯酰胺
10、凝胶等铺成薄层板进行大分子用葡聚糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶等铺成薄层板进行大分子化合物的分离。凝胶是具有一定孔径的网状结构物质，是利用化合物的分离。凝胶是具有一定孔径的网状结构物质，是利用其网孔大小把分子大小和形状不同的大分子化合物分开（一般其网孔大小把分子大小和形状不同的大分子化合物分开（一般是分开成组，而不能分开为单一化合物），又称为排阻或分子是分开成组，而不能分开为单一化合物），又称为排阻或分子筛层析法。筛层析法。4 胶束薄层色谱法胶束薄层色谱法(micellar TLC)：用低浓度表面活性剂的水溶液为流动相，当所用的表面活性剂用低浓度表面活性剂的水溶液为流动相，当所用的表面活性剂水溶液需超
11、过某一浓度（临界胶束浓度水溶液需超过某一浓度（临界胶束浓度CMC）时多余的表面活性）时多余的表面活性剂不再溶解，而聚集成胶束（胶粒），因流动相为胶体分散剂不再溶解，而聚集成胶束（胶粒），因流动相为胶体分散体系，故称为胶束液相色谱。体系，故称为胶束液相色谱。薄层色谱法的主要类型薄层色谱法的主要类型第14页，讲稿共57张，创作于星期六二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂（一）吸附剂（一）吸附剂 1 硅胶硅胶：多孔性无定形粉末，表面带有硅醇基多孔性无定形粉末，表面带有硅醇基 （Si-OHSi-OH），呈弱酸性），呈弱酸性,表面表面pHpH5 5。原理：原理：硅醇基硅醇基(
12、吸附中心吸附中心)与极性基团形成氢键与极性基团形成氢键 （吸附性）。组分与硅醇基形成氢键（吸附性）。组分与硅醇基形成氢键 （被吸附）的能力不同而分离。（被吸附）的能力不同而分离。应用：应用：酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等。醛类等。碱性物质与硅胶作用，展开时被吸附、碱性物质与硅胶作用，展开时被吸附、拖尾、甚至展不开。拖尾、甚至展不开。第15页，讲稿共57张，创作于星期六硅胶硅胶活度活度与含水量的关系：含水量高，活性级高，活度低。与含水量的关系：含水量高，活性级高，活度低。活化：活化：加热至加热至100左右，除去吸附水提高度。左右，除去吸附水提高度。
13、（注意温度不可过高，硅醇基（注意温度不可过高，硅醇基硅氧基硅氧基）分离效率：分离效率：与其与其粒度粒度、孔径孔径及及表面积表面积等有关。等有关。一般地一般地 (10-40(10-40m)(100nm)(400-600mm)(100nm)(400-600m2 2/g)/g)常用硅胶：常用硅胶：硅胶硅胶H H 不含黏合剂不含黏合剂硅胶硅胶G(Gypsum,G(Gypsum,石膏石膏)：含煅石膏（：含煅石膏（CaSOCaSO4 41/2H1/2H2 2O O）硅胶硅胶GFGF254254：含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌，：含煅石膏和一种无机荧光剂，即锰激活的硅酸锌，在在254nm254n
14、m紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。第16页，讲稿共57张，创作于星期六2 2 氧化铝（氧化铝（活度也与含水量有关）活度也与含水量有关）碱性氧化铝碱性氧化铝(pH9.0)分离中性或碱性化合物，如生物碱、脂分离中性或碱性化合物，如生物碱、脂溶性维生素等；溶性维生素等；中性氧化铝中性氧化铝(pH7.5)分离酸性及对碱不稳定的化合物；分离酸性及对碱不稳定的化合物；酸性氧化铝酸性氧化铝(pH4.0)酸性化合物的分离。酸性化合物的分离。第17页，讲稿共57张，创作于星期六3 3 聚酰胺聚酰胺聚己内酰胺：白色多孔性非晶型粉末聚己内酰胺：白色多孔性非晶型粉末酰胺基与化合物质子给体形
15、成氢键而对化合物产生吸附。酰胺基与化合物质子给体形成氢键而对化合物产生吸附。应用：酚、酸、硝基、醌类等分离应用：酚、酸、硝基、醌类等分离第18页，讲稿共57张，创作于星期六（二）展开剂（二）展开剂(流动相流动相)选择原则：选择原则：同吸附柱色谱，根据同吸附柱色谱，根据被分离物质的极性被分离物质的极性、吸附吸附剂活度剂活度、展开剂极性展开剂极性Stahl简图：简图：例：极性物质例：极性物质 活度低（活性级大）的活度低（活性级大）的吸附剂吸附剂 极性展开剂极性展开剂 第19页，讲稿共57张，创作于星期六 常用溶剂的极性强弱顺序常用溶剂的极性强弱顺序 水酸吡啶甲醇乙醇正丙醇水酸吡啶甲醇乙醇正丙醇丙酮
16、乙酸乙酯乙醚氯仿二氯甲烷甲丙酮乙酸乙酯乙醚氯仿二氯甲烷甲苯苯三氯乙烷四氯化碳苯苯三氯乙烷四氯化碳 环己烷环己烷 石油醚石油醚极性强的溶剂，洗脱能力强极性强的溶剂，洗脱能力强第20页，讲稿共57张，创作于星期六单一溶剂展开单一溶剂展开 分离效果分离效果Rf？Rf值太小：加极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等；值太小：加极性强的溶剂，如乙醇、丙酮等；Rf值太大，加极性弱的溶剂，如环己烷、石油醚值太大，加极性弱的溶剂，如环己烷、石油醚等；等；可加入一定比例的酸或碱可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。使斑点集中。展开剂展开剂混合溶剂混合溶剂第21页，讲稿共57张，创作于星期六三、薄层色谱操作方法三、薄层色谱操
17、作方法1 制板均匀制板均匀2 点样集中点样集中3 展开展开(多种方式多种方式)预饱和预饱和4 斑点定位斑点定位第22页，讲稿共57张，创作于星期六1 薄层板的制备薄层板的制备（1 1）薄层板的选择）薄层板的选择表面光滑、平整、洁净，厚度一致表面光滑、平整、洁净，厚度一致玻璃板、塑料板或铝箔玻璃板、塑料板或铝箔大小按实验需要选规格：大小按实验需要选规格：10 cm10 cm 10 cml5 cm 20 cm10 cm 20 cm20 cm 第23页，讲稿共57张，创作于星期六（2 2）薄层板的涂布：）薄层板的涂布：将固定相、粘合剂和水，按比例混合将固定相、粘合剂和水，按比例混合均匀、无气泡的固定
18、相匀浆均匀、无气泡的固定相匀浆均匀玻璃板均匀玻璃板(厚度为厚度为0.250.5mm)玻板置室温下水平台上晾干玻板置室温下水平台上晾干在反射光及透射光下检视在反射光及透射光下检视薄层板表面应均匀，干整，薄层板表面应均匀，干整，无麻点、无气泡、无破损及污染。无麻点、无气泡、无破损及污染。研磨研磨涂布（使用涂布器、倾倒涂层、涂布（使用涂布器、倾倒涂层、浸涂、喷涂）浸涂、喷涂）第24页，讲稿共57张，创作于星期六（3）薄层板的活化）薄层板的活化一般活化：硅胶一般活化：硅胶110烘烘30分钟，分钟，氧化铝氧化铝110烘烘45分钟分钟 强活化：强活化：硅胶硅胶150烘烘4h，氧化铝氧化铝180烘烘4h冷却
19、后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。第25页，讲稿共57张，创作于星期六2 点样点样样品溶液：浓度样品溶液：浓度0.010.010.10.1,溶剂：有机溶剂，如乙醇溶剂：有机溶剂，如乙醇或甲醇等，避免用水；或甲醇等，避免用水；点样工具：点样毛细管或微量注射器点样工具：点样毛细管或微量注射器点样基线距底边点样基线距底边1.0-1.5cm1.0-1.5cm样点一般为圆点，直径一般样点一般为圆点，直径一般2-4mm2-4mm采用分量多次点，每次点样需自然干燥或电吹风吹干后，采用分量多次点，每次点样需自然干燥或电吹风吹干后，才能二次点样。才能二次
20、点样。点样量点样量:几微升，薄层定量或薄层制备时，可几百微升几微升，薄层定量或薄层制备时，可几百微升点样时必须注意勿损伤薄层表面。点样时必须注意勿损伤薄层表面。第26页，讲稿共57张，创作于星期六3 展开展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点的深度为距原点5mm5mm为宜，密闭，待展开至规定距离，除另有为宜，密闭，待展开至规定距离，除另有规定外，一般为规定外，一般为8 815cm15cm，取出薄层板，标记溶剂前沿，晾干，取出薄层板，标记溶剂前沿，晾干，按具体试验的规定检测。按具体试验的规定检测。展开缸如需预先用展开
21、剂预平衡，可在缸中加入适量的展展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，开剂，必要时并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡。一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡。避免边缘效应。避免边缘效应。第27页，讲稿共57张，创作于星期六边缘效应：边缘效应：同一组分在同一板上处同一组分在同一板上处于边缘斑点的于边缘斑点的Rf比处于中心的比处于中心的Rf值值大的现象。大的现象。产生原因：产生原因：展开剂的展开剂的蒸发速度蒸发速度从薄层中央到从薄层中央到两边缘逐渐增加，即两边缘逐渐增加，即处于边缘的溶剂处于边缘的溶剂
22、挥发速度较快挥发速度较快。在相同条件下，致。在相同条件下，致使同一组分在边缘的迁移距离大于使同一组分在边缘的迁移距离大于中心的迁移距离。中心的迁移距离。薄层色谱的边缘效应薄层色谱的边缘效应展开剂：展开剂：氯仿氯仿-甲醇（甲醇（95：5）展开距离展开距离10cm第28页，讲稿共57张，创作于星期六展开一个展开一个TLC板，一个紫色的斑点被分离为一个红色斑点与一个蓝色斑点板，一个紫色的斑点被分离为一个红色斑点与一个蓝色斑点 第29页，讲稿共57张，创作于星期六样品的二次展开样品的二次展开B 一次展开一次展开C 二次展开二次展开A 点样点样溶溶剂剂展展开开方方向向第30页，讲稿共57张，创作于星期六
23、4 斑点的确定斑点的确定斑点位置的确定方法：斑点位置的确定方法：（1）在日光灯下观察，画出有色物质的斑点位置；）在日光灯下观察，画出有色物质的斑点位置；（2）在紫外灯下（）在紫外灯下（254nm或或365nm）观察有无暗斑）观察有无暗斑 或荧光斑点，并或荧光斑点，并记录其颜色、位置及强弱。记录其颜色、位置及强弱。（3）254nm紫外灯下，掺入了少量荧光物质的薄板呈黄绿色荧光，被紫外灯下，掺入了少量荧光物质的薄板呈黄绿色荧光，被测组分在荧光薄层板上猝灭而产生暗斑进行检出。测组分在荧光薄层板上猝灭而产生暗斑进行检出。(注意带防护眼注意带防护眼镜镜)（4）利用显色剂显色斑点（适合无色无紫外吸收的物质
24、）。）利用显色剂显色斑点（适合无色无紫外吸收的物质）。第31页，讲稿共57张，创作于星期六通用型显色剂通用型显色剂：碘：碘：生物碱、氨基酸类、肽类、脂类、皂苷类生物碱、氨基酸类、肽类、脂类、皂苷类10硫酸乙醇溶液硫酸乙醇溶液：105加热加热10-15min，大多数有机大多数有机物（红色、棕色、紫色或出现荧光）物（红色、棕色、紫色或出现荧光）0.05荧光黄甲醇溶液荧光黄甲醇溶液：芳香族与杂环：芳香族与杂环专属型显色剂专属型显色剂：如：如：0.3%茚三酮丁醇溶液茚三酮丁醇溶液（含（含3%醋酸）检测氨基酸及脂醋酸）检测氨基酸及脂肪伯胺类化合物，显粉红色到紫色；肪伯胺类化合物，显粉红色到紫色；等等等等
25、第32页，讲稿共57张，创作于星期六10种种精油精油通过薄层色谱展开后，再使用通过薄层色谱展开后，再使用香草醛香草醛试剂试剂显色后的效果。显色后的效果。第33页，讲稿共57张，创作于星期六四、定性和定量分析四、定性和定量分析1 1 定性分析定性分析 a a 比较比较R Rf f值或值或R Rr r值值 、斑点颜色或荧光、斑点颜色或荧光b b 常采用已知标准物质对照（同一板上展开）常采用已知标准物质对照（同一板上展开）c c 多种展开系统的多种展开系统的R Rf f值与对照品一致。值与对照品一致。2 2 定量分析定量分析a a洗脱法洗脱法b b直接定量法直接定量法b1.b1.目视比较法（如杂质检
26、查方法）目视比较法（如杂质检查方法）b2.b2.薄层扫描法薄层扫描法第34页，讲稿共57张，创作于星期六 杂质检查方法杂质检查方法1 杂质对照品比较法：杂质对照品比较法：配制试样溶液（配制试样溶液（A）和规定限量浓度的杂质对照品）和规定限量浓度的杂质对照品溶液（溶液（B）斑点颜色：试样中杂质不得比杂质对照品深斑点颜色：试样中杂质不得比杂质对照品深2 主成分自身对照法主成分自身对照法供试品溶液（供试品溶液（A1）,将其稀释一定倍数得到低将其稀释一定倍数得到低浓度溶液（浓度溶液（A2）作为对照溶液）作为对照溶液,将供试液和对照将供试液和对照液一同展开，供试液中杂质斑点颜色不得比对照液一同展开，供试
27、液中杂质斑点颜色不得比对照液主斑点深。液主斑点深。A B杂质杂质A1 A2杂质杂质主斑点主斑点第35页，讲稿共57张，创作于星期六五五 高效薄层色谱法高效薄层色谱法1 高效薄层板：商品预制板高效薄层板：商品预制板2 点样：浓溶液一次点样点样：浓溶液一次点样 点样器：铂点样器：铂-铱合金点样毛细管、微量注射器或专用铱合金点样毛细管、微量注射器或专用点样仪器。点样仪器。3 展开：与经典薄层色谱法相同的展开方式。展开：与经典薄层色谱法相同的展开方式。或专用高效薄层色谱展开槽（重现性较好）。或专用高效薄层色谱展开槽（重现性较好）。4 定量分析：均采用薄层扫描仪定量分析。定量分析：均采用薄层扫描仪定量分
28、析。第36页，讲稿共57张，创作于星期六六六 薄层扫描法简介薄层扫描法简介（一）薄层扫描法基本原理（一）薄层扫描法基本原理 用一定用一定波长波长和和强度强度的光照射到薄层斑点上进行整的光照射到薄层斑点上进行整个斑点扫描，用仪器测量个斑点扫描，用仪器测量透过斑点透过斑点或或被斑点反射被斑点反射的光的光束强度的变化达到定量的目的。束强度的变化达到定量的目的。斑点扫描积分面积斑点扫描积分面积物质含量物质含量第37页，讲稿共57张，创作于星期六（二）薄层扫描仪组成：（二）薄层扫描仪组成：主机：主机：光源：光源：可见光源可见光源 钨灯钨灯 400-800nm 紫外光源紫外光源 氘灯氘灯 200-400n
29、m （光源选择杆变换）（光源选择杆变换）分光器分光器：光栅：光栅 200-800nm 检测器检测器：光电倍增管：光电倍增管 数据处理及信号输出数据处理及信号输出第38页，讲稿共57张，创作于星期六1 薄层色谱扫描仪光束系统薄层色谱扫描仪光束系统光光波长波长1波长波长2检测器斩波器斩波器光光波长波长1检测器光光波长波长1检测器斩波器斩波器A 单光束单光束B 双光束双光束C 双波长双波长第39页，讲稿共57张，创作于星期六 2.1透射法透射法光源与检测器在薄层板上光源与检测器在薄层板上下两侧。光源发出的光经下两侧。光源发出的光经单色器成为一定波长的单单色器成为一定波长的单色光，光束照到薄层斑点色光
30、，光束照到薄层斑点上，测量透射光强度。上，测量透射光强度。实际应用少实际应用少光源单色器2 薄层色谱扫描仪测定方法薄层色谱扫描仪测定方法第40页，讲稿共57张，创作于星期六 2.2反射法反射法光源与检测器在薄层板同侧。光源与检测器在薄层板同侧。光源发出的光经单色器成为光源发出的光经单色器成为一定波长的单色光，光束照一定波长的单色光，光束照到薄层斑点上，部分被薄层到薄层斑点上，部分被薄层吸收，部分经过漫反射又折吸收，部分经过漫反射又折回表面成为反射光，测量反回表面成为反射光，测量反射光强度，得到反射光谱。射光强度，得到反射光谱。反射吸收度与物质含量有反射吸收度与物质含量有确定关系，可进行定量。确
31、定关系，可进行定量。光源单色器第41页，讲稿共57张，创作于星期六3 薄层色谱扫描仪扫描方式薄层色谱扫描仪扫描方式直线型扫描（直线型扫描（linear scan）用一束比斑点宽度略宽的光作一个方用一束比斑点宽度略宽的光作一个方向的等速扫描。向的等速扫描。锯齿型扫描锯齿型扫描(zigzag scan）或称飞点）或称飞点（flying spot）扫描）扫描 用微小的正方形光速在对斑点进行用微小的正方形光速在对斑点进行Y轴轴等速直线扫描的同时对斑点进行等速直线扫描的同时对斑点进行X轴轴等辐往复扫描，光束运动轨迹呈锯等辐往复扫描，光束运动轨迹呈锯齿形。齿形。直线扫描直线扫描锯齿扫描锯齿扫描轮廓曲线轮廓
32、曲线积分曲线积分曲线第42页，讲稿共57张，创作于星期六A B C斑点斑点ABC对于不规则斑点，两种扫描结果不一样。同一斑点对于不规则斑点，两种扫描结果不一样。同一斑点从从A、B、C三个不同方向扫描，锯齿扫描所得积分值三个不同方向扫描，锯齿扫描所得积分值变动小，而直线扫描所得积分值变动大。变动小，而直线扫描所得积分值变动大。直线扫描直线扫描锯齿扫描锯齿扫描第43页，讲稿共57张，创作于星期六4 散射参数的选择散射参数的选择非线性关系的校正非线性关系的校正曲线校正：实验前根据薄层板曲线校正：实验前根据薄层板的类型，选择合适的散射参数的类型，选择合适的散射参数（SX），由计算机根据适），由计算机根
33、据适当的修正程序，自动进行校当的修正程序，自动进行校正。曲线较直后方可进行定正。曲线较直后方可进行定量分析。量分析。岛津薄层扫描仪一般设有岛津薄层扫描仪一般设有10个散射参数，硅胶薄层板，个散射参数，硅胶薄层板，SX一般选用一般选用3，氧化铝板选，氧化铝板选7.样品量样品量吸吸光光度度DCBAA A 未校正的标准曲线未校正的标准曲线 B B 校正不够校正不够 C C 校正合适校正合适 D D 校正过头校正过头 第44页，讲稿共57张，创作于星期六5 5 定量分析法定量分析法（）外标法：（）外标法：分别配制对分别配制对照品溶液和样品溶液，先做照品溶液和样品溶液，先做出标准曲线，然后在同一块出标准
34、曲线，然后在同一块薄层板上薄层板上交叉点对照品溶交叉点对照品溶液和样品溶液，液和样品溶液，根据标准根据标准曲线（对照品含量和峰面积曲线（对照品含量和峰面积值）和样品的面积值计算出值）和样品的面积值计算出样品的含量。样品的含量。（）外标一点法（）外标一点法（）外标两点法（）外标两点法A1aC10AxCx外标一点法外标一点法A1aC10A2CxC2b外标外标两两点法点法第45页，讲稿共57张，创作于星期六6 分析误差分析误差薄层分析的误差包括三个方面：点样误差、展开误差、定位误差薄层分析的误差包括三个方面：点样误差、展开误差、定位误差和检测误差。和检测误差。采用自动点样器，误差可控制在采用自动点样
35、器，误差可控制在0.5%，熟练的分析人员用毛，熟练的分析人员用毛细管点样，误差小于细管点样，误差小于1.0%，若用微量进样器，误差会大一些。，若用微量进样器，误差会大一些。展开误差来自铺板的均匀性和样品展开效果，若采用预制的高展开误差来自铺板的均匀性和样品展开效果，若采用预制的高效薄层板，误差会明显降低，采用双波长锯齿扫描，也能有效效薄层板，误差会明显降低，采用双波长锯齿扫描，也能有效降低展开误差。降低展开误差。第46页，讲稿共57张，创作于星期六定位误差：定位误差：斑点的位置和大小判定，扩散、脱尾等易产生定斑点的位置和大小判定，扩散、脱尾等易产生定位误差。检测误差来自光源的稳定性、光检测器的
36、稳定性以位误差。检测误差来自光源的稳定性、光检测器的稳定性以及样品对光吸收（或荧光产生）的线性度等方面。为减少这及样品对光吸收（或荧光产生）的线性度等方面。为减少这些误差，需要非常精密的机电系统，这也直接导致产品高昂些误差，需要非常精密的机电系统，这也直接导致产品高昂的价格。的价格。通常情况下，薄层扫描分析的误差可控制在通常情况下，薄层扫描分析的误差可控制在3%以下。以下。第47页，讲稿共57张，创作于星期六七七 薄层色谱法在药物分析中的应用薄层色谱法在药物分析中的应用1 药物与毒物的快速鉴定；药物与毒物的快速鉴定；2 药物的鉴别和纯度检查；药物的鉴别和纯度检查；3 混合物质的分离和微量提纯（
37、包括异构体混合物质的分离和微量提纯（包括异构体的分离）；的分离）；4 复方制剂的定性与定量分析；复方制剂的定性与定量分析；5 药物及其制剂在制备和贮藏过程中的稳定药物及其制剂在制备和贮藏过程中的稳定性考察，及有关质量的研究；性考察，及有关质量的研究；卤菜中色素的鉴别卤菜中色素的鉴别第48页，讲稿共57张，创作于星期六6 体液中药物及其代谢物的分离分析；体液中药物及其代谢物的分离分析；7 中草药有效成分的分离、提纯与研究；中草药有效成分的分离、提纯与研究；8 化学药物合成反应历程的判断与控制，及中间体的质量控制；化学药物合成反应历程的判断与控制，及中间体的质量控制；9为一般柱色谱或高效液相色谱法
38、选择合适的分离条件；为一般柱色谱或高效液相色谱法选择合适的分离条件；10帮助判断分析物质的化学结构以及用于物质帮助判断分析物质的化学结构以及用于物质 相对分子质相对分子质量的测定。量的测定。11etc.七七 薄层色谱法在药物分析中的应用薄层色谱法在药物分析中的应用第49页，讲稿共57张，创作于星期六 使用薄层色谱法分离绿叶的提取物（如使用薄层色谱法分离绿叶的提取物（如菠菜菠菜）的）的7个阶段。胡萝卜素洗脱的速度很快因此只能在第个阶段。胡萝卜素洗脱的速度很快因此只能在第二步中看到。二步中看到。叶绿素叶绿素A和和B在最后一步的中间位置，在最后一步的中间位置，叶黄素叶黄素是保持黄色的第一个斑点。是保
39、持黄色的第一个斑点。从左到右：第从左到右：第1阶段阶段-第第7阶段阶段第50页，讲稿共57张，创作于星期六黑墨水在黑墨水在TLC板上的分离板上的分离 第51页，讲稿共57张，创作于星期六第三节纸色谱法第三节纸色谱法一、纸色谱法的分离原理一、纸色谱法的分离原理纸纤维为载体，吸着在其上的纸纤维为载体，吸着在其上的水为固定相水为固定相属于属于正相分配色谱正相分配色谱依据分配系数的不同而达到分离依据分配系数的不同而达到分离 极性或亲水性强的组分，极性或亲水性强的组分，K大，大，Rf值小，值小，极性弱或亲脂性强的组分，极性弱或亲脂性强的组分，K小，小，Rf值大。值大。极性强弱？例：三个六碳糖极性强弱？例
40、：三个六碳糖 第52页，讲稿共57张，创作于星期六CHOHO-CHHC-OHHC-OHHC-OHCH2OHCHOHO-CHHO-CHH C-OHH C-OH CH3CHOH C-OH CH2H C-OHH C-OH CH3葡萄糖葡萄糖鼠李糖鼠李糖洋地黄毒糖洋地黄毒糖六碳糖 羟基数溶剂系统正丁醇-水Rf正丁醇-酸-水(4:1:5)Rf乙酸乙酯-吡啶-水(25:10:35)Rf葡萄糖50.030.170.10鼠李糖40.270.420.44洋地黄毒糖30.580.660.88三种六碳糖的三种六碳糖的Rf值值第53页，讲稿共57张，创作于星期六二、纸色谱法的实验条件二、纸色谱法的实验条件1 1 色谱
41、纸的选择色谱纸的选择滤纸质地均匀，强度适中滤纸质地均匀，强度适中纸纤维松紧适宜纸纤维松紧适宜纸质要纯，无明显荧光斑点纸质要纯，无明显荧光斑点对对R Rf f值相差很小的化合物，宜用慢速滤纸值相差很小的化合物，宜用慢速滤纸对对R Rf f值相差较大的化合物，则用快速滤纸值相差较大的化合物，则用快速滤纸2 2 固定相固定相水水或甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇或缓冲溶液。（酸、或甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇或缓冲溶液。（酸、碱）碱）第54页，讲稿共57张，创作于星期六纸色谱法的实验条件纸色谱法的实验条件3 3 展开剂的选择展开剂的选择增加展开剂中极性溶剂的比例量，可以增大增加展开剂中极性溶剂的比例量，
42、可以增大Rf值；增加展开剂中非极性溶剂的比例量，可以减少值；增加展开剂中非极性溶剂的比例量，可以减少Rf值。值。常用的展开剂常用的展开剂水饱和的有机溶剂，如水饱和的正丁醇、水饱和的有机溶剂，如水饱和的正丁醇、正戊醇、酚等正戊醇、酚等操作步骤操作步骤 点样、展开、显色、定性定量分析点样、展开、显色、定性定量分析 第55页，讲稿共57张，创作于星期六主要内容：主要内容：比移值及其与比移值及其与K和和k的关系、相对比移值的关系、相对比移值吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂及吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂及其选择其选择薄层色谱定性方法薄层色谱定性方法纸色谱法：原理和实验条件纸色谱法：原理和实验条件第56页，讲稿共57张，创作于星期六感谢大家观看第57页，讲稿共57张，创作于星期六