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1、关于微生物检验方法第1页，讲稿共24张，创作于星期日一、总则一、总则二、菌落总数二、菌落总数三、粪大肠菌群三、粪大肠菌群四、霉菌和酵母菌四、霉菌和酵母菌第2页，讲稿共24张，创作于星期日一、总则一、总则1.1.范围范围本规范规定了化妆品微生物学检验的本规范规定了化妆品微生物学检验的基本要求。基本要求。本规范适用于化妆品样品的采集、保存及本规范适用于化妆品样品的采集、保存及供检样品制备。供检样品制备。2.2.仪器和设备仪器和设备天平天平 高压灭菌器高压灭菌器振荡器振荡器 三角瓶三角瓶(250mL)(250mL)玻璃珠玻璃珠 玻璃棒玻璃棒刻度吸管刻度吸管(1 mL(1 mL、10mL)10mL)研
2、钵或均质器恒研钵或均质器恒 温水浴箱温水浴箱第3页，讲稿共24张，创作于星期日v生理盐水生理盐水(成分：氯化钠成分：氯化钠 8.5g)蒸馏水加至蒸馏水加至1000mL,溶解后，分装到加玻璃珠溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶的三角瓶内，每瓶90mL，103.43kPa（121 15 lb）20min高压灭菌。高压灭菌。vSCDLP 液体培养基液体培养基v成分：酪蛋白胨成分：酪蛋白胨 17g 大豆蛋白胨大豆蛋白胨 3g 氯化钠氯化钠 5g 磷酸氢二钾磷酸氢二钾 2.5g 葡萄糖葡萄糖 2.5g 卵磷卵磷脂脂 1g 吐温吐温80 7g 蒸馏水蒸馏水 1000mLv制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中
3、加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调pH为为7.27.3 分装，分装，103.43kPa（121 15 lb）20min 高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温的吐温80 充分混合，冷却至充分混合，冷却至25左右使用。左右使用。v注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。v灭菌液体石蜡。灭菌液体石蜡。v 灭菌吐温灭菌吐温80。3 3.培养基和试剂培养基和试剂第4页，讲稿共24张，创作于星期日 所采集的样品，应具有代表性。所采集的样品，应
4、具有代表性。供检验样品，应严格保持原有的包装状态。供检验样品，应严格保持原有的包装状态。接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。若只有一个样品而接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析。余样品做其它分析。在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭
5、菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。按无菌操作规定进行。如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月。4 4 样品的采集及注意事项样品的采集及注意事项第5页，讲稿共24张，创作于星期日 液体样品液体样品水溶性的液体样品水溶性的液体样品，可量取，可量取10mL 加到加到90mL 灭菌生理盐水中，如样品少于灭菌生理盐水中，如样品少于10mL，仍按，仍按10 倍稀释法进行。如为倍稀释法进行。如为5
6、mL 则加到则加到45mL 灭菌生理盐水，混匀后，制成灭菌生理盐水，混匀后，制成1：10 检液。检液。油性液体样品，油性液体样品，取样品取样品10mL，先加，先加5mL 灭菌液体石蜡混匀，再加灭菌液体石蜡混匀，再加10mL 灭菌的吐温灭菌的吐温80，在，在4044水浴中振荡混合水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水，加入灭菌的生理盐水75mL（在（在4044水浴中预温），水浴中预温），在在4044水浴中乳化，制成水浴中乳化，制成1：10 的悬液。的悬液。5 5 供检样品的制备供检样品的制备 膏、霜、乳剂半固体状样品膏、霜、乳剂半固体状样品 亲水性的样品：亲水性的样品：称取称取10g，加到
7、装有玻璃珠及，加到装有玻璃珠及90mL 灭菌生理盐水的三角瓶中，灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀，静置充分振荡混匀，静置15min。用其上清液作为。用其上清液作为1:10 的检液。的检液。疏水性样品疏水性样品：称取称取10g，放到灭菌的研钵中，加，放到灭菌的研钵中，加10mL 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入10mL 灭菌吐温灭菌吐温80，研，研磨待溶解后，加磨待溶解后，加70mL 灭菌生理盐水，在灭菌生理盐水，在4044水浴中水浴中充分混合，制成充分混合，制成1：10 检液。检液。第6页，讲稿共24张，创作于星期日 固体样品固体样品称取称取10g10g
8、，加到，加到90mL 90mL 灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其灭菌生理盐水中，充分振荡混匀，使其分散混悬，静置后，取上清液作为分散混悬，静置后，取上清液作为1 1：10 10 的检液。如有均质的检液。如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g 10g 样品加入样品加入90mL90mL灭菌生理盐水，均质灭菌生理盐水，均质1min1min2min2min；疏水性膏、霜及眉笔、口；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称红等，称10g 10g 样品，加样品，加10mL10mL灭菌液体石蜡，灭菌液体石蜡，10mL 10mL 吐温吐温8080，70mL 70mL 灭菌生
9、理盐水，均质灭菌生理盐水，均质3min3min5min5min。第7页，讲稿共24张，创作于星期日二、菌落总数二、菌落总数1 1 范围范围本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。本规范适用于化妆品菌落总数的测定。本规范适用于化妆品菌落总数的测定。2 2 定义定义菌落总数（菌落总数（Aerobic bacterial count）是指化妆品）是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性质值、需氧性质等），等），1g（1mL）检样中所含菌落的
10、总数。所得）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样温的需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。价的综合依据。第8页，讲稿共24张，创作于星期日3 3 仪器和设备仪器和设备 三角瓶，三角瓶，250mL。量筒，量筒，200mL。pH 计或精密计或精密pH 试纸。试纸。高压灭菌器。高压灭菌器。试管：试管：15150mm。灭菌平皿：直径灭菌平皿：直径9cm。灭菌刻度吸管，灭菌刻度吸管，10mL、
11、1mL。酒精灯。酒精灯。恒温培养箱：恒温培养箱：361。放大镜。放大镜。第9页，讲稿共24张，创作于星期日生理盐水生理盐水 卵磷脂、吐温卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基营养琼脂培养基 成分：蛋白胨成分：蛋白胨 20g、牛肉膏、牛肉膏 3g、氯化钠、氯化钠 5g、琼脂、琼脂 15g、卵、卵磷脂磷脂1g、吐温吐温80 7g、蒸馏水蒸馏水 1000mL 制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、的卵磷脂、吐温
12、吐温80，混匀，调，混匀，调pH 值为值为7.17.4，加入琼脂，加入琼脂，103.43kPa（121 15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。高压灭菌，储存于冷暗处备用。0.5氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑成分：成分：TTC 0.5g 蒸馏水蒸馏水 100mL溶解后过滤，溶解后过滤，103.43kPa（121 15 lb）20min 高压灭菌，装于棕色试剂瓶，置高压灭菌，装于棕色试剂瓶，置4冰箱备用。冰箱备用。4 4 培养基和试剂培养基和试剂第10页，讲稿共24张，创作于星期日(1)用灭菌吸管吸取用灭菌吸管吸取1：10 稀释的检液稀释的检液2mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿，分
13、别注入到两个灭菌平皿内，每皿1mL。另取。另取1mL 注入到注入到9mL 灭菌生理灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，面），更换一支吸管，并充分混匀，制成制成1：100 检液。吸取检液。吸取2mL，分别注入，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿到两个灭菌平皿内，每皿1mL。如样品。如样品含菌量高，还可再稀释成含菌量高，还可再稀释成1：1000 1:10000，等，每种稀释度应换等，每种稀释度应换1 支支吸吸管。(2)将融化并冷至将融化并冷至4550的卵磷脂吐温的卵磷脂吐温80 营养营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约琼脂培养基倾注到平皿内
14、，每皿约15mL，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置待琼脂凝固后，翻转平皿，置361培养箱内培养培养箱内培养48h2h。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约。另取一个不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL 卵磷脂吐温卵磷脂吐温80 营养琼脂培养基，待琼脂营养琼脂培养基，待琼脂凝固后，翻转平皿，置凝固后，翻转平皿，置361培养箱内培养培养箱内培养48h2h，为空白对照。，为空白对照。5 5 操作步骤操作步骤(3)为便于区别化妆品中的颗粒为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每与菌落，可在每100mL 卵磷脂吐卵磷脂吐温温80
15、 营养琼脂中加入营养琼脂中加入1mL0.5的的TTC 溶液，如有细菌存溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。妆品的颗粒颜色无变化。第11页，讲稿共24张，创作于星期日6 6 菌落计数方法菌落计数方法 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大放大 5 倍倍10 倍的放大镜检查，以防倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，
16、该平皿不宜计数。若片状蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以皿菌落计数后乘以2，以代表全皿菌落，以代表全皿菌落数。数。第12页，讲稿共24张，创作于星期日 (1)首先选取平均菌落数在首先选取平均菌落数在30 个个300 个之间的平皿，作为菌落总个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表（见表1
17、中例中例1）。）。(4)若所有稀释度的平均菌落数均小于若所有稀释度的平均菌落数均小于30 个，个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表倍数报告之（见表1 例例5）。）。7 菌落计数及报告方法菌落计数及报告方法(5)若所有稀释度的平均菌落数均不在若所有稀释度的平均菌落数均不在30 个个300 个之间，其中一个稀释度大于个之间，其中一个稀释度大于300 个，而相邻的另一稀释度小于个，而相邻的另一稀释度小于30 个个时，则以接近时，则以接近30 或或300 的平均菌落数的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表乘以稀释倍数报告之（见表1 中例中例6）。）
18、。(3)若所有稀释度的平均菌若所有稀释度的平均菌落数均大于落数均大于300 个，则应按个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘稀释度最高的平均菌落数乘以稀释以稀释 (2)若有两个稀释度，其平均若有两个稀释度，其平均菌落数均在菌落数均在30 个个300 个之间个之间，则应求出两菌落总数之比值来则应求出两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于应报告其平均数，若大于2 则报则报告其中稀释度较低的平皿的菌落告其中稀释度较低的平皿的菌落数（见表数（见表1 中例中例2 及例及例3）。）。第13页，讲稿共24张，创作于星期日(6)(6)若所有的稀释度均无菌生长，
19、报告数为每若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g g 或每或每mL mL 小于小于10CFU10CFU。菌落计数的报告，菌落数在菌落计数的报告，菌落数在10 10 以内时，按实有数值报告之，大于以内时，按实有数值报告之，大于100 100 时，时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用为了缩短数字后面零的个数，可用10 10 的指数来表示（见表的指数来表示（见表1 1 报告方式栏）。报告方式栏）。在报告菌落数为在报告菌落数为“不可计不可计”时，应注明样品的稀释度。时，应注明样
20、品的稀释度。第14页，讲稿共24张，创作于星期日三、粪大肠菌群三、粪大肠菌群1 1 范围范围本规范规定了化妆品中粪大肠菌群的检验方法。本规范规定了化妆品中粪大肠菌群的检验方法。本规范适用于化妆品中粪大肠菌群的检验。本规范适用于化妆品中粪大肠菌群的检验。2 2 定义定义粪大肠菌群粪大肠菌群 系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.50.5培养培养24h48h 能发酵乳糖产酸并产气。能发酵乳糖产酸并产气。该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。灭菌平皿：直径灭菌平皿：直径90mm。第15页，讲稿共24张，创作
21、于星期日3 3 仪器仪器恒温水浴箱或隔水式恒温箱：恒温水浴箱或隔水式恒温箱：440.5。温度计温度计 显微镜显微镜 载玻片载玻片 接种环接种环 电磁炉电磁炉三角瓶，三角瓶，250mL试管：试管：15150mm小倒管小倒管 pH 计或计或pH 试纸试纸 高压灭菌器。高压灭菌器。灭菌吸管，灭菌吸管，10mL、1mL 灭菌平皿：直径灭菌平皿：直径90mm4 4 培养基和试剂培养基和试剂 双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基成分：蛋白胨成分：蛋白胨 40g 猪胆盐猪胆盐 10g 乳糖乳糖 10g 0.4溴甲酚紫溴甲酚紫水溶液水溶液 5mL 卵磷脂卵磷脂 2g 吐温吐温80 14
22、g 蒸馏水蒸馏水 1000mL制法：将卵磷脂、吐温制法：将卵磷脂、吐温80 溶解到少量蒸馏水中。将蛋白溶解到少量蒸馏水中。将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解到其余的蒸馏水中，加到一起混匀，胨、胆盐及乳糖溶解到其余的蒸馏水中，加到一起混匀，调调pH 到到7.4，加入，加入0.4溴甲酚紫水溶液，混匀，分装试管溴甲酚紫水溶液，混匀，分装试管（每支试管中加一个小倒管）。（每支试管中加一个小倒管）。68.95kPa（115 10 lb）20min 灭菌。灭菌。第16页，讲稿共24张，创作于星期日伊红美兰（伊红美兰（EMB）琼脂）琼脂成分：蛋白胨成分：蛋白胨 10g、乳糖、乳糖 10g、磷酸氢二钾、磷酸氢二钾 2g
23、、琼脂、琼脂 20g、2伊红水溶液伊红水溶液 20mL、0.5美蓝水溶液美蓝水溶液 13mL、蒸馏水、蒸馏水 1000mL蛋白胨水（作靛基质试验用）蛋白胨水（作靛基质试验用）成分：蛋白胨（或胰蛋白胨）成分：蛋白胨（或胰蛋白胨）20g、氯化钠、氯化钠 5g、蒸馏水、蒸馏水 1000mL 双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基成分：蛋白胨成分：蛋白胨 40g 猪胆盐猪胆盐 10g 乳糖乳糖 10g 0.4溴甲酚紫水溶液溴甲酚紫水溶液 5mL 卵磷脂卵磷脂 2g 吐温吐温80 14g 蒸馏水蒸馏水 1000mL4 培养基和试剂培养基和试剂 革兰氏碘液革兰氏碘液成分：碘成分：碘
24、1g 碘化钾碘化钾 2g 蒸馏水加至蒸馏水加至 300mL 革兰氏染色液革兰氏染色液 靛基质试剂靛基质试剂成分：结晶紫染色液：结晶紫成分：结晶紫染色液：结晶紫 1g 95乙醇乙醇 20mL 1草酸铵水溶液草酸铵水溶液 80mL第17页，讲稿共24张，创作于星期日 脱色液脱色液：95乙醇。乙醇。复染液：复染液：（1）沙黄复染液）沙黄复染液：沙黄：沙黄 0.25g、95乙醇乙醇 10mL、蒸馏、蒸馏水水 90mL（2）稀石碳酸复红液）稀石碳酸复红液：称取碱性复红称取碱性复红10g，研细，加，研细，加95乙醇乙醇100mL，放置过夜，滤纸过滤。取该液，放置过夜，滤纸过滤。取该液10mL，加加5石碳酸
25、水溶液石碳酸水溶液90mL 混合，即为石碳酸复红液。再混合，即为石碳酸复红液。再取此液取此液10mL加水加水90mL，即为稀石碳酸复红液。，即为稀石碳酸复红液。染色法染色法（1）将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染）将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。，水洗。（2）滴加革兰氏碘液，作用）滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。，水洗。(3)滴加滴加95乙醇脱色，约乙醇脱色，约30s，或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇，或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色滴满整个涂片，脱色10s，水洗。，水洗。(4)滴加复染液，复染滴加复染液，复染1min，水洗，
26、待干，镜检。，水洗，待干，镜检。(5)染色结果染色结果革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。注：如用注：如用1:10 稀释石碳酸复红染色液作复染，复染时间仅需稀释石碳酸复红染色液作复染，复染时间仅需10s。第18页，讲稿共24张，创作于星期日(1)取取10mL 1：10 稀释的检液，加到稀释的检液，加到10mL 双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基中，双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基中，置置440.5培养箱中培养培养箱中培养24h48h，如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群，如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性。阴性。(2)如产酸产气，划线接种到伊红美蓝琼
27、脂平板上，置如产酸产气，划线接种到伊红美蓝琼脂平板上，置361培养培养18h24h。同时取该培养液。同时取该培养液12 滴接种到蛋白胨水中，滴接种到蛋白胨水中，440.5培养培养24h2h。经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长。粪大肠菌群。经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长。粪大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，圆形，边缘整齐，表在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，面光滑湿润，常具有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落，亦常为粪大肠菌群，应注
28、意挑选。或粉紫色，中心较深的菌落，亦常为粪大肠菌群，应注意挑选。(3)挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。(4)在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5mL，观察靛基质反应。阳性者液面，观察靛基质反应。阳性者液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。6 6 检验结果报告检验结果报告根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为根据发酵乳糖产酸产气，平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中
29、检出粪大肠菌群。中检出粪大肠菌群。5 操作步骤操作步骤第19页，讲稿共24张，创作于星期日四、霉菌和酵母菌四、霉菌和酵母菌1 范围范围本规范规定了化妆品中霉菌和酵母菌数的检测方法。本规范规定了化妆品中霉菌和酵母菌数的检测方法。本规范适用于各种化妆品中霉菌和酵母菌的计数。本规范适用于各种化妆品中霉菌和酵母菌的计数。2 定义定义霉菌和酵母菌数测定是指化妆品检样在一定条件下培霉菌和酵母菌数测定是指化妆品检样在一定条件下培养后，养后，1g 或或1mL 化妆品中所污染的活的霉菌和酵化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一
30、般卫生状况。度及其一般卫生状况。本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在虎红培养基上，置培养基上，置282培养培养72h，计算所生长的霉菌和，计算所生长的霉菌和酵母菌数。酵母菌数。第20页，讲稿共24张，创作于星期日培养箱：培养箱：282。振荡器。振荡器。天平。三角瓶，天平。三角瓶，250mL。试管：试管：15150mm。平皿：直径平皿：直径9cm。吸管，吸管，1mL、10mL。量筒，量筒，200mL。酒精灯。酒精灯。高压灭菌器。高压灭菌器。3 仪器和设备仪器和设备第21页，讲稿共24张，创作于星期日生理盐水生理盐水虎红（孟加拉红）培养基
31、虎红（孟加拉红）培养基制法：将上述各成分（除虎制法：将上述各成分（除虎红外）加入蒸馏水中溶解后，红外）加入蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液。分装后，再加入虎红溶液。分装后，103.43kPa（121 15 lb）20min 高压灭菌，另用高压灭菌，另用少量乙醇溶解氯霉素，过滤少量乙醇溶解氯霉素，过滤溶解后加入培养基中，若无溶解后加入培养基中，若无氯霉素，使用时每氯霉素，使用时每1000mL 加链霉素加链霉素30mg。4 培养基和试剂培养基和试剂第22页，讲稿共24张，创作于星期日(1)样品稀释样品稀释(2)取取1：10、1：100、1：1000 的检液各的检液各1mL 分别注入灭菌平皿内，每个稀
32、释度各用分别注入灭菌平皿内，每个稀释度各用2个平皿，注入融化并冷至个平皿，注入融化并冷至451左右的左右的虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平虎红培养基，充分摇匀。凝固后，翻转平板，置板，置281培养培养72h2h，计数平板内，计数平板内生长的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生生长的霉菌和酵母菌数。若有霉菌蔓延生长，为避免影响其它霉菌和酵母菌的计数长，为避免影响其它霉菌和酵母菌的计数时，于时，于48h2h 应及时将此平板取出计数应及时将此平板取出计数(4)每每g（或每（或每mL）化妆品含霉菌和）化妆品含霉菌和酵母菌数以酵母菌数以CFU/g（mL）表示。）表示。(3)计算方法：先点数每个平板上生长的霉菌和计算方法：先点数每个平板上生长的霉菌和酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。酵母菌菌落数，求出每个稀释度的平均菌落数。判定结果时，应选取菌落数在判定结果时，应选取菌落数在5 个个50 个范围之个范围之内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每内的平皿计数，乘以稀释倍数后，即为每g（或每（或每mL）检样中所含的霉菌和酵母菌数。其它）检样中所含的霉菌和酵母菌数。其它范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报范围内的菌落数报告应参照菌落总数的报告方法报告之。告方法报告之。5 5 操作步骤操作步骤第23页，讲稿共24张，创作于星期日感谢大家观看第24页，讲稿共24张，创作于星期日