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1、关于损伤修复与诱变育种第1页，讲稿共80张，创作于星期二2 2直接修复：直接修复：光复活修复，转甲基酶，插入酶光复活修复，转甲基酶，插入酶碱基错配修复：碱基错配修复：甲基化引导的错配修复系统甲基化引导的错配修复系统切除修复：切除修复：UvrABC,Ap 切除修复，糖基化酶切除修复切除修复，糖基化酶切除修复 GO系统系统重组修复重组修复:同源重组同源重组SOS修复修复链交联的修复链交联的修复链断裂的修复链断裂的修复第四节第四节DNA损伤的修复机制损伤的修复机制第2页，讲稿共80张，创作于星期二3 3第五节突变过程与诱变育种技术第五节突变过程与诱变育种技术一一回复突变与抑制突变回复突变与抑制突变二
2、二诱发突变的过程诱发突变的过程三三诱变育种的主要流程诱变育种的主要流程四四诱变育种中需要注意的几个问题诱变育种中需要注意的几个问题第3页，讲稿共80张，创作于星期二4 4一回复突变与抑制突变表型回复为野生型，可能是真正的表型回复为野生型，可能是真正的回复突变（回复突变（back mutation)产生的，也可能是发生了抑制突变造成的。产生的，也可能是发生了抑制突变造成的。抑制突变抑制突变（suppressor mutation）抵消或抑制了前一次突变的抵消或抑制了前一次突变的表型效应表型效应第4页，讲稿共80张，创作于星期二5 5区分回复突变与抑制突变的方法区分回复突变与抑制突变的方法第5页，
3、讲稿共80张，创作于星期二6 6抑制突变的特点如下：(1)(1)抑制突变是在第一次突变抑制突变是在第一次突变不同位点不同位点将它抵消的。因此原来将它抵消的。因此原来的突变可以通过野生型和回复突变型之间的杂交又恢复为突变的突变可以通过野生型和回复突变型之间的杂交又恢复为突变型；型；(2)(2)抑制突变可能发生相同的基因中，抑制原来的突变，称抑制突变可能发生相同的基因中，抑制原来的突变，称基因内基因内抑制抑制，或发生在不同的基因中称，或发生在不同的基因中称基因间抑制基因间抑制。(3)(3)不同的抑制突变其作用方式不同。如有的抑制是在转录和翻不同的抑制突变其作用方式不同。如有的抑制是在转录和翻译水平
4、，有的可能是通过细胞生理功能来实现。译水平，有的可能是通过细胞生理功能来实现。第6页，讲稿共80张，创作于星期二7 71 基因内抑制基因内抑制第7页，讲稿共80张，创作于星期二8 8LeuB S286MLeuB 3()-异丙基苹果酸脱氢酶,作用于亮氨酸生物合成的第二步 LeuB S286L第8页，讲稿共80张，创作于星期二9 9LeuB S286VLeuB S286L L308P第9页，讲稿共80张，创作于星期二1010第10页，讲稿共80张，创作于星期二1111野生型蛋白X轴切面电势分布S286V沿X轴切面电势分布 S286L沿X轴切面电势分布 S286L L308PS286LS286S第1
5、1页，讲稿共80张，创作于星期二1212 假定某一基因突变使一种蛋白质变为容易为另一物质所抑制，因而假定某一基因突变使一种蛋白质变为容易为另一物质所抑制，因而使野生型表型不能出现，再假定另一基因发生突变后这抑制物不再产使野生型表型不能出现，再假定另一基因发生突变后这抑制物不再产生，那么后一突变基因便是前一突变基因的抑制基因。生，那么后一突变基因便是前一突变基因的抑制基因。假定某一突变基因使某一代谢产物不能形成，再假定另一突变基因假定某一突变基因使某一代谢产物不能形成，再假定另一突变基因使同一代谢产物由另一途径合成，那么它也是前一突变基因的抑制基使同一代谢产物由另一途径合成，那么它也是前一突变基
6、因的抑制基因。因。如果某一代谢中间产物具有某种表型效应，假定第一个突变基因中如果某一代谢中间产物具有某种表型效应，假定第一个突变基因中断了这一中间产物以后的代谢途径而使中间产物积累，再假定另一突断了这一中间产物以后的代谢途径而使中间产物积累，再假定另一突变基因使中间产物出现以前的代谢途径中断，那么它也成为前一突变变基因使中间产物出现以前的代谢途径中断，那么它也成为前一突变基因的抑制基因。基因的抑制基因。2 基因间抑制基因间抑制代谢补偿代谢补偿第12页，讲稿共80张，创作于星期二1313例例1 粗糙脉孢菌的腺嘌呤缺陷型粗糙脉孢菌的腺嘌呤缺陷型(ade)突变突变35203产生产生一种由腺核苷酸合成
7、的代谢中间产物转变来的一种由腺核苷酸合成的代谢中间产物转变来的紫色色素紫色色素。在这一基因不发生回复突变的情况下，另外三个。在这一基因不发生回复突变的情况下，另外三个腺嘌呤腺嘌呤缺陷型缺陷型27663、28610、44411中的任何一个都抑制紫色色素的产生中的任何一个都抑制紫色色素的产生而恢复了野生型的而恢复了野生型的不产色素不产色素这一性状。对于突变型这一性状。对于突变型35203的产生紫的产生紫色色素这一性状来讲色色素这一性状来讲,突变基因突变基因27663、28610、44411都是它的抑制基都是它的抑制基因。因。第13页，讲稿共80张，创作于星期二1414例例2 精氨酸的渗漏突变是嘧啶
8、缺陷的抑制突变精氨酸的渗漏突变是嘧啶缺陷的抑制突变第14页，讲稿共80张，创作于星期二15152 基因间抑制基因间抑制校正校正tRNA突变突变抑制基因抑制基因（suppressor）或称校正基因校正基因 无义抑制（nonsense suppressor）错义抑制(missense suppressor)tRNA反密码子的突变tRNA其它结构的改变第15页，讲稿共80张，创作于星期二1616第16页，讲稿共80张，创作于星期二1717第17页，讲稿共80张，创作于星期二1818氨基酰氨基酰tRNA合成酶合成酶 对对tRNA和氨基酸两者具有专一性，它对氨和氨基酸两者具有专一性，它对氨基酸的识别特异
9、性很高，而对基酸的识别特异性很高，而对tRNA识别的特异性较低。识别的特异性较低。按照一般原理，酶和底物的正确结合是由二者相嵌的几何形状按照一般原理，酶和底物的正确结合是由二者相嵌的几何形状所决定的，只有适合的氨基酸和适合的所决定的，只有适合的氨基酸和适合的tRNA进入合成酶的相应位点，进入合成酶的相应位点，才能合成正确的氨酰基才能合成正确的氨酰基tRNA。现已经知道合成酶与。现已经知道合成酶与L形形tRNA的内的内侧面结合，结合点包括接近臂，侧面结合，结合点包括接近臂，DHU臂和反密码子臂。臂和反密码子臂。第18页，讲稿共80张，创作于星期二1919无义抑制无义抑制第19页，讲稿共80张，创
10、作于星期二2020第20页，讲稿共80张，创作于星期二2121错义抑制错义抑制第21页，讲稿共80张，创作于星期二2222tRNA基因造成的抑制突变的特点:1.不不是是所所有有抑抑制制基基因因都都能能产产生生有有功功能能的的蛋蛋白白质质，关关键键是是要要看看氨氨基基酸酸取取代代的的情情况。况。2.校正的作用不可能是完全的。校正的作用不可能是完全的。校正的校正的tRNA分子是有限的而且还要和释放分子是有限的而且还要和释放 因子竞争；因子竞争；若是错义抑制的话，由于氨基酸发生取代若是错义抑制的话，由于氨基酸发生取代,使得蛋白质的活性有所降低。使得蛋白质的活性有所降低。3.每每种种抑抑制制tRNA一
11、一般般都都只只识识别别UAG终终止止密密码码子子，而而不不再再识识别别原原来来相相应应的的密密码码子。子。第22页，讲稿共80张，创作于星期二23234.赭石突变抑制基因赭石突变抑制基因不仅可以识别赭石密码子（不仅可以识别赭石密码子（UUA），也可以抑制），也可以抑制琥琥珀珀（Am）密码子）密码子UAG。但反过来。但反过来Am抑制基因（抑制基因（CUA）就不能抑制）就不能抑制赭赭石突变石突变（UAA），这是由于摆动缘故所造成。），这是由于摆动缘故所造成。5.当细胞中含有多个当细胞中含有多个tRNA拷贝时，抑制才能发挥作用。拷贝时，抑制才能发挥作用。6.有有的的抑抑制制基基因因，不不仅仅可可以以
12、识识别别终终止止密密码码子子，而而且且还还可可以以识识别别原原来来的的密密码码子子。如如野野生生型型tRNATrp的的反反密密码码子子是是CCA，它它可可以以识识别别原原来来的的密密码子码子UGG，而且还可以识别终止密码子，而且还可以识别终止密码子UGA。第23页，讲稿共80张，创作于星期二24247.校正基因一般不会影响正常的终止校正基因一般不会影响正常的终止(1)校正基因识别的终止密码子不一定和正常终止的密码子相同。有时正校正基因识别的终止密码子不一定和正常终止的密码子相同。有时正常终止位点有两个连续的终止密码子，而且结构不同，如常终止位点有两个连续的终止密码子，而且结构不同，如UAG-U
13、AA；(2)释放因子将和抑制基因竞争和终止密码子的结合；释放因子将和抑制基因竞争和终止密码子的结合；(3)抑制基因的效率很低，通常为抑制基因的效率很低，通常为15%，所以常不会抑制正常终止。，所以常不会抑制正常终止。第24页，讲稿共80张，创作于星期二2525二诱发突变的生物学过程二诱发突变的生物学过程第一阶段第一阶段 诱变剂接触诱变剂接触DNA分子之前分子之前进入细胞细胞表面屏障作用进入细胞细胞表面屏障作用穿过细胞质，失活或增加活性穿过细胞质，失活或增加活性细胞的生理状态（复制转录态）细胞的生理状态（复制转录态）第二阶段从前突变到突变第二阶段从前突变到突变DNA分子上的损伤，突变产生分子上的
14、损伤，突变产生（经历细胞内对损伤（经历细胞内对损伤DNA的修复，抑制基因作用）的修复，抑制基因作用）第三阶段基因突变到突变表型第三阶段基因突变到突变表型表型迟延（表型迟延（phenotypic lag)生理性迟延和遗传性迟延生理性迟延和遗传性迟延第25页，讲稿共80张，创作于星期二2626Phenotypic lag 表型迟延表型迟延分离性迟延分离性迟延 （Segregational lag）对数生长期中，单核细胞常出现双核现象，多核细胞的核也成倍增加，而突变通常发生在一个核上，包含突变的变异细胞必须经过多代细胞分离后，由杂和状态变为纯和状态，才有可能表现突变表型。生理性迟延生理性迟延 Phy
15、siological lag 变异细胞变为纯和状态后，在杂和期由正常基因所形成变异细胞变为纯和状态后，在杂和期由正常基因所形成的蛋白（酶）仍然发挥作用，必须经过多代细胞分离后，才的蛋白（酶）仍然发挥作用，必须经过多代细胞分离后，才能将这些非变异的蛋白（酶）稀释掉，最终表现出突变的表能将这些非变异的蛋白（酶）稀释掉，最终表现出突变的表型。型。第26页，讲稿共80张，创作于星期二2727诱变育种：诱变育种：是是用用物物理理或或化化学学的的诱诱变变剂剂使使诱诱变变对对象象内内的的遗遗传传物物质质（DNA）的的分分子子结结构构发发生生改改变变，引引起起性性状状变变异异并并通通过过筛筛选选获获得得符符合
16、合要要求求的的变变异异菌菌株株的的一一种种育育种种方法。方法。诱诱变变育育种种具具有有极极其其重重要要的的实实践践意意义义。当当前前发发酵酵工工业业和和其其他他微微生生物物生生产产部部门门所所使使用用的的高高产产菌菌株株，几几乎乎毫毫无无例例外外地地都都是是通通过过诱诱变变育育种种而而明明显显提提高高其生产性能的。其生产性能的。三诱变育种三诱变育种第27页，讲稿共80张，创作于星期二2828诱变育种诱变育种 诱变诱变 +筛选筛选 诱变是随机的；筛选是定向的诱变是随机的；筛选是定向的 目前发酵工业生产菌株都是经过突变改造过的。目前发酵工业生产菌株都是经过突变改造过的。第28页，讲稿共80张，创作
17、于星期二2929诱变育种的基本过程诱变育种的基本过程小概率事件小概率事件第29页，讲稿共80张，创作于星期二3030诱变育种的基本过程诱变育种的基本过程选择合适的出发菌株选择合适的出发菌株 制备待处理的菌悬液制备待处理的菌悬液 诱变处理诱变处理 筛选筛选筛选筛选 保藏和扩大试验保藏和扩大试验第30页，讲稿共80张，创作于星期二3131诱变剂选择诱变剂选择诱变剂量选择诱变剂量选择平板筛选技术平板筛选技术第31页，讲稿共80张，创作于星期二32321出发菌株的选择出发菌株的选择 出发菌株出发菌株：用来进行育种处理的起始菌株：用来进行育种处理的起始菌株出发菌株应具备出发菌株应具备 对诱变剂的敏感性高
18、；对诱变剂的敏感性高；具有特定生具有特定生产产性状的能力或潜力；性状的能力或潜力；出发菌株的来源出发菌株的来源 自然界直接分离到的野生型菌株：自然界直接分离到的野生型菌株：历经生产考验的菌株：历经生产考验的菌株：已历经多次育种处理的菌株：已历经多次育种处理的菌株：第32页，讲稿共80张，创作于星期二3333制制备单细备单细胞或胞或单孢单孢子子悬悬液液要求要求 菌体处于对数生长期，孢子初萌发菌体处于对数生长期，孢子初萌发 细细胞分散且胞分散且为单细为单细胞，胞，方法方法 玻璃珠打散玻璃珠打散10-15min;10-15min;加吐温加吐温80 80 或或 T Triton x-100 用无菌脱脂
19、棉用无菌脱脂棉过滤过滤。制备：制备：物理诱变剂物理诱变剂生理盐水，磷酸缓冲液生理盐水，磷酸缓冲液 化学诱变剂化学诱变剂特定的特定的缓冲液缓冲液 浓度：浓度：细细菌、放菌、放线线菌菌 10108 8个个/ml/ml 霉菌、酵母菌霉菌、酵母菌 10106 6个个/ml/ml第33页，讲稿共80张，创作于星期二34342诱变剂诱变剂诱变剂的选择诱变剂的选择诱变剂作用的普遍性诱变剂作用的普遍性：选择那些在其它菌种选育中诱变效果好的诱变剂。选择那些在其它菌种选育中诱变效果好的诱变剂。如：如：UV ，亚硝基胍（，亚硝基胍（NTG），快中子等。），快中子等。诱变剂的特异性诱变剂的特异性：经验性：如，四环素族
20、抗生素用亚硝酸、羟胺，青霉素用氮芥、乙烯亚胺、亚硝基胍第34页，讲稿共80张，创作于星期二3535菌株的差异：菌株的差异：（即使是同一菌）（即使是同一菌）A：遗传性不稳定的菌株：遗传性不稳定的菌株-用缓和诱变剂用缓和诱变剂 B：遗传性稳定的菌株：遗传性稳定的菌株-首用强，后用缓。首用强，后用缓。考虑诱变机制：考虑诱变机制：UV 嘧啶，嘧啶，亚硝酸亚硝酸 嘌呤，嘌呤，因此复合作用为好因此复合作用为好 第35页，讲稿共80张，创作于星期二3636诱变剂剂量的选择诱变剂剂量的选择用用90-99%杀菌剂量杀菌剂量 用用5085%的的杀杀菌菌剂剂量量，此此时时正正突突变变率率高高，特特别别是是出出发菌株
21、已是高产菌株。发菌株已是高产菌株。第36页，讲稿共80张，创作于星期二3737第37页，讲稿共80张，创作于星期二3838诱变剂的处理方法诱变剂的处理方法 诱变剂使用方式诱变剂使用方式：单一处理，单一处理，复合处理：复合处理：诱变处理条件：诱变处理条件：温度（生长温度）温度（生长温度）PH（缓冲剂），处理时间（缓冲剂），处理时间 诱变作用的终止：诱变作用的终止：用解毒剂（终止缓冲液）、用解毒剂（终止缓冲液）、用水稀释用水稀释 第38页，讲稿共80张，创作于星期二3939第39页，讲稿共80张，创作于星期二4040诱变剂使用方法举例诱变剂使用方法举例-紫外线紫外线第40页，讲稿共80张，创作于星
22、期二4141亚硝酸亚硝酸-缓冲液缓冲液 终止液终止液第41页，讲稿共80张，创作于星期二4242甲基磺酸乙酯（EMS）-母液，工作液，终止液（解毒液）母液，工作液，终止液（解毒液）第42页，讲稿共80张，创作于星期二4343复合诱变处理复合诱变处理（示例）（示例）-固体诱变固体诱变第43页，讲稿共80张，创作于星期二44443突变株的筛选突变株的筛选 中间培养中间培养基因型基因型+环境环境 表型表型 目的：目的：克服克服表型迟延，表型迟延，使突使突变变充分表达充分表达 分离性迟延现象分离性迟延现象 生理性迟延现象生理性迟延现象 第44页，讲稿共80张，创作于星期二4545合适的筛选方法合适的筛
23、选方法：平皿快速检测法平皿快速检测法（初筛）（初筛）变色圈法变色圈法 透明圈法透明圈法 生长圈法生长圈法 抑菌圈法抑菌圈法 梯度平板法梯度平板法 摇瓶培养法摇瓶培养法（复筛）（复筛）第45页，讲稿共80张，创作于星期二4646第46页，讲稿共80张，创作于星期二4747显色圈显色圈第47页，讲稿共80张，创作于星期二4848透明圈透明圈第48页，讲稿共80张，创作于星期二4949抑抑菌菌圈圈第49页，讲稿共80张，创作于星期二5050抑菌圈抑菌圈第50页，讲稿共80张，创作于星期二5151生长圈生长圈第51页，讲稿共80张，创作于星期二5252第一轮：第一轮：一个出发菌株一个出发菌株 选出选出
24、200个菌株个菌株 选出选出50株株 选出选出5株株诱变处理初筛初筛 （每株（每株1瓶）瓶）复筛复筛（每株（每株3-5瓶）瓶）第二轮：第二轮：5个出发菌株个出发菌株 选出选出50株株 选出选出5株株40株株 40株株 40株株 40株株 40株株诱变处理诱变处理初筛初筛复筛复筛（每株（每株1瓶）瓶）（每株（每株3-5瓶）瓶）复筛复筛第52页，讲稿共80张，创作于星期二5353三类常见突变株的筛选三类常见突变株的筛选产量突变株筛选产量突变株筛选 抗药性突变株的筛选（梯度平板法）抗药性突变株的筛选（梯度平板法）营养缺陷型营养缺陷型(auxotroph)auxotroph)的的筛选筛选 第53页，讲
25、稿共80张，创作于星期二5454 产量突变株筛选产量突变株筛选琼脂块培养法（春日霉素）琼脂块培养法（春日霉素）孢子悬液孢子悬液-诱变诱变-适当培养（表型迟延）适当培养（表型迟延）-涂布平板涂布平板-打孔取菌落打孔取菌落-琼脂块培养琼脂块培养-4-5天天 测定琼脂块所含的抗生素的抑菌圈测定琼脂块所含的抗生素的抑菌圈-效价高菌效价高菌 第54页，讲稿共80张，创作于星期二5555第55页，讲稿共80张，创作于星期二5656 高高产产菌株的初菌株的初筛筛（抑菌圈法）。指示菌：黑曲霉（抑菌圈法）。指示菌：黑曲霉As3.324As3.324；培养；培养时间时间 7272小小时时。A A为为出出发发菌株。
26、菌株。第56页，讲稿共80张，创作于星期二5757 抗药性突变株的筛选（梯度平板法）抗药性突变株的筛选（梯度平板法）抗药性突变株的筛选（梯度平板法）抗药性突变株的筛选（梯度平板法）第57页，讲稿共80张，创作于星期二5858ATCC25922 在在0.03125ug/ml的恩的恩诺诺沙星沙星制制备备的坡面平板上的菌苔、菌落的坡面平板上的菌苔、菌落第58页，讲稿共80张，创作于星期二5959第59页，讲稿共80张，创作于星期二6060营养缺陷型营养缺陷型(auxotroph)的筛选的筛选 MM基本培养基基本培养基 SM补充培养基补充培养基 CM完全培养基完全培养基营养缺陷型营养缺陷型野生型野生型
27、原养型原养型第60页，讲稿共80张，创作于星期二6161基本培养基基本培养基（minimal medium,MM）Minimum Essential Medium MM：凡是能满足野生型菌株营养要求的最低成分的合成培养基。凡是能满足野生型菌株营养要求的最低成分的合成培养基。完全培养基完全培养基（complete medium,CM）满足一切营养缺陷型菌株生长的天然或半合成培养基。满足一切营养缺陷型菌株生长的天然或半合成培养基。补充培养基补充培养基（supplementalmedium,SM）X 在在MM中有针对性地加入一或几种营养成分以满足相应营养缺陷中有针对性地加入一或几种营养成分以满足相应
28、营养缺陷型菌株生长的合成培养基。型菌株生长的合成培养基。第61页，讲稿共80张，创作于星期二6262筛选步骤筛选步骤 野生型菌株野生型菌株 C-1：诱变处理：诱变处理 C-2：淘汰野生型（：淘汰野生型（浓缩缺陷型浓缩缺陷型）C-3：检出缺陷型：检出缺陷型 C-4：鉴定缺陷型：鉴定缺陷型 第62页，讲稿共80张，创作于星期二6363C-2：淘汰野生型（浓缩缺陷型）：淘汰野生型（浓缩缺陷型）诱变后，仍存在大量的野生型，不利于分离诱变后，仍存在大量的野生型，不利于分离（1）抗生素法）抗生素法 野生型菌株在野生型菌株在MM上生长上生长+青霉素青霉素杀死杀死 缺陷型菌株在缺陷型菌株在MM上不生长青霉素上
29、不生长青霉素-不杀死不杀死 注注意意：使使环环境境的的渗渗透透压压提提高高，避避免免细细胞胞破破裂裂。抗抗生生素素处处理理完完后后，离离心心收集细胞，并转入低渗溶液收集细胞，并转入低渗溶液 制制霉霉菌菌素素法法则则适适合合于于真真菌菌（例例如如：酵酵母母、霉霉菌菌），可可与与真真菌菌细细胞胞膜膜上上的麦角甾醇作用，从而引起溶菌的麦角甾醇作用，从而引起溶菌 第63页，讲稿共80张，创作于星期二6464第64页，讲稿共80张，创作于星期二6565（2 2）菌丝过滤法）菌丝过滤法 适于适于：丝状（放线菌、霉菌）丝状（放线菌、霉菌）原理原理：野生型基本培养基上发育成菌丝；缺陷型孢子不野生型基本培养基上
30、发育成菌丝；缺陷型孢子不萌发可通过滤膜，野生型菌丝不能通过。萌发可通过滤膜，野生型菌丝不能通过。第65页，讲稿共80张，创作于星期二6666第66页，讲稿共80张，创作于星期二6767检出缺陷型检出缺陷型逐个检出法逐个检出法 影印检出法影印检出法 夹层培养法夹层培养法 限量补给法限量补给法第67页，讲稿共80张，创作于星期二6868逐个检出法逐个检出法 （牙签）（牙签）第68页，讲稿共80张，创作于星期二6969影印检出法影印检出法 第69页，讲稿共80张，创作于星期二7070夹层培养法夹层培养法 第70页，讲稿共80张，创作于星期二7171限量补给法限量补给法在在含含少少量量的的（0.01%
31、）蛋蛋白白胨胨的的MM上上培培养养,筛筛选选氨氨基基酸酸缺缺陷型陷型 大菌落为野生型大菌落为野生型，小菌落的为缺陷型。，小菌落的为缺陷型。第71页，讲稿共80张，创作于星期二7272鉴定缺陷型鉴定缺陷型生长谱法生长谱法 组合营养物法组合营养物法 组合补充培养基法组合补充培养基法 第72页，讲稿共80张，创作于星期二7373生长谱法生长谱法 斜面菌种斜面菌种-生理盐水洗下细胞生理盐水洗下细胞-洗涤洗涤-涂布涂布（105个个/皿）皿）方法简便；方法简便；回变和污染不影响结果回变和污染不影响结果 测定物质可为粉末测定物质可为粉末 或纸片或纸片第73页，讲稿共80张，创作于星期二7474纸片纸片1:氨
32、基酸混合液氨基酸混合液;纸片纸片2:维生素混合液维生素混合液;纸片纸片3:核酸水解液核酸水解液;纸片纸片4:酵母水解液酵母水解液 测定一般应分两阶段：测定一般应分两阶段：第一阶段：测定是哪类物质的缺陷型；第一阶段：测定是哪类物质的缺陷型；第第二二节节段段：根根据据第第一一阶阶段段确确定定的的范范围围，进进一一步步确确定定是是哪哪种种具具体体化化合合物物的的缺陷型；缺陷型；第74页，讲稿共80张，创作于星期二7575第75页，讲稿共80张，创作于星期二7676组合营养物法组合营养物法步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：步骤（以氨基酸缺陷型的鉴定为例）：a.将多种营养因子编组；将多种营养因子编组；b
33、.将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；将组合液的纸片放在涂菌的基本培养基上培养；c.结果分析；结果分析；一组：一组：1 2 3 4 5 二组：二组：2 6 7 8 9 三组：三组：3 7 10 11 12 四组：四组：4 8 11 1313 14 五组：五组：5 9 12 14 15营养因子分组编排时注意营养因子分组编排时注意:1）每组内无重复的营养因子）每组内无重复的营养因子2）每组中应包含只出）每组中应包含只出现一次现一次的因子的因子 3）每组中其他因子应）每组中其他因子应分别出现分别出现二次二次如：如：第76页，讲稿共80张，创作于星期二7777 一组：一组：1 2 3 4 5 二
34、组：二组：2 6 7 8 9 三组：三组：3 7 10 11 12 四组：四组：4 8 11 1313 14 五组：五组：5 9 12 14 15第77页，讲稿共80张，创作于星期二7878组合补充培养基法组合补充培养基法将待测的菌点种到各种补充培养基上，逐个分析各菌的缺陷类型，或将待测的菌点种到各种补充培养基上，逐个分析各菌的缺陷类型，或快速分离出所需缺陷类型的菌株。快速分离出所需缺陷类型的菌株。ABFEDCHG第78页，讲稿共80张，创作于星期二7979组合补充培养基法组合补充培养基法如是多重缺陷型菌株，则制成各营养组合平板，将带测菌株依次点接到这一组平板的对应位置上，根据在各平板上的生长情况逐个分析各菌株的缺陷型 MM+A +B +C +A+B +A+C B+C ABC第79页，讲稿共80张，创作于星期二感谢大家观看第80页，讲稿共80张，创作于星期二