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1、关于病原性球菌的检验第1页，讲稿共44张，创作于星期二一、生物学特性一、生物学特性（一）形态与染色一）形态与染色：革兰氏阳性革兰氏阳性球型菌，排列呈葡萄状。球型菌，排列呈葡萄状。无芽胞、鞭毛，无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。大多数无荚膜。致病性葡萄球菌（致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌）菌体较）菌体较小、约小、约0.51um.,普通普通0.41.2um。第一节第一节 金黄色葡萄球菌及其检验金黄色葡萄球菌及其检验第2页，讲稿共44张，创作于星期二电镜照片第3页，讲稿共44张，创作于星期二（二）、葡萄球菌的分类（二）、葡萄球菌的分类金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌表面葡萄球菌表面葡萄球菌腐生葡
2、萄球菌腐生葡萄球菌第4页，讲稿共44张，创作于星期二（三）、金黄色葡萄球菌培养特性（三）、金黄色葡萄球菌培养特性 1、需需氧氧或或兼兼性性厌厌氧氧，最最适适生生长长温温度度37、PH7.42、对对营营养养要要求求不不高高，在在普普通通培培养养基基中中生生长长良良好好，加加少少量量葡葡萄萄糖糖或或血血液液生生长长更更旺旺盛。盛。3、耐耐盐盐性性强强，在在含含7.515%培培养养基基中中能能生长。生长。第5页，讲稿共44张，创作于星期二4 4、在在肉肉汤汤中中是是混混浊浊生生长长，时时间间过过长长，有有少少量沉淀。量沉淀。5 5、在在普普通通培培养养基基上上生生长长，可可形形成成圆圆形形，凸凸起起
3、，表表面面光光滑滑，边边缘缘整整齐齐，不不透透明明，直径直径1 12mm2mm的菌落能产生黄色色素。的菌落能产生黄色色素。第6页，讲稿共44张，创作于星期二第7页，讲稿共44张，创作于星期二（四）、金黄色葡萄球菌生化特性（四）、金黄色葡萄球菌生化特性 1 1、可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖糖，产酸不产气。，产酸不产气。第8页，讲稿共44张，创作于星期二（五）（五）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶能产生的毒素和酶 1、溶血毒素、溶血毒素2、杀白细胞素、杀白细胞素3、血浆凝固酶、血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。性
4、的重要标志。4、脱氧核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶：5、肠毒素、肠毒素6、溶纤维蛋白酶、溶纤维蛋白酶7、透明质酸酶、透明质酸酶第9页，讲稿共44张，创作于星期二二、二、金黄色葡萄球菌的致病性金黄色葡萄球菌的致病性 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。附：附：金黄色葡萄球菌引起的下颚感染金黄色葡萄球菌引起的下颚感染金黄色葡萄球菌引起的须疮感染金黄色葡萄球菌引起的须疮感染葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片第10页，讲稿共44张，创作于星期二第11页，讲稿共44张，创作于星期二金
5、黄色葡萄球菌引起的须疮感染金黄色葡萄球菌引起的须疮感染第12页，讲稿共44张，创作于星期二葡萄球菌创口感染革兰氏染色涂片葡萄球菌创口感染革兰氏染色涂片第13页，讲稿共44张，创作于星期二（一）金黄色葡萄球菌的流行病学（一）金黄色葡萄球菌的流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。附：附：美国美国FDA报告的由金黄色葡萄球菌引起
6、食物中毒的典报告的由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的典型案例型案例。媒体关于日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的媒体关于日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道报道第14页，讲稿共44张，创作于星期二媒体关于日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌媒体关于日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道中毒事件的报道日本因食用染菌乳制品中毒者已逾万人(7月6日12:39)大阪市政府日宣布的调查结果显示，因食用日本雪印乳业公司大阪工厂生产的乳制品而中毒者已逾万人。在大阪府和京都府以及附近县，因食用雪印乳业公司大阪工厂生产的乳制品而中毒发病者已达人，其中有人被送往医院，目前还有人在医院接受治疗。据化验，该工厂生产的一些乳制
7、品中含有黄色葡萄球菌，这种细菌可产生使人出现腹泻、呕吐症状的型肠毒素。该厂乳制品染菌是生产设备没有按规定定期清洗而造成的。目前，日本各地超市和食品店都已停止销售雪印牌乳制品，一些地方政府已下令禁止食用雪印牌食品。大阪雪印厂已被当地政府勒令无期限停产，并且大规模回收月下旬出厂的几种染菌食品。总部设在北海道首府札幌市的雪印乳业公司是日本著名乳制食品厂家。该公司在全国共拥有家工厂，其中家工厂加工生产牛奶、牛奶饮料、酸奶等奶品。第15页，讲稿共44张，创作于星期二流行病学一般有如下特点流行病学一般有如下特点1.季节分布，多见于春夏季；季节分布，多见于春夏季；2.中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品
8、。中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。3.此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：1.食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；2.食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；3.熟食制品包装不严，运输过程受到污染；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；4.奶牛
9、患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染第16页，讲稿共44张，创作于星期二金黄色葡萄球菌肠毒素金黄色葡萄球菌肠毒素金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件：存放温度，在37C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。第17页，讲稿共44张，创作于星期二（二）食物中毒的临床症状由肠毒素引起
10、毒素进入人体后，潜伏期国1-5小时,最短15分钟,有发病快消失快的特点症状：先唾液分泌亢进,恶心、反复呕吐、腹痛、水样腹泻等第18页，讲稿共44张，创作于星期二金黄色葡萄球菌污染的控制金黄色葡萄球菌污染的控制防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，
11、注意低温保存。对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。第19页，讲稿共44张，创作于星期二三、金黄色葡萄球菌的检验三、金黄色葡萄球菌的检验方法：增菌培养法、直接计算法方法：增菌培养法、直接计算法（一）增菌培养法的检验步骤（程序）（一）增菌培养法的检验步骤（程序）检样检样稀释稀释7.5%NaCl 7.5%NaCl 肉汤增菌培养肉汤增菌培养 血平板、血平板、BPBP分离分离镜检
12、、镜检、血浆凝固血浆凝固E试试验验报告结果报告结果 第20页，讲稿共44张，创作于星期二（二）检验操作要点（二）检验操作要点 1：增菌：增菌：7.5%Nacl肉汤，肉汤，3724h，呈均匀浑浊生长。，呈均匀浑浊生长。2 2：平板分离：血平板：平板分离：血平板,37 2448h菌落成金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周菌落成金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有透明溶血圈（围有透明溶血圈（型）型）第21页，讲稿共44张，创作于星期二 BP平板平板：主要成分及作用主要成分及作用：氯化锂、甘氨酸氯化锂、甘氨酸:抑制非制病性葡萄球的生长抑制非制病性葡萄球的生长丙酮酸钠丙酮酸钠:促进葡
13、萄球菌生长促进葡萄球菌生长亚碲酸钾亚碲酸钾:抑制抑制G G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为碲盐呈黑色为碲盐呈黑色卵黄卵黄:含蛋白质、卵磷、脂肪含蛋白质、卵磷、脂肪第22页，讲稿共44张，创作于星期二在在B-PB-P平板上的菌落特征平板上的菌落特征:为圆形，光滑凸起、湿润、为圆形，光滑凸起、湿润、2-3mm，呈灰色至黑色，边缘色淡周围为呈灰色至黑色，边缘色淡周围为浑浊带，在其外层有一透明带。浑浊带，在其外层有一透明带。第23页，讲稿共44张，创作于星期二金黄色葡萄球菌在金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态平板上的菌落形态金黄色葡萄球菌在甘露醇盐平板上的菌落金黄
14、色葡萄球菌在甘露醇盐平板上的菌落第24页，讲稿共44张，创作于星期二3：镜检与血浆凝固：镜检与血浆凝固E试验试验从从B-P平平板板上上挑挑取取金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌的的菌菌落落进进行镜检行镜检如发现葡萄球菌,再做血浆凝固E试验做血浆凝固做血浆凝固E试验试验第25页，讲稿共44张，创作于星期二金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验第26页，讲稿共44张，创作于星期二4：结果报告：结果报告方式方式 （1）初初步步报报告告：根根据据血血平平板板培培养养计计数数和和镜镜检检，如如发发现现有有G+葡葡萄萄串串状状球球菌菌存存在在，且且有有溶溶血血性性，则则初初步步报报告告为为：“
15、有有金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌存在，菌存在，1g样品约含多少。样品约含多少。”（2）结果报告：根据培养特性、镜检、生化试验、动物试验结）结果报告：根据培养特性、镜检、生化试验、动物试验结果，可报告为：果，可报告为：“是否是致病性葡萄球菌是否是致病性葡萄球菌”.第27页，讲稿共44张，创作于星期二思考题思考题1：金黄色葡萄球菌可产生哪些毒素和酶？：金黄色葡萄球菌可产生哪些毒素和酶？2：金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌在在B-P平平板板上上的的菌菌落落特特征征如如何何，说说明其原理。明其原理。3：金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌在在血血平平板板上上的的菌菌落落特特征征如如何何，说说明明其其原理。原理。4：
16、确确认认葡葡萄萄球球菌菌为为金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌的的依依据据至至少少应应包包括哪几个试验？括哪几个试验？5：金黄色葡萄球菌的形态与染色、培养特征如何？：金黄色葡萄球菌的形态与染色、培养特征如何？第28页，讲稿共44张，创作于星期二第二节第二节 食品中溶血性链球菌的检验食品中溶血性链球菌的检验 一、概述一、概述 沙沙 志志 金金 链菌链菌二、二、生物学特性生物学特性（一）形态与染色：（一）形态与染色：1呈球形或卵圆形，直径呈球形或卵圆形，直径0.5um-1um 链状排列（长短不一）链状排列（长短不一）2 革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性3 无芽孢、无鞭
17、毛、多数无夹膜无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜 第29页，讲稿共44张，创作于星期二（二）培养特性（二）培养特性 1、多多数数为为需需氧氧或或兼兼性性厌厌氧氧，少少数数为为微微需需氧氧或专性厌氧或专性厌氧 2、对对营营养养要要求求高高，普普通通培培养养基基不不能能良良好好生长，（需加血清液、腹水等）生长，（需加血清液、腹水等）3、最适温度最适温度37 PH7.47.6第30页，讲稿共44张，创作于星期二4、在在液液体体培培养养基基中中，溶溶血血菌菌株株,呈呈絮絮状状或或颗颗粒粒状状沉沉淀淀生生长长（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链菌。（上清下浊）；不溶血菌球，均匀浑浊生长，如粪链菌。5、
18、在在血血平平板板上上，形形成成灰灰白白色色，半半透透明明、表表面面光光滑滑、有有乳乳光光圆圆形形突突起起的的细细小小菌菌落落，直直径径0.50.75mm，针针尖尖大大小小，菌落周围出现溶血环。菌落周围出现溶血环。链激酶：链激酶：四种溶血。四种溶血。第31页，讲稿共44张，创作于星期二(三三)生化特性生化特性1 1、均分糖葡萄糖产酸、均分糖葡萄糖产酸2 2、对对乳乳糖糖、甘甘露露醇醇、水水杨杨苷苷等等的的分分解解因因菌菌株株而异。而异。3 3、能能使使牛牛奶奶产产酸酸而而不不凝凝固固，不不液液化化明明胶胶、不不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）4 4、A A群菌对杆菌肽
19、敏感群菌对杆菌肽敏感第32页，讲稿共44张，创作于星期二（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶（四）致病性链球菌可产生的毒素和酶1 1、溶血素、溶血素2 2、致热外毒素、致热外毒素3 3、透明质酸酶、透明质酸酶4 4、链激酶、链激酶5 5、链道酶链道酶6 6、杀白细胞素、杀白细胞素第33页，讲稿共44张，创作于星期二（五）、（五）、抵抗力抵抗力6030min6030min即被杀死，对常用消毒剂敏感即被杀死，对常用消毒剂敏感乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。环素、磺胺均敏感。第34页，讲稿共44张，创作于星期二（六）、（六）、链球菌分类链球
20、菌分类 1 1、按溶血能力分类按溶血能力分类：（1）甲型（甲型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌（2 2）乙型（）乙型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌 （3 3）丙型（丙型（）链球菌）链球菌第35页，讲稿共44张，创作于星期二2 2、按血清学分类、按血清学分类主要是根据链球菌细胞壁抗原进行公类，这种方法可靠，但工作复杂。组抗原：用英文字母区分，共分18群：A B C D E F G H K L M N O P Q R S T 型抗原：用阿拉伯数字表示，对人类致病的90%在A群中。第36页，讲稿共44张，创作于星期二(七七)流行病学与致病性流行病学与致病性溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气
21、、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎
22、等变态反应。化脓性链球菌)第37页，讲稿共44张，创作于星期二三、微生物检验三、微生物检验（一）检验程序（一）检验程序 液体检样液体检样 固固体体检检样样样样品品处处理理增增菌菌培培养养分分离离培培养养纯纯化化培培养养生生化化鉴鉴定定报告报告第38页，讲稿共44张，创作于星期二（二）检验操作要点（二）检验操作要点 1 1、采样：食品：按常规、采样：食品：按常规 人体：咽拭人体：咽拭 、血、尿、血、尿2 2、增菌培养：、增菌培养：葡萄糖肉浸液肉汤葡萄糖肉浸液肉汤 一般情况一般情况 361 24h361 24h 匹克氏肉汤：在污染严重时用匹克氏肉汤：在污染严重时用第39页，讲稿共44张，创作于星期
23、二3 3、分分离离培培养养：血血平平板板，37 37 24h,24h,菌菌落落:灰灰白白色色，半半透透明明或或不不透透明明，表表面面光光滑滑，有有透透明溶血环明溶血环4 4、分纯培养：血平板、分纯培养：血平板 37 24h37 24h5 5、镜检：革兰氏染色，阳性，、镜检：革兰氏染色，阳性，G G+链状排列，链状排列，符合者可做生化鉴定。符合者可做生化鉴定。第40页，讲稿共44张，创作于星期二 6 6、生化鉴定：、生化鉴定：（1 1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）吸取草酸钾血浆吸取草酸钾血浆0.2mL0.2mL，加加0.8mL0.8mL灭菌生理盐水，混匀，灭菌生理
24、盐水，混匀，再再加加入入链链球球菌菌18-24h3618-24h36肉肉浸浸液液肉肉汤汤培培养养物物0.5mL0.5mL及及0.25%0.25%氯氯化钙化钙0.25mL0.25mL，混匀，置于，混匀，置于3636水浴水浴10min,10min,血血浆浆混混合合物物自自行行凝凝固固，观观察察凝凝块块重重新新完完全全溶溶解解的的时时间间，完完全全溶溶解解为为阳阳性性，如如24h24h后后不不溶溶解解即即为为阴阴性性。同同时时用用肉肉浸浸液液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。第41页，讲稿共44张，创作于星期二 （2 2）杆菌肽敏感试验）杆菌肽敏感试验 将将分分纯纯的的乙乙型型溶溶血血性性链链球球菌菌接接种种血血平平板板，在划线处贴附杆菌肽纸片，在划线处贴附杆菌肽纸片，3718h3718h，出现抑菌带为阳性，（可推测为乙型溶出现抑菌带为阳性，（可推测为乙型溶血性链球菌）血性链球菌）第42页，讲稿共44张，创作于星期二 7 7、报告：、报告：根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报告：有乙型溶血性链球菌生长。第43页，讲稿共44张，创作于星期二感谢大家观看第44页，讲稿共44张，创作于星期二