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1、1 肉新鲜度的实验室检验:肉新鲜度的实验室检验方法较多,如挥发性盐基氨的测定、纳斯靳(Nessler)氏试剂氨反应、球蛋白沉淀反应、pH 值的测定、硫化氢的测定、细菌学检查等。但只有挥发性盐基氨的测定作为国家现行法定检测方法,其他的实验室检测方法只能作为肉品新鲜度的辅助检验方法,应根据情况选用。(一)挥发性盐基氮(TVB-N)的测定 1.半微量定氮法(1)原理:蛋白质在酶和细菌的作用下分解后产生碱性含氮物质,有氨、伯胺、仲胺等,此类物质具有挥发性,可在碱性溶液中被蒸馏出来,用标准酸滴定,计算含量。(2)试剂 氧化镁混悬液 2%硼酸溶液(吸收液)0.2%甲基红乙醇液 0.1%亚甲蓝水溶液临用时将
2、等量混合为混合指示液 0.0100N 盐酸标准溶液或 0.0100N 硫酸标准溶液(3)仪器 半微量定氮装置:Markhan 氏式 微量滴定管:最小分度 0.01ml(4)操作方法 样液的制备:将样品除去脂肪、骨头及筋腱后,切碎搅匀,称取 10g 于锥形瓶中,加 100ml 水,不时振摇,浸渍 30min 后过滤,滤液置于冰箱中备用。测定:预先将盛有 10ml 吸收液并加有 5-6 滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端,并使其下端插入锥形瓶内吸收的液面下,精密吸取 5ml 上述样品滤液于蒸馏器反应室内,加 5ml 1%氧化镁混悬液,迅速盖塞,并加水以防漏气,通入蒸汽,待蒸汽充满蒸馏器内时即关闭蒸
3、汽出口管,由冷并行管出现第一滴冷凝水开始计时,蒸馏 5min 即停止,吸收液用 0.0100N 盐酸标准溶液或 0.0100N 硫酸标准溶液滴定,终点呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。(5)计算(V1-V2)N114 X1=100 m15/100 式中:X1样品中挥发性盐基氮的含量,mg/100g V1测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml V2试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml N1盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度,mol/L m1样品质量,g 141N 盐酸或硫酸标准溶液 1ml 相当氮的毫克数 2.微量扩散法(1)原理:挥发性含氮物质在碱性溶液中释出,在扩散皿中于 37时挥发后吸收于吸
4、收液中,用标准酸滴定,计算含量。(2)试剂 饱和碳酸钾溶液:称取 50g 碳酸钾,加 50ml 水,微加热助溶,使用时取上清液。水溶性胶:称取 10g 阿拉伯胶,加 10ml 水,再加 5ml 甘油及 5g 无水碳酸钾(或无水碳酸钠),研匀。吸收液:混合指示液、0.0100N 盐酸或硫酸标准溶液,与半微量定氮法相同。(3)仪器 扩散皿(标准型):玻璃质,内外室总直径 61mm,内室直径 35mm;外室深度 10mm,内室深度 5mm;外室壁存 3mm,内室壁存 2.5mm,回壁纱厚玻璃盖,如图 1-1 所示,其他型号亦可用。微量滴定管:最小分度 0.01ml。(4)操作方法 将水溶性胶涂于扩散
5、皿的边缘,在皿中央内室加入 1ml 吸收液及 1 滴混合指示液。在皿外室一侧加入 1.00ml 按半微量定氮法制备的样液,另一侧加入 1ml 饱和碳酸钾溶液,注意勿使两滴接触,立即盖好;2 密封后将皿于桌面上轻轻转动,使样液与碱液混合。将扩散皿置于 37温箱内放置 2h,揭去盖,用 0.01N 盐酸标准溶液或硫酸标准溶液滴定,终点呈蓝紫色。同时做试剂空白试验。图 1-1 微量扩散皿(标准型)(5)说明 加碳酸钾时应小心加入,不可溅入内室。扩散皿应洁净、干燥,不带酸碱性。检样测定与空白试验均需各作 2 份平行试验。计算(V3-V4)N114 X2=100 m1100/5 式中:X2样品中挥发性盐基氮的含量,mg/100g V3测定用样液消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml V4试剂空白消耗盐酸或硫酸标准溶液体积,ml N1盐酸或硫酸标准溶液的摩尔浓度,mol/L m1样品质量,g 141N 盐酸或硫酸标准溶液 1ml 相当氮的毫克数