《人用浓缩狂犬病疫苗制造及检定规程530.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《人用浓缩狂犬病疫苗制造及检定规程530.pdf（8页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、人用浓缩狂犬病疫苗制造及检定规程 本品系用狂犬病固定毒（aG）适应株接种原代地鼠肾单层细胞，培养后收获病毒液，加入甲醛溶液灭活后浓缩，再加氢氧化铝制成。用于预防狂犬病。1 毒种 1.1 毒种来源 狂犬病固定毒 aG 适应株系用狂犬病固定毒北京株先在地鼠肾细胞传代适应后，再通过豚鼠脑内交替传代适应而成。由中国药品生物制品检定所检定、保存与分发。生产用毒种传代应不超过 10aG 交替代。1.2 毒种检定 无菌试验 aG 毒种每次传代收剖后均须做无菌试验，合格者方可使用。病毒滴定 aG 毒种用体重 1113g 小白鼠进行脑内病毒滴定，滴度方可用于生产。纯毒试验 生产前和生产末期用小白鼠做脑内法中和试
2、验，以鉴定毒种的特异性。所用特异性抗血清由中国药品生物制品检定所提供。中和指数必须在500 以上。生产过程中如对毒种发生疑问，应及时进行鉴定。1.3 毒种传代 选择体重 120160g 健康豚鼠，脑内注射，选潜伏期 80100 小时具有典型狂犬病症状者放血致死，无菌取脑。豚鼠脑连续传代不超过 5 代。1.4 毒种保存 供生产用 aG 株在-60以下保存，不得超过 1 年。2 疫苗制造 2.1 细胞制备 地鼠 选用 1214 日龄健康地鼠，如腹腔有充血、渗出液、肾脏异常等应废弃。解剖 处死地鼠，用消毒液洗涤皮毛数次，末次浸泡一定时间，无菌取肾，置于瓶中剪碎。细胞消化及分装 将剪碎肾块洗涤数次，加
3、入适量胰蛋白酶消化液，置28过夜（约 1620 小时）或 37水浴消化适当时间，弃去消化液，经洗液洗涤 23 次，振摇或吹打分散细胞，加入适量生长液，分装培养瓶，置 37培养长成单层。使用液体 均不得含青霉素或其他 内酰胺类抗生素。生长液 为含不超过 10%小牛血清水解乳蛋白 SMI 液或其他适宜培养液，可加入适量抗生素。浸泡液 为水解乳蛋白 SMI 液或其他适宜培养液，其中保护剂可选用 0.1%以上人白蛋白，可加入适量抗生素。维持液 为 199 或其他适宜的溶液，其中保护剂中可选用 0.4%以上人白蛋白，可加入适量抗生素。外源因子检查 每生产批细胞留 5%（或不少于 500ml）悬液作为对照
4、细胞检查外源病毒。该细胞除不接种病毒外，细胞浓度和处理均与生产过程平行进行。至原液收获之日用显微镜观察，应无病变发生。并用 0.2%0.5%豚鼠红细胞（4保存不超过 7 天）进行血吸附试验，置 4830 分钟判定结果；再置 202530 分钟再次判定结果，均应为阴性。如有可疑病变或血吸附可疑阳性，在同种细胞上继续盲传，如传出病毒，该批细胞制备的疫苗应予废弃。2.2 病毒接种和病毒液收获 病毒接种 将长成单层细胞瓶倾去营养液，换入浸泡液。同时将无菌试验合格的 aG 株摇碎后，经 1000r/min 离心10 分钟，吸取上清液按1100014000 种入细胞瓶，也可将细胞与病毒同时接种，置 323
5、7继续培养。洗换 种毒后吸附适当时间倾去浸泡液，用 Hanks 液或其他适宜液体洗涤细胞，然后换入维持液，置 3237继续培育。病毒液收获 洗换后观察细胞生长情况，选择适当天数收获病毒液，取样品做病毒滴定及无菌试验。病毒滴定 将样品做 10 倍系列稀释，取 3 个稀释度的病毒液，每个稀释度用体重 1113g 小白鼠 4 只，每只脑内接种，逐日观察，14 日判定结果，计算 LD50（3 日内死亡者不计）。滴度要求在以上。可重试 1 次。2.3 灭活 病毒液内加入 1/40001/5000 的甲醛溶液，置 3237或 28或其他适宜温度灭活一定时间。2.4 过滤合并 将无菌试验合格的病毒液用滤球或
6、绢布过滤后合并即为原液。2.5 防腐剂 按 0.005%0.01%加入硫柳汞。2.6 超滤浓缩 原液按其滴度进行不同倍数浓缩。按生物制品无菌试验规程进行无菌试验。3 疫苗剂型 3.1 液体浓缩疫苗 病毒液灭活经超滤浓缩后再加入Al（OH）3，使最终含量为。3.2 冻干浓缩疫苗 用适当方法进行超滤或精制，然后冻干。冻干保护剂 1%明胶和 5%蔗糖或其他适宜保护剂。疫苗稀释 将保护剂按比例加入疫苗内，充分摇匀，取样做冻干前无菌试验后立即分装与冻干。4 半成品检定 4.1 无菌试验 按生物制品无菌试验规程进行。4.2 灭活试验 将样品脑内接种体重 1113g 小白鼠 10 只，每只，观察 14 天，
7、应健存，非特异死亡不超过 20%。小白鼠如发病死亡，可继续灭活并进行灭活试验。4.3 残余牛血清蛋白含量 用检定所认可的试剂和方法测定，液体浓缩疫苗与冻干浓缩疫苗牛血清蛋白含量应50ng/ml。5 分装 半成品检定合格后即可进行分装。液体浓缩疫苗每支装量2ml，冻干浓缩疫苗每支装量 1ml 或 2ml。6 成品检定 6.1 效力试验 由质量检定部门进行。攻击毒株 攻击毒株（CVS）由中国药品生物制品检定所发给。击毒株的制备 启开冻干毒种：稀释成 10-2 悬液，用体重 1113g 小白鼠，脑内接种，连续传 23 代，收脑时应选择 45 天有典型狂病症状的脑组织，放-60低温保存。病毒悬液的制备
8、：将鼠脑研磨并加入适量正常马血清或小牛血清蒸馏水，制成20%悬液，经 1000r/min 沉淀 10 分钟，吸取上清液分装安瓿或小管，储存于-60冰箱中，经用体重 1820g 小白鼠做病毒滴定，符合要求后，方可作攻击毒用。疫苗参考对照品。由检定所定期发给。待检疫苗 取同批安全试验合格疫苗用做 5 倍连续稀释，一般采用 3 个稀释度以上进行免疫，如 15、125、1125 的稀释度。免疫 选用体重 1214g 的小白鼠，免疫时应同时有参考对照品的对照和攻击病毒 LD50 测定的对照小白鼠，参考对照品可做 125、1125 和 1625 共 3 个稀释度进行免疫，每只小白鼠腹腔注射，间隔一周再免疫
9、一次，免疫时将疫苗保存在冰浴中，各组小白鼠都应在同样的条件下饲养。攻击 小白鼠于第一次免疫后 14 天，用预先测定含 5100 个 LD50 的病毒量脑内攻击只。病毒测定用 10-0、10-1、10-2、10-3，每稀释度不少于 8 只，疫苗免疫组小白鼠每个稀释度为 1416 只，所有小白鼠自攻击之日起观察 14 天。第 5 天后死亡和呈现典型脑病症状也作为因狂犬病死亡而计算在内。判定结果和合格指标 要求原病毒悬液注射的小白鼠 80%以上死亡，攻击病毒含量为 5100 个 LD50。液体浓缩疫苗合格指标应安瓿（2ml），冻干浓缩疫苗应安瓿（1ml 或 2ml）。疫苗不合格可复试一次。6.2 物
10、理检查 液体浓缩疫苗应为橘红-紫红色混浊液体，久放形成可摇散的沉淀。冻干浓缩疫苗为淡黄色疏松体。6.3 化学测定 按生物制品化学检定规程进行。pH 值 pH 值应为。氢氧化铝含量 不得超过。硫柳汞含量 不得超过 0.01%。游离甲醛含量 不得超过 0.015%。水分 冻干疫苗水分不得超过 3.5%。6.4 无菌试验 按生物制品无菌试验规程进行。6.5 毒性试验 取疫苗接种 1113g 小白鼠 10 只，每只腹腔注射，观察 7 天，应健存。6.6 稀释液 冻干浓缩疫苗用灭菌注射用水或其他适宜稀释液稀释，其质量应符合中国药典规定。7 保存与效期 疫苗应保存于 28。液体浓缩疫苗由效力合格之日起效期
11、为 1 年，冻干浓缩疫苗由冻干之日起，效期为 2 年。人用浓缩狂犬病疫苗使用说明书 本疫苗为狂犬病固定毒（aG）适应株，接种于原代地鼠肾单层细胞，培养后收获病毒液，加入甲醛溶液灭活后浓缩，再加氢氧化铝制成。用于预防狂犬病。液体浓缩疫苗为橘红色-紫红色微混浊液体，久放形成可摇散的沉淀。冻干浓缩疫苗为淡黄色疏松体。含硫柳汞防腐剂。接种对象 凡被狂犬或其他疯动物咬伤、抓伤时，应立即处理局部伤口（用肥皂水反复冲洗后，再用碘酊消毒数次），并及时注射本疫苗。用法 1.一般咬伤者于 0（第 1 天，注射当天）、3（第 4 天，以下类推）、7、14、30 天各注射本疫苗 1 安瓿（液体疫苗 2ml，冻干疫苗
12、1ml 或 2ml），儿童用量相同。严重咬伤者（头、面颈、手指、多部位 3 处以上咬伤，咬穿皮肤或舔触粘膜者），应按上述方法注射本疫苗。并应于 0、3 天注射加倍量疫苗，并于 0天注射疫苗的同时用抗狂犬病血清（40IU/kg）或狂犬病免疫球蛋白（20IU/kg）浸润咬伤局部和肌内注射。凡联合使用抗狂犬病血清或免疫球蛋白者，必须在全程疫苗注射完毕后再加强注射 23 针疫苗，即在全程注射后第 15、75 天或第 10、20、90 天加强。2.本疫苗供上臂三角肌肌内注射。儿童应在大腿前内侧区肌内注射。3.使用前将疫苗振摇成均匀悬液。冻干浓缩疫苗则加入等量灭菌注射用水溶解后，以无菌手续将疫苗吸入注射器内。4.对未咬伤健康者预防注射，可按 0、7、21 天注射 3 针。禁忌 由于狂犬病是致死性疾病，疫苗注射无禁忌证。注意事项 1.注射疫苗期间可照常工作，切忌饮酒、浓茶等刺激性食物及剧烈劳动等，以避免引起反应。2.伤口不宜包扎或缝合。保存 应保存于 28。