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1、关于实验五培养液的配制现在学习的是第1页,共14页500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水瓶 酸度计 50mL小烧杯3个 孔径0.22m微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去离子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力搅拌器 电子天平 药匙【实验材料实验材料】现在学习的是第2页,共14页现在学习的是第3页,共14页DMEM干粉干粉 1瓶瓶(1,000mL量量)NaHCO3 3.7gL-谷氨酰胺谷氨酰胺 0.2g超纯水超纯水 1,000mL【配方配方】现在学习的是第4页,共14页取清洗干净的500mL大烧杯一个,加入新鲜制备的三蒸水约300mL,
2、加热至1530;将DMEM干粉袋竖立轻弹,使袋中粉下沉,剪开袋口,将干粉倒入500mL的大烧杯中,用超纯水冲洗袋23次;放入清洗干净的磁子,在磁力搅拌器充分搅拌,以确保培养基干粉充分溶解;【配制方法配制方法】现在学习的是第5页,共14页根据配方要求,加入准确称取的NaHCO31.85g,L-谷氨酰胺0.1g,充分摇匀至完全溶解;加入已经制备好的双抗溶液,使青霉素和链霉素的最终使用浓度达到100g/mL;加入培养基总体积约10的已灭活的小牛血清;【配制方法配制方法】现在学习的是第6页,共14页用浓度为7.4的NaHCO3溶液调整溶液的pH值为7.27.4,加超纯水定容,并将培养液转入盐水瓶;用一
3、次性滤器过滤上述培养液到灭菌的盐水瓶,封口,4保存备用。【配制方法配制方法】现在学习的是第7页,共14页现在学习的是第8页,共14页现在学习的是第9页,共14页现在学习的是第10页,共14页实验五实验五 1M HCl的配制的配制 1M NaOH的配制的配制250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 5mL移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl【实验材料实验材料】现在学习的是第11页,共14页 用5mL的移液器准确移取盐酸21mL,加入到279mL超纯水中。【HCl的配制过程的配制过程】【NaOH的配制过程的配制过程】NaOH 10g超纯水超纯水 250mL边
4、加边搅拌,溶解过程会产热。边加边搅拌,溶解过程会产热。现在学习的是第12页,共14页【课程安排课程安排】1、每组确定本组的、每组确定本组的D-Hanks液是否有?液是否有?是否已过滤除菌;是否已过滤除菌;2、每组的、每组的EDTA需要高压灭菌;需要高压灭菌;3、需要配制新鲜的、需要配制新鲜的1M HCl和和1M NaOH溶液,以及溶液,以及7.4的的NaHCO3溶液;溶液;4、需要重新灭菌、需要重新灭菌5mL枪头;枪头;5、每组准备一铝饭盒,内放小剪刀一把,、每组准备一铝饭盒,内放小剪刀一把,小镊子一把,手术钳一把,大剪刀一把,小镊子一把,手术钳一把,大剪刀一把,高压灭菌;高压灭菌;现在学习的是第13页,共14页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第14页,共14页