核酸结构与功能.ppt

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1、关于核酸结构与功能课件现在学习的是第1页，共80页核核 酸酸(nucleic acid)是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，是以核苷酸为基本组成单位的生物大分子，携带和传递遗传信息。携带和传递遗传信息。现在学习的是第2页，共80页一、核酸的发现和研究工作进展一、核酸的发现和研究工作进展 1868年年 Fridrich Miescher从脓细胞中提取从脓细胞中提取“核素核素”1944年年 Avery等人等人证实证实DNA是遗传物质是遗传物质1953年年 Watson和和Crick发现发现DNA的双螺旋结构的双螺旋结构1965年年 Nirenberg发现发现遗传密码遗传密码1970年年 Temi

2、n和和Baltimore发发现现逆转录酶逆转录酶1981年年 Gilbert和和Sanger建建立立DNA 测序方法测序方法1985年年 Mullis发明发明PCR 技术技术1990年年 美国启动美国启动人类基因组计划人类基因组计划(HGP)1994年年 中国人类基因组计划启动中国人类基因组计划启动2001年年 美、英等国美、英等国完成人类基因组计划基本框架完成人类基因组计划基本框架现在学习的是第3页，共80页二、核酸的分类及分布二、核酸的分类及分布 90%90%以以上上分分布布于于细细胞胞核核，其其余余分分布布于于核外核外如线粒体，叶绿体，质粒等。如线粒体，叶绿体，质粒等。分布于胞核、胞液。

3、分布于胞核、胞液。(deoxyribonucleic acid,DNA)(ribonucleic acid,RNA)脱氧核糖核酸脱氧核糖核酸 核糖核酸核糖核酸携带遗传信息，决定细胞和个携带遗传信息，决定细胞和个体的基因型体的基因型(genotype)。参与细胞内参与细胞内DNA遗传信息的表遗传信息的表达。某些病毒达。某些病毒RNA也可作为遗也可作为遗传信息的载体。传信息的载体。现在学习的是第4页，共80页第一节第一节核酸的化学组成及其一级结构核酸的化学组成及其一级结构The Chemical Component and Primary Structure of Nucleic Acid现在学习

4、的是第5页，共80页核酸的化学组成核酸的化学组成 1.元素组成元素组成C、H、O、N、P（910%）2.分子组成分子组成 碱基碱基(base)：嘌呤碱，嘧啶碱：嘌呤碱，嘧啶碱 戊糖戊糖(ribose)：核糖，脱氧核糖：核糖，脱氧核糖 磷酸磷酸(phosphate)现在学习的是第6页，共80页嘌呤嘌呤(purine)腺嘌呤腺嘌呤(adenine,A)鸟嘌呤鸟嘌呤(guanine,G)碱碱 基基现在学习的是第7页，共80页嘧啶嘧啶(pyrimidine)胞嘧啶胞嘧啶(cytosine,C)尿嘧啶尿嘧啶(uracil,U)胸腺嘧啶胸腺嘧啶(thymine,T)现在学习的是第8页，共80页 碱基的互变

5、异构碱基的互变异构酮式烯醇 C=O C-OH N N氨基亚氨基 C-NH2 C=NH2+HN HN 受介质pH影响现在学习的是第9页，共80页戊戊 糖糖（构成（构成RNA）12345核糖核糖(ribose)（构成（构成DNA）脱氧核糖脱氧核糖(deoxyribose)H现在学习的是第10页，共80页核苷：核苷：AR,GR,UR,CR脱氧核苷：脱氧核苷：dAR,dGR,dTR,dCR一、核苷酸的结构一、核苷酸的结构1.核苷核苷(ribonucleoside)的形成的形成碱基和核糖（脱氧核糖）通过碱基和核糖（脱氧核糖）通过糖糖苷键苷键连接形成核苷（脱氧核苷）。连接形成核苷（脱氧核苷）。11现在学习

6、的是第11页，共80页核苷酸：核苷酸：AMP,GMP,UMP,CMP脱氧核苷酸：脱氧核苷酸：dAMP,dGMP,dTMP,dCMP 2.核苷酸核苷酸(ribonucleotide)的结构与命名的结构与命名核苷（脱氧核苷）和磷酸以核苷（脱氧核苷）和磷酸以磷酸酯键磷酸酯键连接形成核苷酸（脱氧核苷酸）。连接形成核苷酸（脱氧核苷酸）。现在学习的是第12页，共80页 电电 脑脑 模模 型图型图 简化式简化式 酯键酯键糖苷键糖苷键现在学习的是第13页，共80页体内重要的游离核苷酸及其衍生物体内重要的游离核苷酸及其衍生物含核苷酸的生物活性物质：含核苷酸的生物活性物质：NAD+、NADP+、CoA-SH、FA

7、D 等都含有等都含有 AMP 多磷酸核苷酸：多磷酸核苷酸：NMP，NDP，NTP 环化核苷酸环化核苷酸:cAMP，cGMPAMPADPATPcAMPNADP+NAD+现在学习的是第14页，共80页5端端3端端3.3.核苷酸的连接核苷酸的连接 核苷酸之间以核苷酸之间以磷酸二酯键磷酸二酯键连接形连接形成多核苷酸链，即成多核苷酸链，即核酸。核酸。CGA现在学习的是第15页，共80页二、核酸的一级结构二、核酸的一级结构定义定义核核酸酸中中核核苷苷酸酸的的排排列列顺序。顺序。由由于于核核苷苷酸酸间间的的差差异异主主要要是是碱碱基基不不同同，所所以以也称为也称为碱基序列碱基序列。55端端3端端CGA现在学

8、习的是第16页，共80页A G P5 P T PG PC PT P OH 3 书写方法书写方法5 pApCpTpGpCpT-OH 3 5 A C T G C T 3 目目 录录现在学习的是第17页，共80页第二节第二节DNA的空间结构与功能的空间结构与功能Dimensional Structure and Function of DNA现在学习的是第18页，共80页DNA的二级结构的二级结构-双螺旋结构双螺旋结构DNA双螺旋结构的研究背景和历史意义双螺旋结构的研究背景和历史意义DNA双螺旋结构模型要点双螺旋结构模型要点DNA的超螺旋结构及其在染色质中的组装的超螺旋结构及其在染色质中的组装DNA

9、的超螺旋结构的超螺旋结构原核生物原核生物DNA的高级结构的高级结构DNA在真核生物细胞核内的组装在真核生物细胞核内的组装DNA的功能的功能现在学习的是第19页，共80页一、一、DNA的二级结构的二级结构双螺旋结构双螺旋结构现在学习的是第20页，共80页（一）（一）DNA双螺旋结构的研究背景和历史意义双螺旋结构的研究背景和历史意义 碱基组成分析碱基组成分析Chargaff 规则：规则：A=TG C 碱基的理化数据分析碱基的理化数据分析A-T、G-C以以氢键氢键配对较合理配对较合理 DNA纤维的纤维的X-线衍射图谱分析线衍射图谱分析 目目 录录现在学习的是第21页，共80页（二）（二）DNA双螺旋

10、结构模型要点双螺旋结构模型要点（Watson,Crick,1953）DNADNA分分子子由由两两条条相相互互平平行行但但走走向向相相反反的的脱脱氧氧多多核核苷苷酸酸链链组组成成，两两链链以以-脱脱氧氧核核糖糖-磷磷酸酸-为为骨骨架架，以以右右手手螺螺旋旋方方式式绕绕同同一一公公共共轴轴盘盘。螺螺旋旋直直径径为为2 2nm，形形成成大大沟沟(major groove)及及小沟小沟(minor groove)相间。相间。目目 录录现在学习的是第23页，共80页（二）（二）DNA双螺旋结构模型要点双螺旋结构模型要点 （Watson,Crick,1953）碱碱基基垂垂直直螺螺旋旋轴轴居居双双螺螺旋旋内

11、内側側，与与对对側側碱碱基基形形成成氢氢键键配配对对（互互补配对形式：补配对形式：A=T;G C）。相邻碱基平面距离相邻碱基平面距离0.34nm，螺螺旋一圈螺距旋一圈螺距3.4nm，一圈，一圈10对碱对碱基。基。目目 录录现在学习的是第24页，共80页碱基互补配对碱基互补配对 TAGC现在学习的是第25页，共80页现在学习的是第26页，共80页现在学习的是第27页，共80页（二）（二）DNA双螺旋结构模型要点双螺旋结构模型要点 （Watson,Crick,1953）氢氢键键维维持持双双链链横横向向稳稳定定性性，碱碱基基堆堆积积力力维维持持双双链链纵纵向向稳定性稳定性。目目 录录现在学习的是第2

12、8页，共80页（三）（三）DNA双螺旋结构的多样性双螺旋结构的多样性目目 录录现在学习的是第29页，共80页B-现在学习的是第30页，共80页现在学习的是第31页，共80页现在学习的是第32页，共80页现在学习的是第33页，共80页二、二、DNA的超螺旋结构及其在染色质中的超螺旋结构及其在染色质中的组装的组装（一）（一）DNA的超螺旋结构的超螺旋结构超螺旋结构超螺旋结构(superhelix 或或supercoil)DNA双螺旋链再盘绕即形成超螺旋结构。双螺旋链再盘绕即形成超螺旋结构。正超螺旋正超螺旋(positive supercoil)盘绕方向与盘绕方向与DNA双螺旋方同相同双螺旋方同相同

13、 负超螺旋负超螺旋(negative supercoil)盘绕方向与盘绕方向与DNA双螺旋方向相反双螺旋方向相反 现在学习的是第34页，共80页意义意义DNA超螺旋结构整体或局部的拓扑学变化超螺旋结构整体或局部的拓扑学变化及其调控对于及其调控对于DNA复制和复制和RNA转录过程具有关转录过程具有关键作用。键作用。现在学习的是第35页，共80页（二）原核生物（二）原核生物DNA的高级结构的高级结构现在学习的是第36页，共80页（三）（三）DNA在真核生物细胞核内的组装在真核生物细胞核内的组装真真核核生生物物染染色色体体由由DNA和和蛋蛋白白质质构构成成，其其基本单位是基本单位是 核小体核小体(n

14、ucleosome)。核小体的组成核小体的组成DNA：约约200bp 组蛋白：组蛋白：H1H2A，H2BH3H4现在学习的是第37页，共80页现在学习的是第38页，共80页现在学习的是第39页，共80页三、三、DNA的功能的功能DNA的的基基本本功功能能是是以以基基因因的的形形式式荷荷载载遗遗传传信信息息，并并作作为为基基因因复复制制和和转转录录的的模模板板。它它是是生生命命遗传的物质基础，也是个体生命活动的信息基础。遗传的物质基础，也是个体生命活动的信息基础。基基因因从从结结构构上上定定义义，是是指指DNA分分子子中中的的特特定定区段，其中的核苷酸排列顺序决定了基因的功能。区段，其中的核苷酸

15、排列顺序决定了基因的功能。现在学习的是第40页，共80页第三节第三节 RNA的结构与功能的结构与功能Structure and Function of RNA现在学习的是第41页，共80页RNA的种类、分布、功能的种类、分布、功能现在学习的是第42页，共80页一一、信使、信使RNA的结构与功能的结构与功能hnRNA 内含子内含子(intron)mRNA *mRNA成熟过程成熟过程 外显子外显子(exon)目目 录录现在学习的是第43页，共80页*mRNA结构特点结构特点1.大大多多数数真真核核mRNA的的5末末端端均均在在转转录录后后加加上上一一个个7-甲甲基基鸟鸟苷苷，同同时时第第一一个个核

16、核苷苷酸酸的的C2也也是是甲甲基基化化，形成帽子结构：形成帽子结构：m7GpppNm-。2.大多数真核大多数真核mRNA的的3末端有一个多聚腺苷酸末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多聚结构，称为多聚A尾。尾。现在学习的是第44页，共80页帽子结构帽子结构现在学习的是第45页，共80页mRNA核内向胞质的转位核内向胞质的转位mRNA的稳定性维系的稳定性维系翻译起始的调控翻译起始的调控 帽子结构和帽子结构和多聚多聚A尾的功能尾的功能eIF4A帽结合蛋白（帽结合蛋白（CBPs)polyA结合蛋白结合蛋白(PAB)现在学习的是第46页，共80页*mRNA的功能的功能 把把DNA所所携携带带的

17、的遗遗传传信信息息，按按碱碱基基互互补补配配对对原原则则，抄抄录录并并传传送送至至核核糖糖体体，用用以以决决定定其合成蛋白质的氨基酸排列顺序。其合成蛋白质的氨基酸排列顺序。DNAmRNA蛋白蛋白转录转录翻译翻译原核细胞原核细胞 细胞质细胞质细胞核细胞核DNA内含子内含子外显子外显子转录转录转录后剪接转录后剪接转运转运mRNAhnRNA翻译翻译蛋白蛋白真核细胞真核细胞 现在学习的是第47页，共80页*tRNA的一级结构特点的一级结构特点 含含 1020%稀有碱基，如稀有碱基，如 DHU 3末端为末端为 CCA-OH 5末端大多数为末端大多数为G 具有具有 T C 二、转运二、转运RNA的结构与功

18、能的结构与功能现在学习的是第48页，共80页N,N二甲基鸟嘌呤二甲基鸟嘌呤N6-异戊烯腺嘌呤异戊烯腺嘌呤双氢尿嘧啶双氢尿嘧啶4-巯尿嘧啶巯尿嘧啶 稀有碱基稀有碱基 现在学习的是第49页，共80页*tRNA的二级结构的二级结构三叶草形三叶草形 氨基酸臂氨基酸臂 DHU环环 反密码环反密码环 额外环额外环 TC环环氨基酸氨基酸臂臂额外环额外环现在学习的是第50页，共80页*tRNA的三级结构的三级结构 倒倒L形形*tRNA的功能的功能活活化化、搬搬运运氨氨基基酸酸到到核核糖糖体体，参参与与蛋蛋白白质质的翻译。的翻译。现在学习的是第51页，共80页*rRNA的结构的结构三、核蛋白体三、核蛋白体RNA

19、的结构与功能的结构与功能*rRNA的功能的功能参参与与组组成成核核蛋蛋白白体体，作作为为蛋蛋白白质质生生物物合成的场所。合成的场所。现在学习的是第52页，共80页*rRNA的种类（根据沉降系数）的种类（根据沉降系数）真核生物真核生物5S rRNA28S rRNA5.8S rRNA18S rRNA原核生物原核生物5S rRNA23S rRNA16S rRNA现在学习的是第53页，共80页核蛋白体的组成核蛋白体的组成原核生物（以大肠杆菌为例）原核生物（以大肠杆菌为例）真核生物（以小鼠肝为例）真核生物（以小鼠肝为例）小亚基小亚基30S40SrRNA16S1542个核苷酸个核苷酸18S1874个核苷酸

20、个核苷酸蛋白质蛋白质21种种占总重量的占总重量的40%33种种占总重量的占总重量的50%大亚基大亚基50S60SrRNA23S5S2940个核苷酸个核苷酸120个核苷酸个核苷酸28S5.85S5S4718个核苷酸个核苷酸160个核苷酸个核苷酸120个核苷酸个核苷酸蛋白质蛋白质31种种占总重量的占总重量的30%49种种占总重量的占总重量的35%现在学习的是第54页，共80页四四、其他小分子、其他小分子RNA及及RNA组学组学除除了了上上述述三三种种RNA外外，细细胞胞的的不不同同部部位位存存在在的的许许多多其其他他种种类类的的小小分分子子RNA，统统称称为为非非mRNA小小RNA(small n

21、on-messenger RNAs,snmRNAs)。snmRNAs现在学习的是第55页，共80页snmRNAs的的种类种类核内小核内小RNARNA核仁小核仁小RNARNA胞质小胞质小RNARNA催化性小催化性小RNARNA小片段干涉小片段干涉 RNARNA snmRNAs的的功能功能参与参与hnRNA和和rRNA的加工和转运。的加工和转运。现在学习的是第56页，共80页RNARNA组组学学研研究究细细胞胞中中snmRNAs的的种种类类、结结构构和和功功能能。同同一一生生物物体体内内不不同同种种类类的的细细胞胞、同同一一细细胞胞在在不不同同时时间间、不不同同状状态态下下snmRNAs的的表表达

22、达具具有有时间和空间特异性。时间和空间特异性。RNARNA组学组学现在学习的是第57页，共80页核酸和蛋白质的比较核酸和蛋白质的比较现在学习的是第58页，共80页核核 酸酸 的的 理理 化化 性性 质质The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid第第 四四 节节目目 录录现在学习的是第59页，共80页现在学习的是第60页，共80页1.DNA或或RNA的定量的定量OD260=1.0相当于相当于50 g/ml双链双链DNA40g/ml单链单链DNA（或（或RNA）20g/ml寡核苷酸寡核苷酸2.判断核酸样品的纯度判断核酸样品的纯度DNA纯

23、品纯品:OD260/OD280=1.8RNA纯品纯品:OD260/OD280=2.0OD260的应用的应用目目 录录现在学习的是第61页，共80页二、二、DNA的变性的变性(denaturation)定义定义：在某些理化因素作用下，在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两双链解开成两条单链的过程。条单链的过程。方法：方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、酰酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。变性后其它理化性质变化：变性后其它理化性质变化：OD260增高增高粘度下降粘度下降比旋度下降比旋度下降浮力密度升高浮力密度升高酸碱滴定曲

24、线改变酸碱滴定曲线改变生物活性丧失生物活性丧失目目 录录现在学习的是第62页，共80页DNADNA变性的本质是双链间氢键的断裂变性的本质是双链间氢键的断裂现在学习的是第63页，共80页例：变性引起紫外吸收值的改变例：变性引起紫外吸收值的改变DNA的紫外吸收光谱的紫外吸收光谱增色效应：增色效应：DNA变性时其溶液变性时其溶液OD260增高的现象。增高的现象。目目 录录现在学习的是第64页，共80页热变性热变性解解链链曲曲线线：如如果果在在连连续续加加热热DNADNA的的过过程程中中以以温温度度对对A260A260（absorbanceabsorbance，A A，A260A260代代表表溶溶液液

25、在在260nm260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。目目 录录现在学习的是第65页，共80页 Tm：变变性性是是在在一一个个相相当当窄窄的的温温度度范范围围内内完完成成，在在这这一一范范围围内内，紫紫外外光光吸吸收收值值达达到到最最大大值值的的50%时时的的温温度度称称为为DNA的的解解链链温温度度，又又称称融融解解温温度度(melting temperature,Tm)。其大小与。其大小与G+C含量成正比。含量成正比。目目 录录现在学习的是第66页，共80页三、三、DNA的复性与分子杂交的复性与分子杂交 DNA复性复性(renatur

26、ation)的定义的定义在适当条件下，变性在适当条件下，变性DNADNA的两条互补链可恢复的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为天然的双螺旋构象，这一现象称为复性复性。减色效应减色效应DNA复性时，其溶液复性时，其溶液OD260降低。降低。热变性的热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为程称为退火退火(annealing)。目目 录录现在学习的是第67页，共80页在在DNA变变性性后后的的复复性性过过程程中中，如如果果将将不不同同种种类类的的DNA单单链链分分子子或或RNA分分子子放放在在同同一一溶溶液液中中，只只要要两两种种单单链链分分子子之之间

27、间存存在在着着一一定定程程度度的的碱碱基基配配对对关关系系，在在适适宜宜的的条条件件（温温度度及及离离子子强强度度）下下，就就可可以在不同的分子间形成以在不同的分子间形成杂化双链杂化双链(heteroduplex)。这这种种杂杂化化双双链链可可以以在在不不同同的的DNA与与DNA之之间间形形成成，也也可可以以在在DNA和和RNA分分子子间间或或者者RNA与与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。核酸分子杂交核酸分子杂交(hybridization)现在学习的是第68页，共80页现在学习的是第69页，共80页DNA-DNA杂交双链分子杂交双链分子变性变

28、性 复性复性 不同来源的不同来源的DNA分子分子现在学习的是第70页，共80页现在学习的是第71页，共80页核酸分子杂交的应用核酸分子杂交的应用研究研究DNA分子中某一种基因的位置分子中某一种基因的位置定两种核酸分子间的序列相似性定两种核酸分子间的序列相似性检测某些专一序列在待检样品中存在与否检测某些专一序列在待检样品中存在与否是基因芯片技术的基础是基因芯片技术的基础现在学习的是第72页，共80页探针探针在核酸杂交的基础上发展起来的一种在核酸杂交的基础上发展起来的一种用于研究核酸和基因诊断的新技术称用于研究核酸和基因诊断的新技术称为为探针技术。探针：单链的核苷酸聚合体标记后，：单链的核苷酸聚合

29、体标记后，就可以称为探针。就可以称为探针。现在学习的是第73页，共80页第第 五五 节节 核核 酸酸 酶酶 Nuclease现在学习的是第74页，共80页核酸酶核酸酶是指所有可以水解核酸的酶是指所有可以水解核酸的酶依据底物不同分类依据底物不同分类DNA酶酶(deoxyribonuclease,DNase)：专一降解专一降解DNA。RNA酶酶(ribonuclease,RNase)：专一降解专一降解RNA。依据切割部位不同依据切割部位不同核酸内切酶：核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性核酸内切酶。异性限制性核酸内切酶。核酸外切酶：核酸外切酶：53或或35核酸

30、外切酶。核酸外切酶。现在学习的是第75页，共80页参参与与DNA的的合合成成与与修修复复及及RNA合合成成后后的的剪剪接接等等重要基因复制和基因表达过程重要基因复制和基因表达过程 负负责责清清除除多多余余的的、结结构构和和功功能能异异常常的的核核酸酸，同同时也可以清除侵入细胞的外源性核酸时也可以清除侵入细胞的外源性核酸 在消化液中降解食物中的核酸以利吸收在消化液中降解食物中的核酸以利吸收 体外重组体外重组DNA技术中的重要工具酶技术中的重要工具酶 生物体内的核酸酶负责细胞内外催化核酸的降解生物体内的核酸酶负责细胞内外催化核酸的降解 核酸酶的功能核酸酶的功能 现在学习的是第76页，共80页 核核

31、 酶酶催化性催化性DNA(DNAzyme)人工合成的寡聚脱氧核苷人工合成的寡聚脱氧核苷酸片段，也能序列特异性降解酸片段，也能序列特异性降解RNA。催化性催化性RNA(ribozyme)作为序列特异性的核酸作为序列特异性的核酸内切酶降解内切酶降解mRNA。现在学习的是第77页，共80页小小 结结DNA的组成与结构及的组成与结构及性质性质 一级：碱基序列一级：碱基序列 二级：双螺旋结构二级：双螺旋结构 三级：核小体、超螺旋等三级：核小体、超螺旋等RNA的组成与结构的组成与结构 mRNA：密码子、：密码子、5帽子、帽子、3poly尾尾 tRNA：三叶草、倒：三叶草、倒L型结构、反密码子型结构、反密码子 rRNA：大、小亚基的组装：大、小亚基的组装DNA与与RNA的区别：组成、结构、功能的区别：组成、结构、功能现在学习的是第78页，共80页核酸的性质OD260/OD280变性与复性变性与复性增色效应与减色效应增色效应与减色效应解链曲线与解链温度解链曲线与解链温度分子杂交与探针技术分子杂交与探针技术现在学习的是第79页，共80页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第80页，共80页