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1、现在学习的是第1页，共24页u 一、绪言一、绪言u 二、实验方法二、实验方法u 三、结果分析与讨论三、结果分析与讨论u 四、结论四、结论u 五、致谢五、致谢现在学习的是第2页，共24页1.11.1罗布麻花简介罗布麻花简介 罗布麻为夹竹桃科野生植物，花中含有种类和含量均十分丰富的黄酮类化合物，不仅在医疗上有十分广泛的应用，还有美容保健等功效。1.21.2高速逆流色谱高速逆流色谱 一种新型现代色谱分离技术，基于液-液分配色谱原理，具有制备量大，样品无损耗，分离纯度高，重现性好，速度快等优点现在学习的是第3页，共24页2.12.1实验材料与仪器实验材料与仪器 2.1.1 2.1.1实验材料实验材料l
2、 罗布麻花药材采摘自新疆罗布泊地区，经长春师范学 院中心实验室张语迟鉴定；l D101大孔树脂购自南开大学化工厂；l 提取制备用乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯和正己 烷为分析纯试剂(北京化工厂)；l 色谱用乙腈、乙酸为分析纯试剂(美国Fisher公司)；l 超纯水为本研究部门自制(18.2 Pa)现在学习的是第4页，共24页lWaters 2695高效液相色谱,配备Waters 2998二极管阵列检测器(美国Waters公司)；Agilent C18色谱柱(250mm4.6 mm,5 m,美国Agilent公司)；lFinigan LCQTM 电喷雾质谱(美国Thermo-Fisher Scie
3、ntific公司)；lDE MINI 型高速逆流色谱仪(英国Dynamic Extractions公司)，内有两个制备性色谱柱，柱体积为135 mL；转速范围为02000 rpm；lSanorius BS l10S 分析天平(十万分之一，北京赛多利斯有限公司)；l 纯水器(法国Millipore公司)；l 0.45 m滤膜(美国Agilent公司)；现在学习的是第5页，共24页各组成溶剂分液漏斗中摇匀，静止分别取2 mL上相和下相溶解少量样品粉末分别取1 mL上下层溶液于不同试管90 oC水浴加热挥发至干1 mL色谱甲醇溶解0.45m微孔滤膜过滤高效液相色谱检测现在学习的是第6页，共24页罗布
4、麻花粉末100.002 g2000 mL 60%乙醇溶液200 mL水溶解上D-101型大孔树脂柱制得罗布麻花粗提物，总黄酮回流提取1h(3次)合并滤液，浓缩至干先用5倍柱体积的水洗脱弃去再用5倍柱体积的60%乙醇溶液洗脱收集并浓缩至干现在学习的是第7页，共24页2.2.3 2.2.3 溶剂系统的配制溶剂系统的配制 按照乙酸乙酯乙腈水乙酸为5:3:5:0.05(v:v:v:v)，分液漏斗中，摇匀，静止。下层溶液作为流动相，上层溶液作为固定相。2.2.42.2.4逆流色谱实验参数的设置逆流色谱实验参数的设置 固定相流速：10 mL/min 流动相流速：2.5 mL/min 柱体积：150 mL
5、进样量：150 mg 注入样品量：2 mL（从30 min时开始接流分）检测波长：254 nm 转速：1400 rpm 柱温：30 oC 运行：180 min现在学习的是第8页，共24页 二元线性梯度洗脱：流动相A为0.2%醋酸溶液，流动相B为乙腈，流动相梯度程序：0-15 min,5%B，15-60 min，5%-40%B 流速:1.2 mL/min 样品进样量:10 L 检测波长：254 nm 柱温:28 oC现在学习的是第9页，共24页3.1 3.1 利用高效液相色谱筛选逆流色谱溶剂体系利用高效液相色谱筛选逆流色谱溶剂体系 现在学习的是第10页，共24页图1：罗布麻花总黄酮的制备型逆流色
6、谱图现在学习的是第11页，共24页图2：罗布麻花提取物的高效液相色谱图 提取物中含有13种化学成分，共有10个化合物通过高速逆流色谱洗脱下来.现在学习的是第12页，共24页图3：流分1的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为槲皮素3OD葡萄吡喃糖基(21)OD葡萄吡喃糖苷(白麻苷)现在学习的是第13页，共24页图4：流分2的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为Kaempferol 7ODglucopyranosyl(14)Dglucopyranoside(山奈酚7OD吡喃葡萄糖基(14)D吡喃葡萄糖苷
7、)现在学习的是第14页，共24页图5：流分3的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为芹菜素7O葡萄糖苷(大波斯菊苷)现在学习的是第15页，共24页图6：流分4的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过与对照品进行紫外光谱数据、质谱数据比对，证明该化合物4为大波斯菊苷同分异构体（芹菜素-3-O-半乳糖苷）现在学习的是第16页，共24页图7：流分5的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过与对照品进行紫外光谱数据、质谱数据比对，证明该化合物5为金丝桃苷现在学习的是第17页，共24页图8：流分6的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明
8、该化合物为槲皮素3O葡萄糖苷(异槲皮素)现在学习的是第18页，共24页图9：流分7的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过与对照品进行液相色谱保留时间、紫外光谱数据和质谱数据进行比对，证明该化合物为香草酸现在学习的是第19页，共24页图10：流分8的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据，证明该化合物为山奈酚3葡萄糖苷(紫云英苷)现在学习的是第20页，共24页图11：流分9的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过对照品的液相色谱保留时间和质谱数据进行比对，证明该化合物为槲皮素现在学习的是第21页，共24页图11：流分9的高效液相色谱图及紫外光谱图 通过该化合物的质谱数据和核磁
9、共振数据，证明该化合物为谷甾醇3O葡萄糖苷(胡萝卜苷)现在学习的是第22页，共24页 以乙酸乙酯乙腈水乙酸为5:3:5:0.05(v:v:v:v)为溶剂系统，应用高速逆流色谱对罗布麻花中的总黄酮进行分离，分离得到了纯度较好的10个有效成分，经高效液相色谱检测，含有7个黄酮类化合物，1个有机酸类化合物和1个苷类化合物，通过对化合物的液相色谱保留时间、紫外光谱数据、质谱数据和核磁共振数据进行比对，确定了分离得到的化合物的种类和结构。现在学习的是第23页，共24页 这篇论文是在我的导师刘春明老师、王晶老师的多次指导下完成的。在这篇论文的写作过程中，王晶老师不辞辛劳，多次与我就论文中许多核心问题作深入细致地探讨，给我提出切实可行的指导性建议，并细心全面地修改了我的论文。衷心感谢化学学院所有老师对我的栽培、支持和鼓励，感谢所有朋友的关心和帮助现在学习的是第24页，共24页