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1、实验三食品中微生物菌落总数的测定第1页，本讲稿共14页一、实验目的一、实验目的学习并掌握标准平皿活菌计数（学习并掌握标准平皿活菌计数（SPC）的基）的基本原理和方法本原理和方法明确菌落总数测定对被检样品进行卫生学明确菌落总数测定对被检样品进行卫生学评价的意义评价的意义第2页，本讲稿共14页二、实验原理二、实验原理v菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培基基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每基基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。）检样中形成的微生物菌落总数。第3页，本讲稿共14页标准平皿活菌计数法
2、（标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计数法法）是最常用的活菌计数法将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿培养基上，细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来。细胞发育而来。反映食品被细菌污染的程度反映食品被细菌污染的程度由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验条由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验条件下不生长，故件下不生长，故计数结果要比实际值低。计数结果要比实
3、际值低。计数结果要比实际值低。计数结果要比实际值低。第4页，本讲稿共14页三、实验器材三、实验器材（一）培养基（一）培养基 平板计数琼脂培养基平板计数琼脂培养基（二）实验材料（二）实验材料 市售饮料市售饮料（三）其他（三）其他 1、无菌培养皿、无菌培养皿7套套 2、无菌吸管（、无菌吸管（1支支10mL，5支支1mL）3、无菌生理盐水（、无菌生理盐水（225mL三角瓶三角瓶1个，个，9mL试管试管5支）支）（四）仪器（四）仪器 超净工作台超净工作台第5页，本讲稿共14页四、实验步骤四、实验步骤1、样品处理：样品处理：以无菌操作，先用以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面酒精棉球擦拭样品表面酒精棉球
4、擦拭样品表面酒精棉球擦拭样品表面后后后后，用，用无菌剪无菌剪无菌剪无菌剪刀刀刀刀将包装剪破，量取检样将包装剪破，量取检样25mL放入放入225mL灭菌生理盐水灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀当中，充分振荡，混合均匀，制成制成10-1稀释度样品稀释度样品2、梯度稀释法依次稀释样品到梯度稀释法依次稀释样品到10-4第6页，本讲稿共14页菌落总数操作流程图菌落总数操作流程图第7页，本讲稿共14页3、选择、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌移液三个稀释度的样品均液，用无菌移液管分别吸取管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做到无菌平皿中，每个稀释度做2个平皿；个平皿；同
5、时，吸取同时，吸取1mL无菌生理盐水到无菌生理盐水到1个平皿中作为空白对照个平皿中作为空白对照4、熔化培养基、熔化培养基5、及时及时及时及时将已冷却到将已冷却到46的培养基倾入到平皿中，并转动平皿的培养基倾入到平皿中，并转动平皿使其混合均匀使其混合均匀6、37倒置培养倒置培养倒置培养倒置培养2天天7、按照计数原则计数、按照计数原则计数第8页，本讲稿共14页五、菌落计数方法五、菌落计数方法有较大片状菌落生长者不宜采用，有较大片状菌落生长者不宜采用，若片状小于平板一半时且余部均匀若片状小于平板一半时且余部均匀分布，则以半个平板菌落数分布，则以半个平板菌落数2倍报倍报告告无明显界限链状菌落每条单链视
6、为无明显界限链状菌落每条单链视为一个菌落一个菌落选取菌落数在选取菌落数在30300cfu之间，无蔓延生长的平板计数之间，无蔓延生长的平板计数低于低于30的记录具体菌落数，大于的记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可的可记录为多不可计，每个稀释度采用计，每个稀释度采用2个平行的均数个平行的均数第9页，本讲稿共14页1、计数结果的表述、计数结果的表述若只有一个稀释度平板在30300CFU，则计算两平行平板的均数，再乘以稀释倍数乘以稀释倍数乘以稀释倍数乘以稀释倍数报告之若有连续两个稀释度连续两个稀释度符合计数要求则按下公式：例例：10-2=232，244 10-3=33，35菌落总数菌落总数所有
7、符合计数要求所有符合计数要求的平板菌落数之和的平板菌落数之和较低稀释度有效较低稀释度有效平板数平板数较高稀释度有效较高稀释度有效平板数平板数较低稀释度较低稀释度N=(232+244+33+35)(2+20.1)10-2=24727第10页，本讲稿共14页结果表述结果表述10-1均数10-2均数描 述最终结果25536均在30300间则按计数公式2.6103多不可计345各平板均300，取稀释度最高稀释度最高稀释度最高稀释度最高者报告，余计为多不可数3.5104122均小于30则取稀释度最低稀释度最低稀释度最低稀释度最低者报告1.210233029所有平板均不在30300CFU且一部分300者以
8、最接近30或300者报告2.910300所有平板均无菌落则记为 1乘以最低稀释倍数报告 110即 10第11页，本讲稿共14页2、报告方式、报告方式菌落数在菌落数在100cfu内时按四舍五入修约，采用内时按四舍五入修约，采用两位有效数字两位有效数字报告报告大于或等于大于或等于100时，第三位数四舍五入修约，取前两位时，第三位数四舍五入修约，取前两位数字，例：数字，例：205043210000 or 2.1105所有平板均为蔓延菌落而无法计数者报告所有平板均为蔓延菌落而无法计数者报告菌落蔓延菌落蔓延若空白对照有菌落则此次检测结果无效若空白对照有菌落则此次检测结果无效固体样品以固体样品以cfu/g，液体以，液体以cfu/mL为单位为单位第12页，本讲稿共14页六、实验结果与分析六、实验结果与分析 样品菌落总数样品菌落总数N=cfu/mL 稀释倍数10-2 10-3 10-4菌落数(CFU)分析分析分析分析第13页，本讲稿共14页七、思考题七、思考题1、菌落总数的定义是什么？、菌落总数的定义是什么？2、SPC法所得结果就是样品中实际的细菌总法所得结果就是样品中实际的细菌总数，这种说法对吗？为什么？数，这种说法对吗？为什么？3、为什么熔化后的培养基要冷却到、为什么熔化后的培养基要冷却到46才能才能倒入有菌液的平板？倒入有菌液的平板？第14页，本讲稿共14页