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1、关于微生物学实验第一页，讲稿共八十八页哦实验一实验一 微生物学实验基础微生物学实验基础n n普通光学显微镜的使用普通光学显微镜的使用n n培养基的制备培养基的制备n n消毒与灭菌消毒与灭菌n n细菌三型的观察细菌三型的观察第二页，讲稿共八十八页哦普通光学显微镜的使用普通光学显微镜的使用n n目的要求目的要求n n1.1.学习并掌握油镜的原理及使用方学习并掌握油镜的原理及使用方法法n n2.2.复习普通台式显微镜的结构、各复习普通台式显微镜的结构、各部分的结构、使用方法部分的结构、使用方法第三页，讲稿共八十八页哦n n基本原理（油镜的原理）基本原理（油镜的原理）l l1.增加照明亮度增加照明亮度
2、n n在油镜与载玻片间加折射率与玻璃相近的介在油镜与载玻片间加折射率与玻璃相近的介在油镜与载玻片间加折射率与玻璃相近的介在油镜与载玻片间加折射率与玻璃相近的介质（如：香柏油）减少光线的折射与反射损质（如：香柏油）减少光线的折射与反射损质（如：香柏油）减少光线的折射与反射损质（如：香柏油）减少光线的折射与反射损失失失失l l2.2.增加显微镜的分辨率增加显微镜的分辨率第四页，讲稿共八十八页哦油镜的使用方法油镜的使用方法n n1.准备工作（复习）准备工作（复习）l l显微镜的放置显微镜的放置显微镜的放置显微镜的放置l l光源的调节光源的调节光源的调节光源的调节l l目镜的调节目镜的调节目镜的调节目
3、镜的调节l l聚光器的调节聚光器的调节聚光器的调节聚光器的调节第五页，讲稿共八十八页哦油镜的使用方法油镜的使用方法n n2.显微观察显微观察l l低倍镜观察低倍镜观察低倍镜观察低倍镜观察l l高倍镜观察高倍镜观察高倍镜观察高倍镜观察l l油镜观察油镜观察油镜观察油镜观察n n在观察目标区域滴加香柏油，仔细微调，认在观察目标区域滴加香柏油，仔细微调，认在观察目标区域滴加香柏油，仔细微调，认在观察目标区域滴加香柏油，仔细微调，认真观察真观察真观察真观察寻找观察目标第六页，讲稿共八十八页哦油镜的使用方法油镜的使用方法n n3.显微镜使用完毕的处理显微镜使用完毕的处理l l上升镜筒，取下载玻片上升镜筒
4、，取下载玻片上升镜筒，取下载玻片上升镜筒，取下载玻片l l用擦镜纸檫去油用擦镜纸檫去油用擦镜纸檫去油用擦镜纸檫去油l l用擦镜纸蘸无水乙醚乙醇用擦镜纸蘸无水乙醚乙醇l l用干净擦镜纸擦拭物镜与目镜用干净擦镜纸擦拭物镜与目镜用干净擦镜纸擦拭物镜与目镜用干净擦镜纸擦拭物镜与目镜l l还原各部分还原各部分n n注意：切勿用手、其他纸擦拭镜头注意：切勿用手、其他纸擦拭镜头第七页，讲稿共八十八页哦实验观察内容及实验报告实验观察内容及实验报告n n内容：观察金黄色葡萄球菌、枯草内容：观察金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的染色标本芽孢杆菌的染色标本n n试验报告：绘出金黄色葡萄球菌、试验报告：绘出金黄色葡萄球菌
5、、枯草芽孢杆菌在油镜下的形态。枯草芽孢杆菌在油镜下的形态。第八页，讲稿共八十八页哦第九页，讲稿共八十八页哦第十页，讲稿共八十八页哦第十一页，讲稿共八十八页哦链球菌第十二页，讲稿共八十八页哦杆菌第十三页，讲稿共八十八页哦培养基的制备培养基的制备牛肉膏蛋白胨培养基的制备牛肉膏蛋白胨培养基的制备n n目的要求目的要求n n1.明确培养基的制备原理明确培养基的制备原理n n2.掌握配置培养基的一般方法与步骤掌握配置培养基的一般方法与步骤第十四页，讲稿共八十八页哦培养基的制备原理培养基的制备原理n n牛肉膏蛋白胨培养基是应用最广牛肉膏蛋白胨培养基是应用最广泛的、最普通的细菌培养基泛的、最普通的细菌培养基
6、,也称也称普通培养基普通培养基第十五页，讲稿共八十八页哦n n组成组成l l牛肉膏：碳源、能源、磷酸盐、维生素牛肉膏：碳源、能源、磷酸盐、维生素牛肉膏：碳源、能源、磷酸盐、维生素牛肉膏：碳源、能源、磷酸盐、维生素l l蛋白胨：氮源、维生素蛋白胨：氮源、维生素l lNaCl:NaCl:无机盐无机盐无机盐无机盐l l水水水水l l琼脂：塑型琼脂：塑型琼脂：塑型琼脂：塑型第十六页，讲稿共八十八页哦培养基的制备方法培养基的制备方法n n1.1.称量称量(牛肉膏牛肉膏牛肉膏牛肉膏,蛋白胨蛋白胨蛋白胨蛋白胨,NaCl),NaCl)n n2.2.溶化溶化n n3.3.调调调调pHn n4.4.过滤过滤n n
7、5.分装分装分装分装n n6.加塞加塞n n7.7.包扎包扎包扎包扎n n8.8.灭菌灭菌灭菌灭菌n n9.搁置斜面搁置斜面第十七页，讲稿共八十八页哦注意事项注意事项n n1.蛋白胨易吸水，称取要迅速蛋白胨易吸水，称取要迅速n n2.琼脂溶化过程中注意温度，勿使琼脂溶化过程中注意温度，勿使过热溢出过热溢出第十八页，讲稿共八十八页哦消毒与灭菌消毒与灭菌n n消毒与灭菌的概念消毒与灭菌的概念消毒与灭菌的概念消毒与灭菌的概念l l消毒：一般是指消灭病原菌与有害微生物的营养体消毒：一般是指消灭病原菌与有害微生物的营养体消毒：一般是指消灭病原菌与有害微生物的营养体消毒：一般是指消灭病原菌与有害微生物的营
8、养体l l灭菌：指杀灭一切微生物的营养体、芽孢、孢子灭菌：指杀灭一切微生物的营养体、芽孢、孢子灭菌：指杀灭一切微生物的营养体、芽孢、孢子灭菌：指杀灭一切微生物的营养体、芽孢、孢子n n消毒与灭菌的主要方法消毒与灭菌的主要方法消毒与灭菌的主要方法消毒与灭菌的主要方法l l加热法加热法加热法加热法l l过滤法过滤法过滤法过滤法l l照射法照射法照射法照射法l l化学药品化学药品化学药品化学药品第十九页，讲稿共八十八页哦加热法加热法n n干热灭菌干热灭菌l l火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、金属火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、金属火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、金属火焰灼烧灭菌：接种环、接种针、金属用具、
9、无菌操作时在火焰上短暂灼烧瓶用具、无菌操作时在火焰上短暂灼烧瓶用具、无菌操作时在火焰上短暂灼烧瓶用具、无菌操作时在火焰上短暂灼烧瓶口等口等口等口等l l热空气灭菌：玻璃器皿热空气灭菌：玻璃器皿热空气灭菌：玻璃器皿热空气灭菌：玻璃器皿第二十页，讲稿共八十八页哦加热法湿热灭菌加热法湿热灭菌n n高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌l l高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅l l15-30min15-30minl l培养基、工作服、橡皮物品、玻璃培养基、工作服、橡皮物品、玻璃器皿等器皿等第二十一页，讲稿共八十八页哦n n常压蒸汽灭菌常压蒸汽灭菌l l某些不适宜高压蒸汽灭菌的培养基某些不适宜高压蒸汽灭菌的培养基某些不适宜
10、高压蒸汽灭菌的培养基某些不适宜高压蒸汽灭菌的培养基l l不具备高压蒸汽灭菌条件的不具备高压蒸汽灭菌条件的l l仅能杀死大多数微生物、可用常压间歇仅能杀死大多数微生物、可用常压间歇仅能杀死大多数微生物、可用常压间歇仅能杀死大多数微生物、可用常压间歇灭菌法灭菌法灭菌法灭菌法第二十二页，讲稿共八十八页哦加热法湿热灭菌加热法湿热灭菌n n煮沸消毒法煮沸消毒法l l注射器、解剖器械等注射器、解剖器械等l l10-15 min可杀死细菌所有营养体、部可杀死细菌所有营养体、部可杀死细菌所有营养体、部可杀死细菌所有营养体、部分芽孢分芽孢分芽孢分芽孢n n超高温杀菌超高温杀菌l l135-150135-150、
11、2-8s2-8sl l牛奶及其他液态食品牛奶及其他液态食品牛奶及其他液态食品牛奶及其他液态食品l l杀死微生物、保存营养杀死微生物、保存营养杀死微生物、保存营养杀死微生物、保存营养第二十三页，讲稿共八十八页哦其他方法其他方法n n过滤除菌过滤除菌过滤除菌过滤除菌l l血清、抗生素、糖溶液等不适宜加热消毒血清、抗生素、糖溶液等不适宜加热消毒血清、抗生素、糖溶液等不适宜加热消毒血清、抗生素、糖溶液等不适宜加热消毒灭菌灭菌灭菌灭菌n n辐射灭菌辐射灭菌l l紫外线照射紫外线照射紫外线照射紫外线照射n n化学药品灭菌化学药品灭菌化学药品灭菌化学药品灭菌l l重金属离子、抗生素、来苏尔、的乙醇。重金属离
12、子、抗生素、来苏尔、的乙醇。重金属离子、抗生素、来苏尔、的乙醇。重金属离子、抗生素、来苏尔、的乙醇。第二十四页，讲稿共八十八页哦干热灭菌干热灭菌n n目的要求：目的要求：l l.了解干热灭菌的原理和应用范围了解干热灭菌的原理和应用范围了解干热灭菌的原理和应用范围了解干热灭菌的原理和应用范围l l.学习干热灭菌的操作技术学习干热灭菌的操作技术学习干热灭菌的操作技术学习干热灭菌的操作技术n n基本原理：基本原理：l l干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固
13、变性而达到灭菌的目的。性而达到灭菌的目的。性而达到灭菌的目的。性而达到灭菌的目的。l l细胞内的蛋白质凝固与其本身的含水量有关，当环境细胞内的蛋白质凝固与其本身的含水量有关，当环境细胞内的蛋白质凝固与其本身的含水量有关，当环境细胞内的蛋白质凝固与其本身的含水量有关，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之，和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之，和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之，和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之，含水量越小，凝固缓慢。因此与湿热灭菌相比，干热含水量越小，凝固缓慢。因此与湿热灭菌相比，干热含水量越小，凝固缓慢。因此与湿热灭菌相比，干热含水量
14、越小，凝固缓慢。因此与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（灭菌所需温度高（灭菌所需温度高（灭菌所需温度高（），时间长。），时间长。），时间长。），时间长。第二十五页，讲稿共八十八页哦干热灭菌干热灭菌n n器材：器材：器材：器材：l l培养皿，试管，吸管，电烘箱等培养皿，试管，吸管，电烘箱等培养皿，试管，吸管，电烘箱等培养皿，试管，吸管，电烘箱等n n操作步骤：操作步骤：l l装入待灭菌的物品：装入待灭菌的物品：装入待灭菌的物品：装入待灭菌的物品：避免物品太挤妨碍空气流通避免物品太挤妨碍空气流通避免物品太挤妨碍空气流通避免物品太挤妨碍空气流通l l升温升温升温升温l l恒温恒温恒温恒温l l降温降
15、温降温降温l l开箱取物：开箱取物：开箱取物：开箱取物：温度未降至温度未降至温度未降至温度未降至7070前勿开箱，防爆前勿开箱，防爆前勿开箱，防爆前勿开箱，防爆第二十六页，讲稿共八十八页哦高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌n n一、目的要求：一、目的要求：l l.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。围。围。围。l l.学习高压蒸汽灭菌的基本方法。学习高压蒸汽灭菌的基本方法。学习高压蒸汽灭菌的基本方法。学习高压蒸汽灭菌的基本方法。n n二、基本原理二、基本原理二、基本原理二、基本原理l l高压使水的沸点
16、增高，产生超过高压使水的沸点增高，产生超过高压使水的沸点增高，产生超过高压使水的沸点增高，产生超过100100的高的高的高的高温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性温蒸汽，导致菌体蛋白质凝固变性l l水蒸气的穿透性强水蒸气的穿透性强水蒸气的穿透性强水蒸气的穿透性强l l湿热的蒸汽有潜热湿热的蒸汽有潜热湿热的蒸汽有潜热湿热的蒸汽有潜热第二十七页，讲稿共八十八页哦高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌n n器材：器材：器材：器材：l l牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、高压蒸汽灭菌锅牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、高压蒸汽灭菌锅牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、高压蒸汽灭菌锅
17、牛肉膏蛋白胨培养基、培养皿、高压蒸汽灭菌锅n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤l l取出内层锅，向外层锅内加适量的水取出内层锅，向外层锅内加适量的水取出内层锅，向外层锅内加适量的水取出内层锅，向外层锅内加适量的水l l放置内层锅及待灭菌物放置内层锅及待灭菌物放置内层锅及待灭菌物放置内层锅及待灭菌物l l加盖，并将盖上排气软管插入内层锅的排气槽加盖，并将盖上排气软管插入内层锅的排气槽加盖，并将盖上排气软管插入内层锅的排气槽加盖，并将盖上排气软管插入内层锅的排气槽l l加热同时打开排气阀加热同时打开排气阀加热同时打开排气阀加热同时打开排气阀l l灭菌所需时间到后关闭电源，降温灭菌所需时间到后关闭
18、电源，降温灭菌所需时间到后关闭电源，降温灭菌所需时间到后关闭电源，降温l l取出灭菌培养基放入取出灭菌培养基放入取出灭菌培养基放入取出灭菌培养基放入3737温箱培养温箱培养温箱培养温箱培养2424小时，检查无菌生小时，检查无菌生小时，检查无菌生小时，检查无菌生长则可用长则可用长则可用长则可用n n试验报告试验报告试验报告试验报告l l检查灭菌是否彻底检查灭菌是否彻底检查灭菌是否彻底检查灭菌是否彻底第二十八页，讲稿共八十八页哦紫外线灭菌紫外线灭菌n n一、目的要求：一、目的要求：l l了解紫外线灭菌的基本原理及方法了解紫外线灭菌的基本原理及方法了解紫外线灭菌的基本原理及方法了解紫外线灭菌的基本原
19、理及方法n n二、基本原理二、基本原理l l紫外线可诱导胸腺嘧啶二聚体的形成、紫外线可诱导胸腺嘧啶二聚体的形成、紫外线可诱导胸腺嘧啶二聚体的形成、紫外线可诱导胸腺嘧啶二聚体的形成、DNADNA链的交联，抑制链的交联，抑制链的交联，抑制链的交联，抑制DNADNA的复制的复制的复制的复制l l幅射使空气中的氧电离产生幅射使空气中的氧电离产生幅射使空气中的氧电离产生幅射使空气中的氧电离产生o,o,使使使使o2o2生成臭氧生成臭氧生成臭氧生成臭氧（O3O3）或使）或使）或使）或使H2OH2O生成生成生成生成H2O2,H2O2,利用利用利用利用 O3H2O2O3H2O2的的的的氧化杀菌作用氧化杀菌作用氧
20、化杀菌作用氧化杀菌作用第二十九页，讲稿共八十八页哦紫外线灭菌紫外线灭菌n n器材：器材：l l牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外线灯牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外线灯牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外线灯牛肉膏蛋白胨培养基、溶液或试剂、紫外线灯n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤l l紫外线灯直接照射紫外线灯直接照射紫外线灯直接照射紫外线灯直接照射30min30min、检查培养基、检查培养基、检查培养基、检查培养基3737温箱温箱温箱温箱培养培养培养培养2424小时，无菌生长则可用小时，无菌生长则可用小时，无菌生长则可用小时，无菌生长则可用l l化学消毒剂与紫外线照射结合使用化学消
21、毒剂与紫外线照射结合使用化学消毒剂与紫外线照射结合使用化学消毒剂与紫外线照射结合使用n n试验报告试验报告试验报告试验报告l l检查灭菌是否彻底检查灭菌是否彻底检查灭菌是否彻底检查灭菌是否彻底第三十页，讲稿共八十八页哦微孔滤膜过滤除菌微孔滤膜过滤除菌n n一、目的要求：一、目的要求：l l.了解过滤除菌的基本原理。了解过滤除菌的基本原理。了解过滤除菌的基本原理。了解过滤除菌的基本原理。l l.掌握过滤除菌方法。掌握过滤除菌方法。掌握过滤除菌方法。掌握过滤除菌方法。n n二、基本原理二、基本原理l l通过机械作用滤去液体或空气中的细菌通过机械作用滤去液体或空气中的细菌通过机械作用滤去液体或空气中
22、的细菌通过机械作用滤去液体或空气中的细菌第三十一页，讲稿共八十八页哦微孔滤膜过滤除菌微孔滤膜过滤除菌n n器材器材器材器材l l培养基、培养基、培养基、培养基、2%2%葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板葡萄糖溶液、肉汤蛋白胨平板l l注射器、微孔滤膜过滤器、注射器、微孔滤膜过滤器、注射器、微孔滤膜过滤器、注射器、微孔滤膜过滤器、0.22um0.22um滤膜、无菌试管、滤膜、无菌试管、滤膜、无菌试管、滤膜、无菌试管、镊子、玻璃刮棒镊子、玻璃刮棒镊子、玻璃刮棒镊子、玻璃刮棒n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤l l组装滤膜、灭菌组装滤膜、灭菌组装滤膜、
23、灭菌组装滤膜、灭菌l l连接连接连接连接l l压滤压滤压滤压滤l l无菌检查无菌检查无菌检查无菌检查l l清洗清洗清洗清洗n n试验报告试验报告试验报告试验报告l l记录无菌检查结果记录无菌检查结果记录无菌检查结果记录无菌检查结果第三十二页，讲稿共八十八页哦实验二实验二 微生物的染色与形态结构的微生物的染色与形态结构的观察观察n n主要内容主要内容l l细菌的简单染色法细菌的简单染色法细菌的简单染色法细菌的简单染色法l l革兰氏染色法革兰氏染色法革兰氏染色法革兰氏染色法l l细菌的芽孢染色法细菌的芽孢染色法细菌的芽孢染色法细菌的芽孢染色法l l荚膜染色法荚膜染色法第三十三页，讲稿共八十八页哦细
24、菌的简单染色法细菌的简单染色法n n一、目的要求：一、目的要求：一、目的要求：一、目的要求：l l.学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简学习微生物的涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。单染色法。单染色法。单染色法。l l.初步认识细菌的形态特征。初步认识细菌的形态特征。初步认识细菌的形态特征。初步认识细菌的形态特征。l l 3.3.巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。巩固显微镜（油镜）的使用
25、方法和无菌操作技术。n n二、基本原理二、基本原理二、基本原理二、基本原理 l l常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等常用碱性染料：美蓝、结晶紫、碱性复红等l l在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负电荷，在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负电荷，在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负电荷，在中性、碱性、弱酸性环境中细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料电离时其分子的染色部分带正电荷，染料而碱性染料电离时其分子的染色部分带正电荷，染料而碱性染料电离时其分子的染色部分带正电荷，染料而碱性染料电离时其分子的染色部
26、分带正电荷，染料易使细菌着色。易使细菌着色。易使细菌着色。易使细菌着色。第三十四页，讲稿共八十八页哦细菌的简单染色法细菌的简单染色法n n器材器材器材器材l l菌种：枯草芽孢杆菌菌种：枯草芽孢杆菌菌种：枯草芽孢杆菌菌种：枯草芽孢杆菌12-18h12-18h营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物l l染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液染色剂：吕氏碱性美蓝染液、齐氏石炭酸复红染液n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤l l涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操
27、作挑少许菌涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操作挑少许菌涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操作挑少许菌涂片：载玻片中央滴加一滴生理盐水，接种环无菌操作挑少许菌苔涂成薄膜苔涂成薄膜苔涂成薄膜苔涂成薄膜l l干燥：室温自然干燥干燥：室温自然干燥干燥：室温自然干燥干燥：室温自然干燥l l固定：热固定固定：热固定固定：热固定固定：热固定 载玻片涂面朝上通过火焰载玻片涂面朝上通过火焰载玻片涂面朝上通过火焰载玻片涂面朝上通过火焰2-32-3次次次次l l染色：载玻片平放，滴加染液覆盖薄膜，染约染色：载玻片平放，滴加染液覆盖薄膜，染约染色：载玻片平放，滴加染液覆盖薄膜，染约染色：载玻片平
28、放，滴加染液覆盖薄膜，染约1min1minl l水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液水洗：用自来水轻轻的从玻片一端直接冲去染液l l干燥镜检干燥镜检干燥镜检干燥镜检n n试验报告试验报告试验报告试验报告l l根据观察结果绘出细菌形态图根据观察结果绘出细菌形态图根据观察结果绘出细菌形态图根据观察结果绘出细菌形态图第三十五页，讲稿共八十八页哦革兰氏染色法革兰氏染色法n n一、目的要求：一、目的要求：一、目的要求：一、目的要求：l l.学习并初步掌握革兰氏染色法。学习并初步掌握革兰氏染色法。学习并初步掌握革兰氏
29、染色法。学习并初步掌握革兰氏染色法。l l.了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要了解革兰氏染色的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。性。性。性。n n二、基本原理二、基本原理二、基本原理二、基本原理 l l18841884年丹麦病理学家年丹麦病理学家年丹麦病理学家年丹麦病理学家Christain GramChristain Gram创立。基本组成为创立。基本组成为创立。基本组成为创立。基本组成为结晶紫、碘液、酒精、复红。结晶紫、碘液、酒精、复红。结晶紫、碘液、酒精、复红。结晶紫、碘液、酒精、复红
30、。l l细胞保持蓝紫色为革兰氏阳性菌，成红色为革兰氏阴性菌。细胞保持蓝紫色为革兰氏阳性菌，成红色为革兰氏阴性菌。细胞保持蓝紫色为革兰氏阳性菌，成红色为革兰氏阴性菌。细胞保持蓝紫色为革兰氏阳性菌，成红色为革兰氏阴性菌。l l染色性与细菌细胞壁的组成和结构有关。染色性与细菌细胞壁的组成和结构有关。染色性与细菌细胞壁的组成和结构有关。染色性与细菌细胞壁的组成和结构有关。第三十六页，讲稿共八十八页哦革兰氏染色法革兰氏染色法n n器材器材器材器材l l菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌约菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌约菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌约菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌约24h24h营养琼脂斜面培
31、养营养琼脂斜面培养营养琼脂斜面培养营养琼脂斜面培养物、蜡样芽孢杆菌物、蜡样芽孢杆菌物、蜡样芽孢杆菌物、蜡样芽孢杆菌12-20h12-20h营养琼脂斜面培养物。营养琼脂斜面培养物。营养琼脂斜面培养物。营养琼脂斜面培养物。l l染色剂：革兰氏染液染色剂：革兰氏染液染色剂：革兰氏染液染色剂：革兰氏染液n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤l l制片：常规涂片、干燥、固定制片：常规涂片、干燥、固定制片：常规涂片、干燥、固定制片：常规涂片、干燥、固定l l初染：滴加结晶紫染色初染：滴加结晶紫染色初染：滴加结晶紫染色初染：滴加结晶紫染色1-2min1-2min，水洗，水洗，水洗，水洗l l媒染：用碘液冲去
32、残水，加碘液覆盖染媒染：用碘液冲去残水，加碘液覆盖染媒染：用碘液冲去残水，加碘液覆盖染媒染：用碘液冲去残水，加碘液覆盖染1min1min，水洗，水洗，水洗，水洗l l脱色：滤纸吸去残水，脱色：滤纸吸去残水，脱色：滤纸吸去残水，脱色：滤纸吸去残水，95%95%乙醇脱色，水洗乙醇脱色，水洗乙醇脱色，水洗乙醇脱色，水洗l l复染：用复红液染复染：用复红液染复染：用复红液染复染：用复红液染2min2minl l干燥镜检干燥镜检干燥镜检干燥镜检n n试验报告试验报告试验报告试验报告l l根据观察结果说明细菌的形状、颜色、及革兰氏染色反应根据观察结果说明细菌的形状、颜色、及革兰氏染色反应根据观察结果说明细
33、菌的形状、颜色、及革兰氏染色反应根据观察结果说明细菌的形状、颜色、及革兰氏染色反应第三十七页，讲稿共八十八页哦细菌的芽孢染色法细菌的芽孢染色法n n一、目的要求：一、目的要求：一、目的要求：一、目的要求：l l.学习并掌握芽孢染色法。学习并掌握芽孢染色法。学习并掌握芽孢染色法。学习并掌握芽孢染色法。l l.初步了解芽孢杆菌的形态。初步了解芽孢杆菌的形态。初步了解芽孢杆菌的形态。初步了解芽孢杆菌的形态。n n二、基本原理二、基本原理二、基本原理二、基本原理 l l芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的
34、休眠芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，其特征是鉴定细菌的依据之一。体，其特征是鉴定细菌的依据之一。体，其特征是鉴定细菌的依据之一。体，其特征是鉴定细菌的依据之一。l l用着色能力强的染液（如：孔雀绿、石炭酸复红）用着色能力强的染液（如：孔雀绿、石炭酸复红）用着色能力强的染液（如：孔雀绿、石炭酸复红）用着色能力强的染液（如：孔雀绿、石炭酸复红）在加热情况下透过菌体进入芽孢使其着色，通过水在加热情况下透过菌体进入芽孢使其着色，通过水在加热情况下透过菌体进入芽孢使其着色，通过水在加热情况下透过菌体进入芽孢使其着色，通过水洗菌体的颜色被洗掉，芽孢的染色则被保留，从而洗菌体的颜色被洗掉，
35、芽孢的染色则被保留，从而洗菌体的颜色被洗掉，芽孢的染色则被保留，从而洗菌体的颜色被洗掉，芽孢的染色则被保留，从而区分菌体与芽孢。区分菌体与芽孢。区分菌体与芽孢。区分菌体与芽孢。第三十八页，讲稿共八十八页哦细菌的芽孢染色法细菌的芽孢染色法n n器材器材器材器材l l菌种：蜡样芽孢杆菌菌种：蜡样芽孢杆菌菌种：蜡样芽孢杆菌菌种：蜡样芽孢杆菌2d2d营养琼脂斜面培养物、球形营养琼脂斜面培养物、球形营养琼脂斜面培养物、球形营养琼脂斜面培养物、球形芽孢杆菌芽孢杆菌芽孢杆菌芽孢杆菌1-2d1-2d营养琼脂斜面培养物。营养琼脂斜面培养物。营养琼脂斜面培养物。营养琼脂斜面培养物。l l染色剂：染色剂：染色剂：染
36、色剂：5%5%孔雀绿水溶液、孔雀绿水溶液、孔雀绿水溶液、孔雀绿水溶液、0.5%0.5%番红水溶液番红水溶液番红水溶液番红水溶液n n操作步骤（操作步骤（操作步骤（操作步骤（Schaeffer-FultonSchaeffer-Fulton氏染色法）氏染色法）氏染色法）氏染色法）l l制片：常规涂片、干燥、固定制片：常规涂片、干燥、固定制片：常规涂片、干燥、固定制片：常规涂片、干燥、固定l l染色：滴加数滴孔雀绿染液，火焰上加热至染料冒蒸汽时染色：滴加数滴孔雀绿染液，火焰上加热至染料冒蒸汽时染色：滴加数滴孔雀绿染液，火焰上加热至染料冒蒸汽时染色：滴加数滴孔雀绿染液，火焰上加热至染料冒蒸汽时开始记时
37、染开始记时染开始记时染开始记时染5min5min，水洗，水洗，水洗，水洗l l复染：用番红液复染复染：用番红液复染复染：用番红液复染复染：用番红液复染2min 2min，水洗，水洗，水洗，水洗l l干燥镜检干燥镜检干燥镜检干燥镜检n n试验报告试验报告试验报告试验报告l l根据观察结果绘出芽孢杆菌的形态特征根据观察结果绘出芽孢杆菌的形态特征根据观察结果绘出芽孢杆菌的形态特征根据观察结果绘出芽孢杆菌的形态特征第三十九页，讲稿共八十八页哦荚膜染色法荚膜染色法n n一、目的要求：一、目的要求：l l学习并掌握荚膜染色法。学习并掌握荚膜染色法。学习并掌握荚膜染色法。学习并掌握荚膜染色法。n n二、基本
38、原理二、基本原理二、基本原理二、基本原理 l l荚膜是包围在细菌细胞外的一层黏液状或胶荚膜是包围在细菌细胞外的一层黏液状或胶荚膜是包围在细菌细胞外的一层黏液状或胶荚膜是包围在细菌细胞外的一层黏液状或胶质状物质，主要成分为多糖、糖蛋白或多肽。质状物质，主要成分为多糖、糖蛋白或多肽。质状物质，主要成分为多糖、糖蛋白或多肽。质状物质，主要成分为多糖、糖蛋白或多肽。l l荚膜与染液亲和力低、不易着色，且可溶于水，荚膜与染液亲和力低、不易着色，且可溶于水，荚膜与染液亲和力低、不易着色，且可溶于水，荚膜与染液亲和力低、不易着色，且可溶于水，通过水洗可在菌体的周围形成一透明圈。通过水洗可在菌体的周围形成一透
39、明圈。通过水洗可在菌体的周围形成一透明圈。通过水洗可在菌体的周围形成一透明圈。第四十页，讲稿共八十八页哦荚膜染色法荚膜染色法n n器材器材器材器材l l菌种：褐球固氮菌约菌种：褐球固氮菌约菌种：褐球固氮菌约菌种：褐球固氮菌约2d2d无氮琼脂斜面培养物。无氮琼脂斜面培养物。无氮琼脂斜面培养物。无氮琼脂斜面培养物。l l染色剂：绘图墨水、染色剂：绘图墨水、染色剂：绘图墨水、染色剂：绘图墨水、1%1%甲基紫水溶液、甲基紫水溶液、甲基紫水溶液、甲基紫水溶液、1%1%结晶紫水结晶紫水结晶紫水结晶紫水溶液、溶液、溶液、溶液、6%6%葡萄糖水溶液、葡萄糖水溶液、葡萄糖水溶液、葡萄糖水溶液、20%20%硫酸铜
40、水溶液硫酸铜水溶液硫酸铜水溶液硫酸铜水溶液n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤n n湿墨水法湿墨水法湿墨水法湿墨水法l l制备菌和墨水混合液制备菌和墨水混合液制备菌和墨水混合液制备菌和墨水混合液l l加盖玻片镜检（低、高倍镜）加盖玻片镜检（低、高倍镜）加盖玻片镜检（低、高倍镜）加盖玻片镜检（低、高倍镜）l l结果：灰色背景下在菌体周围呈现明亮的透明圈既结果：灰色背景下在菌体周围呈现明亮的透明圈既结果：灰色背景下在菌体周围呈现明亮的透明圈既结果：灰色背景下在菌体周围呈现明亮的透明圈既为荚膜为荚膜为荚膜为荚膜第四十一页，讲稿共八十八页哦荚膜染色法荚膜染色法n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤n
41、 n干墨水法干墨水法干墨水法干墨水法l l制备混合液：制备混合液：制备混合液：制备混合液：6%6%葡萄糖液、菌体、墨水葡萄糖液、菌体、墨水葡萄糖液、菌体、墨水葡萄糖液、菌体、墨水l l制片：涂片制片：涂片制片：涂片制片：涂片干燥干燥干燥干燥热固定热固定热固定热固定l l染色：染色：染色：染色：1%1%甲基紫染甲基紫染甲基紫染甲基紫染1-2min,1-2min,水洗水洗水洗水洗l l镜检（低、高倍镜）镜检（低、高倍镜）镜检（低、高倍镜）镜检（低、高倍镜）l l结果：灰色背景，菌体紫色，菌体周围的结果：灰色背景，菌体紫色，菌体周围的结果：灰色背景，菌体紫色，菌体周围的结果：灰色背景，菌体紫色，菌体
42、周围的清晰透明圈既为荚膜清晰透明圈既为荚膜清晰透明圈既为荚膜清晰透明圈既为荚膜第四十二页，讲稿共八十八页哦荚膜染色法荚膜染色法n n操作步骤操作步骤n nAnthony 氏法氏法l l制片：涂片制片：涂片制片：涂片制片：涂片自然干燥自然干燥自然干燥自然干燥l l染色：染色：染色：染色：1%1%结晶紫染结晶紫染结晶紫染结晶紫染2min2minl l脱色：用脱色：用脱色：用脱色：用20%硫酸铜水溶液冲洗硫酸铜水溶液冲洗硫酸铜水溶液冲洗硫酸铜水溶液冲洗l l镜检（油镜）镜检（油镜）镜检（油镜）镜检（油镜）l l结果：菌体深紫色，菌体周围的荚膜呈结果：菌体深紫色，菌体周围的荚膜呈结果：菌体深紫色，菌体
43、周围的荚膜呈结果：菌体深紫色，菌体周围的荚膜呈淡紫色淡紫色淡紫色淡紫色第四十三页，讲稿共八十八页哦实验三实验三 细菌形态观察细菌形态观察n n放线菌形态的观察放线菌形态的观察n n霉菌形态的观察霉菌形态的观察第四十四页，讲稿共八十八页哦放线菌形态的观察放线菌形态的观察n n一、目的要求：一、目的要求：一、目的要求：一、目的要求：l l.学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。l l.初步了解放线菌的形态特征。初步了解放线菌的形态特征。初步了解放线菌的形态特征。初步了解放线菌的形态特征。n n
44、二、基本原理二、基本原理二、基本原理二、基本原理 l l放线菌是能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌，放线菌是能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌，放线菌是能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌，放线菌是能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌，在培养基中生长的称基内菌丝；向空气中生长的称气生菌在培养基中生长的称基内菌丝；向空气中生长的称气生菌在培养基中生长的称基内菌丝；向空气中生长的称气生菌在培养基中生长的称基内菌丝；向空气中生长的称气生菌丝丝丝丝l l能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是鉴能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是鉴能否产生菌丝体及由菌丝
45、体分化产生的各种形态特征是鉴能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是鉴定放线菌的重要依据。定放线菌的重要依据。定放线菌的重要依据。定放线菌的重要依据。第四十五页，讲稿共八十八页哦放线菌形态的观察放线菌形态的观察n n器材器材器材器材l l菌种：细黄链霉菌菌种：细黄链霉菌菌种：细黄链霉菌菌种：细黄链霉菌l l培养基：灭菌的高氏号琼脂培养基：灭菌的高氏号琼脂培养基：灭菌的高氏号琼脂培养基：灭菌的高氏号琼脂l l染色剂：石炭酸复红染液染色剂：石炭酸复红染液染色剂：石炭酸复红染液染色剂：石炭酸复红染液n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤n n扦片法扦片法扦片法扦片法l l倒平板倒平板倒平板倒
46、平板 灭菌的高氏号琼脂灭菌的高氏号琼脂灭菌的高氏号琼脂灭菌的高氏号琼脂l l接种接种接种接种 l l扦片扦片扦片扦片l l培养培养培养培养l l盖玻片镜检（低、高倍镜）盖玻片镜检（低、高倍镜）盖玻片镜检（低、高倍镜）盖玻片镜检（低、高倍镜）l l结果：结果：结果：结果：第四十六页，讲稿共八十八页哦放线菌形态的观察放线菌形态的观察n n操作步骤操作步骤n n玻璃纸法玻璃纸法l l倒平板倒平板 灭菌的高氏号琼脂灭菌的高氏号琼脂l l接种接种接种接种 l l扦片扦片扦片扦片l l培养培养l l盖玻片镜检（低、高倍镜）盖玻片镜检（低、高倍镜）盖玻片镜检（低、高倍镜）盖玻片镜检（低、高倍镜）l l结果：
47、结果：结果：结果：第四十七页，讲稿共八十八页哦放线菌形态的观察放线菌形态的观察n n操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤n n印片法印片法印片法印片法l l倒平板倒平板倒平板倒平板 灭菌的高氏号琼脂灭菌的高氏号琼脂灭菌的高氏号琼脂灭菌的高氏号琼脂l l接种培养接种培养接种培养接种培养l l印片印片印片印片l l染色染色染色染色 石炭酸复红染液石炭酸复红染液石炭酸复红染液石炭酸复红染液1min1min，水洗，水洗，水洗，水洗l l镜检（油镜）镜检（油镜）镜检（油镜）镜检（油镜）l l结果：结果：结果：结果：第四十八页，讲稿共八十八页哦霉菌形态的观察霉菌形态的观察n n一、目的要求：一、目的要求：l
48、l.学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。学习并掌握观察霉菌形态的基本方法。l l.了解四类常见霉菌的基本形态特征。了解四类常见霉菌的基本形态特征。了解四类常见霉菌的基本形态特征。了解四类常见霉菌的基本形态特征。n n二、基本原理二、基本原理二、基本原理二、基本原理 l l霉菌能形成复什分枝的菌，有基内菌丝和气霉菌能形成复什分枝的菌，有基内菌丝和气霉菌能形成复什分枝的菌，有基内菌丝和气霉菌能形成复什分枝的菌，有基内菌丝和气生菌丝，后者生长到一定程度分化产生繁殖生菌丝，后者生长到一定程度分化产生繁殖生菌丝，后者生长到一定程度分化产生
49、繁殖生菌丝，后者生长到一定程度分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子菌丝，由繁殖菌丝产生孢子菌丝，由繁殖菌丝产生孢子菌丝，由繁殖菌丝产生孢子l l菌丝体或孢子的形态特征是鉴定霉菌的重菌丝体或孢子的形态特征是鉴定霉菌的重菌丝体或孢子的形态特征是鉴定霉菌的重菌丝体或孢子的形态特征是鉴定霉菌的重要依据。要依据。要依据。要依据。第四十九页，讲稿共八十八页哦霉菌形态的观察霉菌形态的观察n n器材器材l l菌种：曲霉、青霉培养菌种：曲霉、青霉培养菌种：曲霉、青霉培养菌种：曲霉、青霉培养2-5d2-5d的马铃薯琼脂平的马铃薯琼脂平的马铃薯琼脂平的马铃薯琼脂平板培养物板培养物板培养物板培养物l l培养基：土豆琼
50、脂培养基：土豆琼脂培养基：土豆琼脂培养基：土豆琼脂l l染色剂：乳酸石炭酸棉蓝染液染色剂：乳酸石炭酸棉蓝染液染色剂：乳酸石炭酸棉蓝染液染色剂：乳酸石炭酸棉蓝染液l l仪器和其他用具：无菌吸管、平皿、载玻片、盖仪器和其他用具：无菌吸管、平皿、载玻片、盖仪器和其他用具：无菌吸管、平皿、载玻片、盖仪器和其他用具：无菌吸管、平皿、载玻片、盖玻片、玻片、玻片、玻片、U U形玻棒、解剖针、解剖刀、镊子、形玻棒、解剖针、解剖刀、镊子、形玻棒、解剖针、解剖刀、镊子、形玻棒、解剖针、解剖刀、镊子、5050乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、2020甘油等甘油等甘油等甘油等第五十页，讲稿共八十八页哦霉菌形态的观察霉菌形态的观