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1、关于固定化酶与固定化细胞(2)1第一页，讲稿共九十四页哦2本章讲授本章讲授固定化生物催化剂的概念以及吸附法、包固定化生物催化剂的概念以及吸附法、包埋法、共价结合法、无载体固定化酶的基埋法、共价结合法、无载体固定化酶的基本技术和原理；本技术和原理；细胞固定化的基本技术和原理；细胞固定化的基本技术和原理；简要介绍固定化酶基本性质的影响及辅因简要介绍固定化酶基本性质的影响及辅因子的固定化方法和辅酶的再生体系。子的固定化方法和辅酶的再生体系。第二页，讲稿共九十四页哦3第三页，讲稿共九十四页哦41.1.酶是蛋白质，稳定性差（热、酸碱、有机溶酶是蛋白质，稳定性差（热、酸碱、有机溶剂对其有影响）。剂对其有影
2、响）。2.2.不能回收，使用成本高。不能回收，使用成本高。3.3.酶在游离体系中更容易自水解酶在游离体系中更容易自水解4.4.分离纯化困难，也使产物中混杂酶蛋白分离纯化困难，也使产物中混杂酶蛋白 游离酶的缺点：游离酶的缺点：第四页，讲稿共九十四页哦5固定化酶固定化酶（定义）：用物理或化学手段定位在限定的（定义）：用物理或化学手段定位在限定的空间区域，并使其保持空间区域，并使其保持催化活性催化活性，可重复利用的酶，可重复利用的酶。（19711971年在美国召开的第一届国际酶工程会议）年在美国召开的第一届国际酶工程会议）固定化细胞固定化细胞（定义）：将具有一定（定义）：将具有一定生理功能生理功能的
3、生物细胞的生物细胞（如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等），（如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等），用一定的方法将其固定，用一定的方法将其固定，作为固体生物催化剂而加以利用的一门技术。作为固体生物催化剂而加以利用的一门技术。固定化细胞意义固定化细胞意义：用完整的细胞作为生物催化剂，以：用完整的细胞作为生物催化剂，以充分有效地利用生物细胞内的特定充分有效地利用生物细胞内的特定酶或多酶酶或多酶系统。系统。第五页，讲稿共九十四页哦6优点优点省去对酶的提取过程，使酶的损失和生产省去对酶的提取过程，使酶的损失和生产成本成本降到最低程度；降到最低程度；可以利用细胞的可以利用细胞的多酶系统多酶系统直接生产有价
4、值直接生产有价值的产物。的产物。第六页，讲稿共九十四页哦7第一节第一节 酶和细胞的固定化酶和细胞的固定化一、固定化酶和细胞的定义及特点一、固定化酶和细胞的定义及特点二、固定化方法二、固定化方法三三 细胞的固定化方法细胞的固定化方法四四 原生质体的固定化方法原生质体的固定化方法第七页，讲稿共九十四页哦8一、固定化酶和细胞的定义及特点一、固定化酶和细胞的定义及特点 1.1.固定化酶固定化酶(immobilized enzyme)(immobilized enzyme)通过化学或物理的手段将酶定位于限定的通过化学或物理的手段将酶定位于限定的空间区域内，使其保持活性并可反复利用。空间区域内，使其保持活
5、性并可反复利用。第八页，讲稿共九十四页哦9什么是固定化酶？什么是固定化酶？水溶性酶水溶性酶水不溶性载体水不溶性载体水不溶性酶水不溶性酶（固定化酶）（固定化酶）固定化技术固定化技术第九页，讲稿共九十四页哦10酶固定化方法酶固定化方法要求要求不破坏不破坏酶活性中心的构象酶活性中心的构象：酶的固定化不能破坏酶活性：酶的固定化不能破坏酶活性中心的构象，尽量防止活性部位的氨基酸残基受到影响；中心的构象，尽量防止活性部位的氨基酸残基受到影响；载体要求载体要求：a.a.固定化的载体应与酶结合较为牢固。固定化的载体应与酶结合较为牢固。B.B.载体不能与底物、产物等发生化学反应。载体不能与底物、产物等发生化学反
6、应。C.C.载体必须有一定的机械强度，防止因机械搅拌而破碎。载体必须有一定的机械强度，防止因机械搅拌而破碎。位阻位阻应该较小：尽可能不妨碍酶与底物的接近。应该较小：尽可能不妨碍酶与底物的接近。成本成本低：酶固定化的成本要尽可能的低。低：酶固定化的成本要尽可能的低。第十页，讲稿共九十四页哦11优点优点：(1)(1)可提高稳定性。可提高稳定性。(2)(2)能回收，易与产物分离，可反复使用。能回收，易与产物分离，可反复使用。缺点缺点：(1)(1)存在扩散限制。适于催化小分子物质。存在扩散限制。适于催化小分子物质。(2)(2)酶活性下降。酶活性下降。第十一页，讲稿共九十四页哦12 2.2.固定化细胞固
7、定化细胞（immobilized cellimmobilized cell）固定在载体上并在一定空间范围内进行生命固定在载体上并在一定空间范围内进行生命活动（生长、繁殖、新陈代谢）的细胞。活动（生长、繁殖、新陈代谢）的细胞。第十二页，讲稿共九十四页哦13优越性优越性：(1)(1)降低成本，省去酶的分离纯化工作降低成本，省去酶的分离纯化工作;(2)(2)既可作为单一酶，也可作为复合酶系既可作为单一酶，也可作为复合酶系 完成部分代谢过程。完成部分代谢过程。局限性局限性：(1)(1)细胞内多种酶的存在，会形成不需要的副细胞内多种酶的存在，会形成不需要的副 产物。产物。(2)(2)细胞膜、细胞壁和载体
8、都存在着扩散限制细胞膜、细胞壁和载体都存在着扩散限制 作用。作用。第十三页，讲稿共九十四页哦143.3.固定化原生质体固定化原生质体 意义意义：(1)(1)固定化原生质体去除了细胞壁的扩散障碍，固定化原生质体去除了细胞壁的扩散障碍，有利于氧的传递，营养成分的吸收和胞内产物有利于氧的传递，营养成分的吸收和胞内产物的分泌。的分泌。(2)(2)原生质体不稳定，容易破裂，固定化后，由原生质体不稳定，容易破裂，固定化后，由于载体的保护作用，稳定性提高于载体的保护作用，稳定性提高。第十四页，讲稿共九十四页哦15 二、固定化方法二、固定化方法固定化方法固定化方法（一）酶的固定化方法（一）酶的固定化方法吸附法
9、吸附法共价偶联法共价偶联法交联法交联法包埋法包埋法网格型网格型微囊型微囊型离子交离子交换吸附换吸附物理物理吸附法吸附法第十五页，讲稿共九十四页哦16依据带电的酶或细胞和载体之间的静电作用，使依据带电的酶或细胞和载体之间的静电作用，使酶吸附于惰性固体的表面或离子交换剂上。酶吸附于惰性固体的表面或离子交换剂上。1.1.吸附法（吸附法（adsorptionadsorption）第十六页，讲稿共九十四页哦17根据吸附剂的特点分根据吸附剂的特点分:1 1）物理吸附法（）物理吸附法（physical adsortionphysical adsortion）作用力：作用力：氢键、疏水键氢键、疏水键常用载体常
10、用载体：氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石、纤维素等。硅胶、羟基磷灰石、纤维素等。2 2）离子结合法（）离子结合法（ion bindingion binding）作用力作用力：离子键离子键常用载体：常用载体：DEAE-DEAE-纤维素、纤维素、DEAE-DEAE-葡聚糖凝胶、葡聚糖凝胶、CM-CM-纤维素纤维素第十七页，讲稿共九十四页哦18优点：优点：条件温和，操作简便，条件温和，操作简便，酶活力损失少。酶活力损失少。缺点：缺点：结合力弱，易解吸附结合力弱，易解吸附。第十八页，讲稿共九十四页哦19 借助共价借助共价键将酶的活性键将酶的活性非
11、必需侧链基非必需侧链基团和载体的功团和载体的功能基团进行偶能基团进行偶联。联。2.2.共价偶联法共价偶联法（covalent binding or covalent binding or covalent couplingcovalent coupling）第十九页，讲稿共九十四页哦20 1 1）载体：亲水载体优于疏水载体）载体：亲水载体优于疏水载体如如:天然高分子衍生物天然高分子衍生物:纤维素纤维素 葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 亲和性好，机械性能差亲和性好，机械性能差 琼脂糖琼脂糖 合成聚合物：合成聚合物：聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺 聚苯乙烯聚苯乙烯 机械性能好，但有疏水结构机械性能好，但有疏水结构 尼
12、龙尼龙第二十页，讲稿共九十四页哦212 2）偶联方法：）偶联方法：偶联成功与否取决于：偶联成功与否取决于：载体：载体：功能基团：芳香氨基，羧基，羧功能基团：芳香氨基，羧基，羧甲基等。甲基等。酶分子酶分子:侧链非必需基团：羧基，巯基，侧链非必需基团：羧基，巯基，羟基，酚基，咪唑基。羟基，酚基，咪唑基。第二十一页，讲稿共九十四页哦22常用的偶联反应有：重氮化法、叠氮常用的偶联反应有：重氮化法、叠氮法、溴化氰法、烷基化法等。法、溴化氰法、烷基化法等。第二十二页，讲稿共九十四页哦23优点：优点：酶与载体结合牢固，不会轻易脱落，酶与载体结合牢固，不会轻易脱落，可连续使用。可连续使用。缺点：缺点：反应条件
13、较激烈，易影响酶的空反应条件较激烈，易影响酶的空间构象而影响酶的催化活性。间构象而影响酶的催化活性。第二十三页，讲稿共九十四页哦243.3.交联法交联法（crosslinkingcrosslinking）借助双功能试剂使酶分子之间发生交借助双功能试剂使酶分子之间发生交联的固定化方法。联的固定化方法。双功能试剂双功能试剂：常用的是常用的是戊二醛戊二醛 O OH C CH2 CH2 CH2 C H第二十四页，讲稿共九十四页哦25 戊二醛有两个戊二醛有两个醛基，均可与酶或醛基，均可与酶或蛋白质的游离氨基蛋白质的游离氨基反应反应,使酶蛋白交使酶蛋白交联。联。此法与共价偶联法利用的均是共价键，此法与共价
14、偶联法利用的均是共价键，不不同之处：同之处：交联法交联法不使用载体不使用载体。第二十五页，讲稿共九十四页哦26 交联反应既能发生在分子间，也可发生交联反应既能发生在分子间，也可发生在分子内。在分子内。酶酶浓浓度度低低时时，交交联联发发生生在在分分子子内内，酶酶仍仍保保持溶解状态。持溶解状态。酶酶浓浓度度高高时时，交交联联发发生生在在分分子子间间，酶酶变变为不溶态。为不溶态。第二十六页，讲稿共九十四页哦27缺点：缺点：(1)(1)反应条件激烈，酶分子的多个基团被反应条件激烈，酶分子的多个基团被交联，酶活力损失大。交联，酶活力损失大。(2)(2)制备的固定化酶颗粒较小，给使用带制备的固定化酶颗粒较
15、小，给使用带来不便。来不便。第二十七页，讲稿共九十四页哦284.4.包埋法包埋法（entrapmententrapment）将酶用物理的方法包将酶用物理的方法包埋在各种载体（高聚物）埋在各种载体（高聚物）内。分为：内。分为：网格型网格型：将酶包埋在高分子将酶包埋在高分子凝胶细微网格中。凝胶细微网格中。微囊型微囊型：将酶包埋在高分将酶包埋在高分子半透膜中。子半透膜中。第二十八页，讲稿共九十四页哦291）网格型包埋法网格型包埋法（gel(lattic)entrapmentgel(lattic)entrapment）又称凝胶包埋法又称凝胶包埋法凝胶凝胶包埋条件包埋条件酶活性酶活性强度强度天然凝胶天然
16、凝胶琼脂、海藻酸钙、琼脂、海藻酸钙、角叉菜胶、明胶角叉菜胶、明胶温和温和不变不变差差合成凝胶合成凝胶聚丙烯酰胺、光聚丙烯酰胺、光交联树脂交联树脂聚合反应聚合反应部分失活部分失活 高高使用的多孔载体及其特点使用的多孔载体及其特点第二十九页，讲稿共九十四页哦30海藻酸钙凝胶海藻酸钙凝胶包埋法：包埋法：滴至滴至海藻酸钠溶液海藻酸钠溶液E(or cell)CaCl2 溶液中溶液中 IE(or IC)角叉菜胶角叉菜胶包埋法：包埋法：滴至滴至角叉菜胶角叉菜胶E(or cell)KCl 溶液中溶液中 IE(or IC)聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶包埋法：包埋法：APAcr+Bis+E(or cell)IE(
17、or IC)TEMED第三十页，讲稿共九十四页哦312 2）微囊型包埋法）微囊型包埋法（microencapsulationmicroencapsulation）又称又称半透膜半透膜包埋法包埋法 将一定量酶液包在半透性的高分子微孔将一定量酶液包在半透性的高分子微孔膜内膜内 。半透膜半透膜：直径几十微米到几百微米，厚：直径几十微米到几百微米，厚约约25nm25nm。半透膜半透膜孔径孔径 80%80%活性。活性。第五十一页，讲稿共九十四页哦52 （三）酶的最适温度三）酶的最适温度 最适温度与酶稳定性有关。最适温度与酶稳定性有关。多多数数酶酶固固定定化化后后热热稳稳定定性性上上升升，最最适适温温度度
18、也上升（有例外）。也上升（有例外）。（四）酶的最适（四）酶的最适pHpH 带负电荷载体带负电荷载体 ：最适：最适pH pH 向碱性偏移。向碱性偏移。带正电荷载体带正电荷载体 ：最适：最适pH pH 向酸性偏移。向酸性偏移。第五十二页，讲稿共九十四页哦53第五十三页，讲稿共九十四页哦54 固定化酶的表观米氏常数固定化酶的表观米氏常数K Km m随载体的带电性能随载体的带电性能变化。变化。固定化载体与底物电荷相反固定化载体与底物电荷相反,固定化酶的表观固定化酶的表观K Km m值降低。值降低。固定化载体与底物电荷相同固定化载体与底物电荷相同,固定化酶的表观固定化酶的表观K Km m值显著增加。值显
19、著增加。（五）酶的动力学特征（五）酶的动力学特征第五十四页，讲稿共九十四页哦55 与自然酶基本相同。但大分子底物难与自然酶基本相同。但大分子底物难于接近酶分子，导致酶的专一性发生改变。于接近酶分子，导致酶的专一性发生改变。（六）酶的作用专一性（六）酶的作用专一性 第五十五页，讲稿共九十四页哦56 与固定化酶相比，固定化细胞的情况与固定化酶相比，固定化细胞的情况比较复杂。比较复杂。（1 1）有活性升高的现象。）有活性升高的现象。（2 2）稳定性的增加）稳定性的增加 。（3 3）最适温度和最适）最适温度和最适pHpH常保持不变。常保持不变。二、固定化细胞的性质二、固定化细胞的性质 第五十六页，讲稿
20、共九十四页哦57 (一一)酶酶(细胞细胞)的活力的活力 固定化酶通常呈颗粒状，一般用于测定自然酶固定化酶通常呈颗粒状，一般用于测定自然酶活力的方法改进后才能用于测定固定化酶。活力的方法改进后才能用于测定固定化酶。(二二)蛋白总量蛋白总量 1.1.双辛可宁酸法双辛可宁酸法(BCA(BCA法法)2.2.考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法 三、固定化酶（细胞）的评价指标三、固定化酶（细胞）的评价指标 第五十七页，讲稿共九十四页哦58 (三三)偶联率及相对活力偶联率及相对活力 偶联率偶联率=(=(加入蛋白活力一上清液蛋白活力加入蛋白活力一上清液蛋白活力)/)/加加入蛋白活力入蛋白活力100%100%活力回收活力
21、回收=固定化酶总活力固定化酶总活力/加入酶的总活力加入酶的总活力100%100%相对活力相对活力=固定化酶总活力固定化酶总活力/(/(加入酶的总活力加入酶的总活力-上清液中未偶联酶活力上清液中未偶联酶活力)100%)100%第五十八页，讲稿共九十四页哦59 (四四)半衰期半衰期 在连续测定条件下，固定化酶在连续测定条件下，固定化酶(细胞细胞)的活的活力下降为最初活力一半所经历的连续工作时间，力下降为最初活力一半所经历的连续工作时间，以以t t1/21/2表示。表示。是衡量稳定性的一项重要指标。是衡量稳定性的一项重要指标。第五十九页，讲稿共九十四页哦60不同固定化方法的比较不同固定化方法的比较c
22、arriersRecovery of enzyme activity(%)Agar 54.0po1yacrvlamldel5.24Gelatin40.77carragheenan69.13Glutaraldehyde0第六十页，讲稿共九十四页哦61第三节第三节 固定化酶与固定化细胞的应用固定化酶与固定化细胞的应用一、在工业生产上的应用一、在工业生产上的应用二、固定化酶在医学上的应用二、固定化酶在医学上的应用三、在分析检测中的应用三、在分析检测中的应用第六十一页，讲稿共九十四页哦62乙酰乙酰-DL Ala L Ala+乙酸乙酸乙酰乙酰-D Ala 一、在工业生产上的应用一、在工业生产上的应用 1
23、.氨基酰化酶（氨基酰化酶（Aminoacylase）世界上第一种工业化生产的固定化酶世界上第一种工业化生产的固定化酶第六十二页，讲稿共九十四页哦63泵泵储罐反应产物离心机离心机消消旋旋反反应应器器固定化固定化酶柱子酶柱子晶体 L-AlaL-AlaA-D-AlaA-L-AlaA-D-Ala第六十三页，讲稿共九十四页哦64 2.2.葡萄糖异构酶葡萄糖异构酶 世界上生产规模世界上生产规模最大，应用最为成功最大，应用最为成功的一种固定化酶。的一种固定化酶。第六十四页，讲稿共九十四页哦65二、固定化酶在医学上的应用二、固定化酶在医学上的应用 1.消血栓：消血栓：n纤溶酶是异源蛋白质，在人体内引起免疫反应
24、，纤溶酶是异源蛋白质，在人体内引起免疫反应，无法长期使用。无法长期使用。n酶的不稳定性使其在较短的时间内失活。酶的不稳定性使其在较短的时间内失活。用包埋法制备的酶固定化技术可克服上述弊用包埋法制备的酶固定化技术可克服上述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物质能自由进出。端，酶在囊中不能漏出，小分子物质能自由进出。第六十五页，讲稿共九十四页哦662.2.人工肾：人工肾：原理：将病人血液中的尿素经脲酶水解成原理：将病人血液中的尿素经脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微胶囊活性炭组成人工肾。和微胶囊活性炭组成人工肾。第六十六页，讲稿共九十四页哦67第六十
25、七页，讲稿共九十四页哦681.1.酶传感器酶传感器 固定化酶和电化学传感器的结合。固定化酶和电化学传感器的结合。优点：优点：既有不溶性酶体系的优点，又具有电化学电既有不溶性酶体系的优点，又具有电化学电极的高灵敏度；极的高灵敏度；酶的专一反应性，使其具有较高的选择性，能酶的专一反应性，使其具有较高的选择性，能够直接在复杂试样中进行测定够直接在复杂试样中进行测定。三、在分析检测中的应用三、在分析检测中的应用第六十八页，讲稿共九十四页哦69 SensitiveandspecificSensitiveandspecific RapidRapid SimpleSimpleBiosensorBiosens
26、or第六十九页，讲稿共九十四页哦70 19671967年年UpdikeUpdike等采用酶的固定化技等采用酶的固定化技术，将葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，术，将葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧电极结合，组装成了世界然后再和氧电极结合，组装成了世界上第一个生物传感器上第一个生物传感器葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶电极电极。第七十页，讲稿共九十四页哦71 葡萄糖酶电极 酶电极示意图D葡萄糖葡萄糖O2 D葡萄糖酸葡萄糖酸1，5内酯内酯H2O2半透膜酶胶层感应电极第七十一页，讲稿共九十四页哦72GlucoseGluconicacidGlucoseoxidaseOxygenHydrogenperoxide
27、MembraneElectrode 根据反应中消耗的根据反应中消耗的O O2 2、生成的葡萄糖酸和、生成的葡萄糖酸和H H2 2O O2 2的量，可以的量，可以用氧电极、用氧电极、pHpH电极和电极和H H2 2O O2 2电极来测定葡萄糖的含量。电极来测定葡萄糖的含量。第七十二页，讲稿共九十四页哦73继酶传感器（继酶传感器（enzyme sensorenzyme sensor）后，又出现：）后，又出现：细胞器传感器（细胞器传感器（cell organelle sensorcell organelle sensor）组织传感器（组织传感器（tissue sensortissue sensor）
28、微生物传感器（微生物传感器（microbe sensormicrobe sensor）免疫传感器（免疫传感器（immunosensorimmunosensor）第七十三页，讲稿共九十四页哦741）酶传感器的原理）酶传感器的原理生物传感器生物传感器 由生物识别单元（如酶、微生物、抗体等）由生物识别单元（如酶、微生物、抗体等）和物理转换器相结合所构成的分析仪器。和物理转换器相结合所构成的分析仪器。第七十四页，讲稿共九十四页哦75第七十五页，讲稿共九十四页哦76生物识别元件生物识别元件(Biological recognition element)(Biological recognition el
29、ement)是酶、抗原是酶、抗原(体体)、细胞器、组织切、细胞器、组织切片和微生物细胞等生物分子经固定化后片和微生物细胞等生物分子经固定化后形成的一种膜结构，对被测定的物质有形成的一种膜结构，对被测定的物质有选择性的分子识别能力。选择性的分子识别能力。第七十六页，讲稿共九十四页哦77 换能器换能器(Transducer)(Transducer)将识别元件上进行的生化反应中将识别元件上进行的生化反应中消耗或生成的化学物质，或产生的光消耗或生成的化学物质，或产生的光或热等转换为电信号，并呈现一定的或热等转换为电信号，并呈现一定的比例关系比例关系。第七十七页，讲稿共九十四页哦78第七十八页，讲稿共九
30、十四页哦79酶传感器工作原理示意图酶传感器工作原理示意图酶传感器酶传感器主要由主要由固定化酶膜和变换器固定化酶膜和变换器组成：组成：固定化酶膜：固定化酶膜：选择性地选择性地“识别识别”并催化被检测物质发并催化被检测物质发生化学反应；生化学反应；变换器：变换器：把催化反应中底物或产物的变量转换成电信号，把催化反应中底物或产物的变量转换成电信号，通过仪表显示出来。通过仪表显示出来。第七十九页，讲稿共九十四页哦80第八十页，讲稿共九十四页哦812）酶传感器的应用）酶传感器的应用 水质监测水质监测 用化学法测定酚时，硫化物、油类等用化学法测定酚时，硫化物、油类等可干扰其测定。可干扰其测定。从马铃薯中提
31、纯、经吸附交联得到的从马铃薯中提纯、经吸附交联得到的固定化多酚氧化酶与氧电极构成酚传感器，固定化多酚氧化酶与氧电极构成酚传感器，可检测大多数酚类化合物可检测大多数酚类化合物。第八十一页，讲稿共九十四页哦82德国研发的环境废水德国研发的环境废水BODBOD分析仪分析仪第八十二页，讲稿共九十四页哦83医疗方面医疗方面葡萄糖传感器和血糖测定仪葡萄糖传感器和血糖测定仪 用葡萄糖氧化酶（用葡萄糖氧化酶（glucose glucose oxidase,GODoxidase,GOD）制成葡萄糖传感器，可）制成葡萄糖传感器，可测定血液中葡萄糖浓度。测定血液中葡萄糖浓度。第八十三页，讲稿共九十四页哦84手掌型葡
32、萄糖手掌型葡萄糖(glucose)(glucose)分析仪分析仪第八十四页，讲稿共九十四页哦85SBA-50SBA-50型单电极生物传感分析仪型单电极生物传感分析仪第八十五页，讲稿共九十四页哦86SBA-70型血糖乳酸自动分析仪型血糖乳酸自动分析仪第八十六页，讲稿共九十四页哦87n食品鲜度食品鲜度鱼鲜度传感器鱼鲜度传感器 在日本、加拿大等国广泛用于鱼类鲜度在日本、加拿大等国广泛用于鱼类鲜度的测定。鱼死后体内的测定。鱼死后体内ATPATP经酶解依次形成经酶解依次形成ADPADP、AMPAMP、IMPIMP、肌苷、次黄嘌呤和尿酸。鲜度可、肌苷、次黄嘌呤和尿酸。鲜度可用用K K值表示：值表示：K=K
33、=肌苷肌苷+次黄嘌呤次黄嘌呤/ATP+ADP+AMP+IMP+/ATP+ADP+AMP+IMP+肌苷肌苷+次黄嘌呤次黄嘌呤+尿酸尿酸第八十七页，讲稿共九十四页哦88 大多数鱼死后大多数鱼死后5 520h20h，ATPATP，ADPADP和和AMPAMP已分解尽，超过已分解尽，超过24h24h，鲜度主要取决于，鲜度主要取决于IMP-IMP-肌苷肌苷-次黄嘌呤次黄嘌呤-尿酸。尿酸。将这三个步骤的三种酶（将这三个步骤的三种酶（55核苷酸核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。当当K K2020时，鱼极新
34、鲜，可供生食。时，鱼极新鲜，可供生食。K K在在20204040之间为新鲜，必须熟食。之间为新鲜，必须熟食。K K大于大于4040，不新鲜，不宜食用，这与嗅觉检，不新鲜，不宜食用，这与嗅觉检验结果相一致。验结果相一致。第八十八页，讲稿共九十四页哦89肉鲜度传感器肉鲜度传感器肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺类测定能反映肉类的新鲜程度。类测定能反映肉类的新鲜程度。用用腐胺氧化酶腐胺氧化酶与与过氧化氢电极过氧化氢电极构成多胺生构成多胺生物传感器，或用物传感器，或用单胺氧化酶膜单胺氧化酶膜和和氧电极氧电极组组成的酶传感器测定肉在贮藏过程中的鲜度。成的酶传感器测定
35、肉在贮藏过程中的鲜度。第八十九页，讲稿共九十四页哦90污染微生物及病原菌的检测污染微生物及病原菌的检测1通通过过免免疫疫学学方方法法，即即获获得得相相应应的的特特异异性性抗原和抗体进行分析和检测。抗原和抗体进行分析和检测。第九十页，讲稿共九十四页哦91(1)(1)将适宜的酶与抗原或抗体结合在一起。制成酶标将适宜的酶与抗原或抗体结合在一起。制成酶标抗体（或酶标抗原抗体（或酶标抗原 ）；）；(2)(2)将酶标抗体（或酶标抗原）与样品中的待测抗原将酶标抗体（或酶标抗原）与样品中的待测抗原（或抗体）混合，通过免疫反应二者即可特异性地（或抗体）混合，通过免疫反应二者即可特异性地结合在一起，形成酶抗体抗原复合物。通过酶结合在一起，形成酶抗体抗原复合物。通过酶催化反应的速度即可测定复合物中酶的含量，进而催化反应的速度即可测定复合物中酶的含量，进而测出样品中的待测抗原（或抗体）的量。测出样品中的待测抗原（或抗体）的量。2.2.酶联免疫测定酶联免疫测定 第九十一页，讲稿共九十四页哦92第九十二页，讲稿共九十四页哦93第九十三页，讲稿共九十四页哦感感谢谢大大家家观观看看第九十四页，讲稿共九十四页哦