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1、关于吸光光度法(2)第一页，讲稿共七十三页哦原子吸收光谱法（或吸光光度法或分光光度法）分子吸收光谱法紫外紫外可见光分光光度法可见光分光光度法红外分光光度法红外分光光度法核磁共振谱法核磁共振谱法 1、定义：定义：基于物质对光的选择性吸收的分析方法基于物质对光的选择性吸收的分析方法 吸光光度法概述吸光光度法概述第二页，讲稿共七十三页哦2023/4/22、特点：、特点：（1）灵敏度高：）灵敏度高：10-310-6molL-1，适用微量组适用微量组分的测定。分的测定。（2）准确度高：准确度高：比色分析，相对误差比色分析，相对误差510%，分光光度法，分光光度法，25%；（3）应用广泛：）应用广泛：可测
2、定几乎所有无机物和许多有可测定几乎所有无机物和许多有机物；生产、科研广泛应用。机物；生产、科研广泛应用。（4）操作简便、仪器设备易普及。）操作简便、仪器设备易普及。第三页，讲稿共七十三页哦*3、原理：、原理：利用物质的颜色深浅与浓度的关系确定利用物质的颜色深浅与浓度的关系确定其含量其含量 许多物质具有颜色，许多物质具有颜色，例如例如 MnO4-粉红粉红Cr2O72-橙黄橙黄FeSCN2+血红血红颜色颜色深浅深浅与与浓度浓度有关有关.第四页，讲稿共七十三页哦2023/4/254、光学光谱区、光学光谱区（真空紫外）远红外中红外近红外可见近紫外远紫外10nm200nm中层电子200nm 400nm价
3、电子400nm 800nm价电子800 nm 2.5 m分子振动2.5 m 50 m分子振动50 m 300 m分子转动第五页，讲稿共七十三页哦2023/4/25、可见光：可见光：(1)单色光单色光：某一波长的光：某一波长的光(2)白光白光：七色光按不同比例混合的复合光：七色光按不同比例混合的复合光(3)互补光互补光：按一定比例混合为白光的：按一定比例混合为白光的两种两种光光 紫外紫外|紫紫|蓝蓝|青青|绿绿|黄黄|橙橙|红红|红外红外 400 450 480 500 560 600 650 750 nm 第六页，讲稿共七十三页哦2023/4/26、物质颜色与光、物质颜色与光互补色光：互补色光
4、：把两种适当把两种适当颜色的光按一定的强度比颜色的光按一定的强度比例混合，成为白光，称为例混合，成为白光，称为互补色光。互补色光。v无色：无色：对光谱中各种色光对光谱中各种色光透过程度相同。透过程度相同。v有色：有色：物质的颜色由它物质的颜色由它透过或反射的光决定。透过或反射的光决定。黑色黑色:几乎吸收所有的入射光。几乎吸收所有的入射光。白色白色:几乎全部反射入射光。几乎全部反射入射光。第七页，讲稿共七十三页哦2023/4/28/nm颜色颜色互补光互补光400-450紫黄绿450-480蓝蓝黄黄480-490青蓝青蓝橙橙490-500青青红红500-560绿绿红紫红紫560-580黄绿黄绿紫紫
5、580-610黄黄蓝蓝610-650橙橙青蓝青蓝650-760红红青青不同颜色的可见光波长及其互补光第八页，讲稿共七十三页哦2023/4/2如：如：KMnO4溶液呈紫红色，是因为其吸收了白溶液呈紫红色，是因为其吸收了白光中的绿色光，透过其互补色紫红色光；光中的绿色光，透过其互补色紫红色光；CuSO4溶液呈蓝色，是因为其吸收了黄色光，溶液呈蓝色，是因为其吸收了黄色光，透过其互补色蓝色光。透过其互补色蓝色光。光的互补光的互补：蓝：蓝 黄黄第九页，讲稿共七十三页哦2023/4/28.1 光的吸收基本定律光的吸收基本定律 朗伯朗伯-比尔（比尔（Larnbert-Beer）定律定律一一 朗伯朗伯-比耳定
6、律比耳定律(光吸收的基本定律光吸收的基本定律)1.透光率透光率T和吸光度和吸光度A 当强度为当强度为I0 的一束平行单色光通过任何均匀、非散射的一束平行单色光通过任何均匀、非散射性的吸光物质时，一部分被吸收性的吸光物质时，一部分被吸收(强度为强度为Ia),一部分被透过一部分被透过(强度为强度为It同时还有部分被折射或反射同时还有部分被折射或反射(强度可略强度可略)。则。则第十页，讲稿共七十三页哦2023/4/22.朗伯朗伯-比尔定律比尔定律A=L Lc cA 吸光度吸光度(absorbance)L 介质厚度介质厚度(length/cm)c 浓度浓度(concentration)吸光系数吸光系数
7、(absorptivity)第十一页，讲稿共七十三页哦2023/4/22）吸光系数）吸光系数(Absorptivity)的单位的单位:Lmol-1cm-1当当c的单位用的单位用molL-1表示时，用表示时，用k表示表示.k摩尔吸光系数摩尔吸光系数(Molar absorptivity)A bc 摩尔吸光系数摩尔吸光系数k的物理意义：的物理意义：它表示物质的浓度为它表示物质的浓度为1molL-1、液层的厚度为、液层的厚度为1cm时，溶液的吸光度。通常配制低时，溶液的吸光度。通常配制低浓度的溶液，测得浓度的溶液，测得A后，通过计算求得后，通过计算求得。第十二页，讲稿共七十三页哦2023/4/23）
8、吸光度）吸光度(A)、透光率、透光率(T)与浓度与浓度(c)的关系的关系ATcA=bc线性关系线性关系第十三页，讲稿共七十三页哦2023/4/2（1）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的）吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数特征常数；（2）不随浓度不随浓度c和光程长度和光程长度L的改变而改变的改变而改变。在温度和波长等在温度和波长等条件一定时，条件一定时，仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关；度无关；（3）同一吸收物质在不同波长下的）同一吸收物质在不同波长下的值是不同的。在最大吸收波值是不同的。在最大吸收波长长max处的摩尔吸收系数处的摩尔吸收系数
9、max表明了该表明了该吸收物质最大限度的吸光吸收物质最大限度的吸光能力能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。5.5.摩尔吸收系数摩尔吸收系数的讨论的讨论第十四页，讲稿共七十三页哦2023/4/27.7.朗伯朗伯-比尔定律的分析应用比尔定律的分析应用(Analytical applications of Lambert-Beers law)0 1 2 3 4 mol/LA。*0.80.60.40.20溶液浓度的测定溶液浓度的测定A LcA c工作曲线法工作曲线法(校准曲线校准曲线)Calibration curve第十五页，讲稿共七十三
10、页哦2023/4/2偏离比耳定律的原因偏离比耳定律的原因1.1.现象现象 标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯这种现象称为对朗伯比耳定律的偏离。比耳定律的偏离。2.2.引起偏离的因素引起偏离的因素（两大类）（两大类）（1 1）物理性因素，）物理性因素，即仪器的非理想引起的；即仪器的非理想引起的；（2 2）化学性因素。）化学性因素。第十六页，讲稿共七十三页哦2023/4/2物理性因素：物理性因素：1 1、难以获得真正的纯单色光、难以获得真正的纯单色光。
11、分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯对朗伯比耳定律的正或负偏离。比耳定律的正或负偏离。非单色光、杂散光、非平行入射光非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯都会引起对朗伯比耳定律的偏离，比耳定律的偏离，最最主要的是非单色光作为入射光引起的偏主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。离。第十七页，讲稿共七十三页哦2023/4/22 2、介质不均匀引起的偏离：、介质不均匀引起的偏离：胶体、乳浊液或悬胶体、乳浊液或悬浮物质溶液吸收、散射。浮物质溶液吸收、散射。第十八页，讲稿共七十三页哦2023/4/2(2)(2)化学性因素化学性因
12、素v朗伯朗伯比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；用；仅在稀溶液仅在稀溶液(c10-2 mol L-1时，吸光质点间可能发生缔合等相时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。互作用，直接影响了对光的吸收。故：朗伯故：朗伯比耳定律只适用于稀溶液比耳定律只适用于稀溶液。溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化。等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化。例：例：CrO42-+2H+=Cr2O72-+H2O第十九页，讲稿共七十三页哦2023
13、/4/2v3.朗伯朗伯-比尔定律的适用条件比尔定律的适用条件v1)单色光单色光:应选用应选用 max处测定处测定v2)吸光质点形式不变：吸光质点形式不变：离解、络合、缔合会离解、络合、缔合会破坏线性关系，破坏线性关系，应控制条件应控制条件(酸度、浓度、介酸度、浓度、介质等质等)v3)稀溶液：稀溶液：浓度增大，分子之间作用增强浓度增大，分子之间作用增强第二十页，讲稿共七十三页哦*7、吸收曲线与最大吸收波长、吸收曲线与最大吸收波长 分子结构的复杂性使其对不同波长光的吸收程度不同，分子结构的复杂性使其对不同波长光的吸收程度不同，用不同波长的单色光照射，测吸光度用不同波长的单色光照射，测吸光度 吸收曲
14、线与最大吸吸收曲线与最大吸收波长收波长 max；吸收曲线吸收曲线：测量某种物质对测量某种物质对不同波长单色光的吸收程度，不同波长单色光的吸收程度，以波长为横坐标，吸光度为以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，得到的一条吸收光纵坐标，得到的一条吸收光谱曲线。谱曲线。第二十一页，讲稿共七十三页哦*吸收曲线的讨论：吸收曲线的讨论：（1）同一种物质对不同波）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大处对应的波长称为最大最大吸收波长吸收波长max（2）不同浓度的同一种物）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似质，其吸收曲线形状相似max不变。而对于不同物质，不
15、变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和它们的吸收曲线形状和max则不同，则不同，判断干扰。判断干扰。（3）吸收曲线可以提供物质）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质的结构信息，并作为物质定性定性分析分析的依据之一。的依据之一。第二十二页，讲稿共七十三页哦*吸收曲线的讨论：吸收曲线的讨论：（4）不同浓度的同一种物质，不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度在某一定波长下吸光度 A 有差有差异，在异，在max处吸光度处吸光度A 的差的差异最大。此特性可作为物异最大。此特性可作为物质质定量分析定量分析的依据。的依据。（5）在在max处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定处吸光度随浓度变化的
16、幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长选择入射光波长的重要的重要依据。依据。第二十三页，讲稿共七十三页哦2023/4/28.2 目视比色法、分光光度法及光度计目视比色法、分光光度法及光度计一、目视比色法一、目视比色法v1、定义：、定义：用眼睛比较溶液颜色深浅以测用眼睛比较溶液颜色深浅以测定物质含量的方法定物质含量的方法。v2、优点：、优点：设备简单，操作方便，不要求设备简单，操作方便，不要求严格遵守比尔定律严格遵守比尔定律。v3、用途、用途:用在要求不高的常规分析中用在要求不高的常规分析中。v4、缺点：、缺点：准确度不高，标准系列制作麻准确度不
17、高，标准系列制作麻烦，容易受干扰烦，容易受干扰。第二十四页，讲稿共七十三页哦2023/4/25、测定方法：、测定方法：标准系列法标准系列法。1）用同质材料的比色管）用同质材料的比色管 2）配制不同量的标准溶液）配制不同量的标准溶液 3）同量的显色剂，相同的实验条件，配成）同量的显色剂，相同的实验条件，配成一套标准色阶一套标准色阶 4）待测物与标准色阶的配制条件相同，置于色）待测物与标准色阶的配制条件相同，置于色阶中比较颜色度阶中比较颜色度 第二十五页，讲稿共七十三页哦2023/4/2方便、灵敏，准确度差。常用于限界分析。方便、灵敏，准确度差。常用于限界分析。观察方向观察方向目视比色法目视比色法
18、c4c3c2c1c1c2c3c4第二十六页，讲稿共七十三页哦2023/4/2二二.光电比色法光电比色法(colorimetry)通过滤光片通过滤光片(filter)得一窄范围的光得一窄范围的光(几十几十nm)光电比色计结构示意图光电比色计结构示意图灵敏度和灵敏度和准确度较准确度较差差第二十七页，讲稿共七十三页哦2023/4/2三三.吸光光度法吸光光度法(spectrophotometer)光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测系统检测系统稳压电源稳压电源通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光.波长可调波长可调,故选择性好故选择性好,准确度高准确度高.分光光度法的基本
19、部件第二十八页，讲稿共七十三页哦2023/4/2 吸光光度分析法中几种方法对比吸光光度分析法中几种方法对比方法方法原理原理入射光入射光单色器单色器检测量检测量常用常用仪器仪器特点特点目视比色目视比色A=Kbc标准系列标准系列复合光复合光透过光透过光强度强度比色比色管管简便易行简便易行 快速、准快速、准确度低确度低光电比色光电比色A=Kbc标准曲线标准曲线单色光单色光滤光片滤光片吸光度吸光度透光率透光率光电光电比色比色计计准确度准确度较高较高分光光度分光光度A=Kbc标准曲线标准曲线单色光单色光 棱镜棱镜或光栅或光栅吸光度吸光度透光度透光度分光分光光度光度计计准确度高准确度高应用广泛应用广泛第二
20、十九页，讲稿共七十三页哦2023/4/2 光度分析仪器的基本部件光度分析仪器的基本部件无论是光电比色计或分光光度计，都是由以下基本部件组成：无论是光电比色计或分光光度计，都是由以下基本部件组成：光源光源 单单 色色 器器 比色皿比色皿 光电转换器光电转换器 检测器检测器作用作用产生复合光产生复合光 把复合光变把复合光变 盛待测液盛待测液 将透过光转将透过光转 测量光电流并测量光电流并 成单色光成单色光 变为光电流变为光电流 将其转为将其转为A、T 常用常用 6-12v钨丝灯钨丝灯 滤光片滤光片 光学玻璃光学玻璃 光电池、光电池、光电管光电管元件元件 棱镜棱镜 或光栅或光栅 石英玻璃、石英玻璃、
21、光电倍增管光电倍增管 光学玻璃光学玻璃第三十页，讲稿共七十三页哦2023/4/2四、光度计及其基本部件四、光度计及其基本部件 分光光度计分光光度计第三十一页，讲稿共七十三页哦2023/4/2分光光度计分光光度计第三十二页，讲稿共七十三页哦2023/4/2 基本组成基本组成第三十三页，讲稿共七十三页哦2023/4/2 主要部件图示：主要部件图示：第三十四页，讲稿共七十三页哦2023/4/2351.光源光源(Light source)：发出所需波长范围内的连续：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够的光强度光谱，有足够的光强度,稳定。稳定。可见光区：可见光区：钨灯，碘钨灯钨灯，碘钨灯(320(320
22、 2500 nm)2500 nm)紫外区：紫外区：氢灯，氘灯氢灯，氘灯(180(180 375 nm)375 nm)2.单色器单色器(monochromator)：将光源发出的连续光：将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。谱分解为单色光的装置。棱镜棱镜:玻璃玻璃350 350 3200 nm,3200 nm,石英石英185 185 4000 nm4000 nm光栅光栅:波长范围宽波长范围宽,色散均匀色散均匀,分辨性能好分辨性能好,使用方便使用方便第三十五页，讲稿共七十三页哦2023/4/236 单色器单色器入射狭缝：入射狭缝：光源的光由此进入单色器；光源的光由此进入单色器；准光装置：准光装置
23、：透镜或返射镜使入射光成为平行透镜或返射镜使入射光成为平行 光束；光束；色散元件：色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或将复合光分解成单色光；棱镜或 光栅；光栅；聚焦装置：聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得透镜或凹面反射镜，将分光后所得 单色光聚焦至出射狭缝；单色光聚焦至出射狭缝；出射狭缝：出射狭缝：第三十六页，讲稿共七十三页哦2023/4/237单色器单色器棱镜：依据不同波长光通过棱镜时折射率不同800 600 500400第三十七页，讲稿共七十三页哦2023/4/238光栅：光栅：在镀铝的玻璃表面刻有数量很大的等宽度等间距条痕(600、1200、2400条/mm)。M1M2出射狭缝光
24、屏透镜平面透射光栅光栅衍射示意图原理：利用光通过光栅时发生衍射和干涉现象而分光.第三十八页，讲稿共七十三页哦2023/4/239光栅光栅第三十九页，讲稿共七十三页哦2023/4/2光栅光栅第四十页，讲稿共七十三页哦2023/4/2第四十一页，讲稿共七十三页哦2023/4/23.样品室 样品室放置各种类型样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。应的池架附件。吸收池主吸收池主要有石英池和玻璃池两要有石英池和玻璃池两种。种。在紫外区须采用石在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻英池，可见区一般用玻璃池。璃池。第四十二页，讲稿共七十三页哦2023/4/24.检测系统检
25、测系统 将光强度转换成电流来进行测量将光强度转换成电流来进行测量,用光电检测器测量。用光电检测器测量。要求：对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应，要求：对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应，产生的光电流应与照射于检测器上的光强度成正比。产生的光电流应与照射于检测器上的光强度成正比。第四十三页，讲稿共七十三页哦2023/4/28.3显色反应及显色条件的选择显色反应及显色条件的选择v显色反应：显色反应：将待测组分转变为有色化合物的反应将待测组分转变为有色化合物的反应。v显色剂：显色剂：与待测组分形成有色化合物的试剂。与待测组分形成有色化合物的试剂。v8.3.1 显色反应的选择：显色反应的选择：
26、v1)、显色反应的类型：、显色反应的类型：配位反应和氧化还原反应。配位反应和氧化还原反应。第四十四页，讲稿共七十三页哦2023/4/22)、对显色反应的要求：、对显色反应的要求：灵敏度足够高灵敏度足够高:105 超高灵敏，超高灵敏，=(610)104 高灵敏高灵敏,=(26)104中等，中等，2104不灵敏不灵敏选择性好：显色剂只与一组分（或少数组分）显色选择性好：显色剂只与一组分（或少数组分）显色显色剂在测定波长处无明显吸收，显色剂在测定波长处无明显吸收，试剂空白小。试剂空白小。对比度：对比度：两有色物质最大吸收波长之差两有色物质最大吸收波长之差=|MAXMR-MAXR|60nm化合物组成及
27、化学性质稳定以及选择性好干扰小。化合物组成及化学性质稳定以及选择性好干扰小。第四十五页，讲稿共七十三页哦2023/4/22.显色剂显色剂无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵等。无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵等。有机显色剂：种类繁多有机显色剂：种类繁多偶氮类显色剂：性质稳定、显色反应灵敏度高、选择性好、对偶氮类显色剂：性质稳定、显色反应灵敏度高、选择性好、对比度大，应用最广泛。双硫腙、偶氮胂比度大，应用最广泛。双硫腙、偶氮胂IIIIII、PARPAR等。等。三三苯甲烷类：铬天青苯甲烷类：铬天青S S、二甲酚橙等、二甲酚橙等第四十六页，讲稿共七十三页哦2023/4/23.显色条件的选择显色条件的选择cRcR
28、cR1).显色剂用量显色剂用量(cM、pH一定一定)Mo(SCN)32+浅红浅红;Mo(SCN)5 橙红橙红;Mo(SCN)6-浅红浅红Fe(SCN)n3-n用量范围宽用量范围窄严格控制R量第四十七页，讲稿共七十三页哦2023/4/22).显色反应酸度（显色反应酸度（cM、cR一定）一定）pH1pH10+H2D2 红色 518 Pb2+pH8-9+H2D2 粉色 510 Hg2+pH6+H2D2 橙色 485 2.加入掩蔽剂 测Hg2+H2D2+(EDTA-Bi3+/KSCN-Ag+)Sr-mBCZm+硫脲-Cu/磺基水扬酸Al Fe 第五十一页，讲稿共七十三页哦2023/4/2523.利用氧
29、化还原反应,改变干扰离子价态 铬天青S+Al3+Vc-Fe3+Fe2+消除Fe3+的干扰 4.利用生成惰性络合物 Ni2+pH=2 NiR 分解 Ni2+Fe3+Zn2+5.分离干扰元素 6.利用校正系数 7.利用参比液消除显色剂,试剂带入的干扰 8.选择适当的测量波长 第五十二页，讲稿共七十三页哦2023/4/2化学法化学法 Co2,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2(蓝蓝)NaFSCNCo2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN测测Co2(含含Fe3+)掩蔽法掩蔽法氧化还原法氧化还原法例例:第五十三页，讲稿共七十三页哦2023/4/2测测Co2(生成络合物性质不
30、同生成络合物性质不同)Co2+,Zn2+,Ni2+,Fe2+CoR,ZnR NiR,FeRCoR,Zn2+,Ni2+,Fe2+钴试剂钴试剂RH+如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰，则需采取分离法。扰，则需采取分离法。测测Fe3(控制控制pH)Fe3+,Cu2+FeSS（紫红）（紫红）Cu2+pH 2.5SS磺基水杨酸磺基水杨酸第五十四页，讲稿共七十三页哦2023/4/2 8.4 测量条件的选择测量条件的选择 8.4.1.选择适当的测定波长选择适当的测定波长515655钍钍-偶氮砷偶氮砷III A络合物络合物试剂试剂415500钴钴-亚硝基红盐亚硝基红盐
31、A络合物络合物试剂试剂第五十五页，讲稿共七十三页哦2023/4/22 2）参比溶液）参比溶液(空白溶液空白溶液)的选择：的选择：v注：注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和界面反射等因素对透光率的干扰的散射和界面反射等因素对透光率的干扰第五十六页，讲稿共七十三页哦2023/4/28.4.3:8.4.3:吸光度读数范围的选择吸光度读数范围的选择v选A=0.20.8 T 在在 20%65%之间时之间时,浓度浓度相对误差较小，相对误差较小，最佳读数范围最佳读数范围v浓度相对误差最小时的透射比浓度相对误差最小时的透射比Tmin为：为：v Tmin 36
32、.8%,Amin 0.434 通过改变吸收池厚度或待测液浓度，使吸光度读数处通过改变吸收池厚度或待测液浓度，使吸光度读数处在适宜范围。普通分光光度法不适于高含量或极低含量物质在适宜范围。普通分光光度法不适于高含量或极低含量物质的测定。的测定。第五十七页，讲稿共七十三页哦2023/4/2标准曲线的制作标准曲线的制作v1、制作依据：、制作依据：比尔定律比尔定律 A=bcv吸光度与吸光物质的含量呈正比关系吸光度与吸光物质的含量呈正比关系v2、制作方法：、制作方法：在选择的实验条件下，从低浓度到高浓在选择的实验条件下，从低浓度到高浓度分别测量一系列（不少于度分别测量一系列（不少于5）不同含量的标准溶液
33、的）不同含量的标准溶液的吸光度，以标准溶液中待测组分的含量为横坐标，吸光吸光度，以标准溶液中待测组分的含量为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，称为标准度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，称为标准曲线（或工作曲线）。此时再测量待测溶液的吸光度，曲线（或工作曲线）。此时再测量待测溶液的吸光度，在标准曲线上就可以查到与之相对应的被测物质的含量。在标准曲线上就可以查到与之相对应的被测物质的含量。v3、标准曲线不通过原点原因：、标准曲线不通过原点原因：参比选择不当；吸收池厚参比选择不当；吸收池厚度不等；吸收池位置不妥；吸收池不清洁等。度不等；吸收池位置不妥；吸收池不清洁等。8.5
34、吸光光度法的应用第五十八页，讲稿共七十三页哦2023/4/2第五十九页，讲稿共七十三页哦2023/4/2一、天然水中亚铁离子的测定一、天然水中亚铁离子的测定二、饮用水中二氧化氯的测定二、饮用水中二氧化氯的测定第六十页，讲稿共七十三页哦双硫腙分光光度法测镉双硫腙分光光度法测镉在强碱性介质中，镉离子与双硫腙反应，生成在强碱性介质中，镉离子与双硫腙反应，生成红红色螯合物色螯合物，用，用CHClCHCl3 3萃取分离后，于萃取分离后，于518nm518nm处测定处测定其吸光度，标准曲线定量。其吸光度，标准曲线定量。第六十一页，讲稿共七十三页哦汞（日本水俣病）（一）双硫腙分光光度法（二）冷原子吸收法 （
35、三）冷原子荧光法第六十二页，讲稿共七十三页哦v采样时，每采集采样时，每采集1升水样应立即加入升水样应立即加入10ml硫酸硫酸或或7ml硝酸，使水样硝酸，使水样pH值低于或等于值低于或等于1。若取。若取样后不能立即进行测定，向每升样品中加入样后不能立即进行测定，向每升样品中加入5%高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液4ml，必要时多加一些，使其，必要时多加一些，使其呈现持久的淡红色。样品贮存于硼硅酸玻璃瓶呈现持久的淡红色。样品贮存于硼硅酸玻璃瓶中，废水样品应加酸至中，废水样品应加酸至1%。测汞水样的保存与处理第六十三页，讲稿共七十三页哦 双硫腙分光光度法测汞原理有机汞无机汞H+,氧化剂95测其吸光度测其吸光
36、度标准曲线定量标准曲线定量HgHg2+2+双硫腙溶液485nm橙色橙色螯合物螯合物CCl4 萃取酸性介质第六十四页，讲稿共七十三页哦4-氨基安替比林分光光度法测定微量酚v测定原理：测定原理：pH10.00.2pH10.00.2的介质中，在铁氰化的介质中，在铁氰化钾的存在下，酚类化合物与钾的存在下，酚类化合物与4-4-氨基安替比林氨基安替比林（4-AAP4-AAP）反应，生成）反应，生成橙红色橙红色的吲哚酚安替比的吲哚酚安替比林染料，在林染料，在510nm510nm波长处有最大吸收，用比色波长处有最大吸收，用比色法定量。该法所测酚类不是总酚，而只是与法定量。该法所测酚类不是总酚，而只是与4-AA
37、P4-AAP显色的酚，并以苯酚为标准，结果以苯显色的酚，并以苯酚为标准，结果以苯酚计算含量。酚计算含量。第六十五页，讲稿共七十三页哦（一）氨氮（一）氨氮1、测定意义：有助于评价水体被污染和自净状况、测定意义：有助于评价水体被污染和自净状况2、测定方法、测定方法 1）水样采集与保存、预处理：絮凝沉淀法、蒸馏法）水样采集与保存、预处理：絮凝沉淀法、蒸馏法 2）测定）测定光度法离子选择电极法蒸馏及滴定法纳氏试剂光度法水杨酸-次氯酸盐光度法气相分子吸收光谱法第六十六页，讲稿共七十三页哦v水样带色或浑浊以及含有其他一些干扰物质，水样带色或浑浊以及含有其他一些干扰物质，影响氨氮测定。较清洁水样采用絮凝沉淀
38、法；影响氨氮测定。较清洁水样采用絮凝沉淀法；污染较重的水或工业废水，用蒸馏法消除干污染较重的水或工业废水，用蒸馏法消除干扰。扰。v絮凝沉淀法：加适量硫酸锌于水样中，并加絮凝沉淀法：加适量硫酸锌于水样中，并加氢氧化钠使呈碱性，生成氢氧化锌沉淀，再氢氧化钠使呈碱性，生成氢氧化锌沉淀，再经过过滤除去颜色和浑浊等。经过过滤除去颜色和浑浊等。第六十七页，讲稿共七十三页哦v蒸馏法：调节水样蒸馏法：调节水样pH在在6.07.4的范围内，加的范围内，加入适量氧化镁使溶液呈微碱性，蒸馏释放出入适量氧化镁使溶液呈微碱性，蒸馏释放出的氨被吸收于硫酸或硼酸溶液中，采用纳氏的氨被吸收于硫酸或硼酸溶液中，采用纳氏试剂分光
39、光度法或酸滴定时，以硼酸溶液为试剂分光光度法或酸滴定时，以硼酸溶液为吸收液；采用水杨酸吸收液；采用水杨酸-次氯酸盐比色法时，以次氯酸盐比色法时，以硫酸溶液为吸收液。硫酸溶液为吸收液。第六十八页，讲稿共七十三页哦（一）一）氨氮氨氮 纳氏试剂光度法纳氏试剂光度法2K2HgI4+3KOH+NH3NH2Hg2IO+7KI+2H2O黄棕色410425nm420nm比色定量原理第六十九页，讲稿共七十三页哦水杨酸水杨酸-次氯酸光度法（次氯酸光度法（NH3）原理 在亚硝基铁氰化钠存在下，在亚硝基铁氰化钠存在下，氨与水杨酸和次氯酸反应生成氨与水杨酸和次氯酸反应生成蓝色化合物697nm比色定量比色定量第七十页，讲
40、稿共七十三页哦（二）亚硝酸盐氮（二）亚硝酸盐氮1、N-(1-萘基）萘基）-乙二胺分光光度法乙二胺分光光度法pH1.80.3，亚硝酸盐亚硝酸盐+对氨基苯磺酰胺生成重氮对氨基苯磺酰胺生成重氮盐，再与显色剂偶联盐，再与显色剂偶联红色染料540nm比色测定比色测定第七十一页，讲稿共七十三页哦（三）硝酸盐氮（三）硝酸盐氮无水，硝酸盐无水，硝酸盐+酚二磺酸酚二磺酸 硝基二磺酸酚硝基二磺酸酚黄色物质黄色物质410nm比色测定OH1、酚二磺酸分光光度法、酚二磺酸分光光度法2、镉柱还原法、镉柱还原法3、戴氏合金法、戴氏合金法4、紫外分光光度法、紫外分光光度法第七十二页，讲稿共七十三页哦2023/4/2感感谢谢大大家家观观看看第七十三页，讲稿共七十三页哦